Características de las células dendríticas antes y después de la banda gástrica

La obesidad sigue siendo una fuente importante de morbilidad y mortalidad en los Estados Unidos. La asociación entre la obesidad y la diabetes tipo II es bien conocida. Varios estudios sugieren que la grasa puede generar una respuesta inflamatoria de bajo grado que puede ser responsable de los cambios metabólicos en pacientes obesos. Más específicamente, un cierto tipo de glóbulo blanco que causa inflamación llamado célula dendrítica se ha encontrado en altas concentraciones en la grasa omental. Esta célula no se ha estudiado de forma exhaustiva en pacientes humanos con obesidad mórbida, aunque puede desempeñar un papel central en el desarrollo de la resistencia a la insulina. Además de la pérdida de peso, el tratamiento quirúrgico de la obesidad también produce una disminución de los marcadores de inflamación. Muchas de las comorbilidades de la obesidad mórbida mejoran o se curan. La banda gástrica ajustable laparoscópica es más segura que otros procedimientos de derivación gástrica y da como resultado cantidades similares de pérdida de peso después de 2 años después de la operación.

Gran parte del trabajo relacionado con las células dendríticas en sujetos humanos se ha realizado en pacientes con la enfermedad de Crohn. Tanto el perfil de citoquinas como las características de las células dendríticas se han estudiado ampliamente en pacientes con enfermedad de Crohn, pero no en individuos obesos. Además de esto, estas células no han sido reevaluadas después de un período de pérdida de peso.

Un análisis más detallado de la inflamación de la obesidad y su posterior resolución con la pérdida de peso contribuirá al creciente cuerpo de información sobre este tema. El trabajo adicional brindará información sobre la patogenia de las comorbilidades de la obesidad y puede contribuir a descubrir posibles tratamientos para estas enfermedades. Las células dendríticas han sido ampliamente estudiadas en modelos animales. Ahora conocemos marcadores de superficie celular específicos y vías de señalización para estas células, sus respuestas a factores estimulantes y su capacidad para secretar citoquinas antiinflamatorias como IL-10. Esperamos traducir estos hallazgos a los humanos.

Ahora se reconoce que la inflamación crónica de bajo grado es el elemento crítico que conduce a la resistencia a la insulina en las células diana de la insulina. La evidencia de esto es sustancial, incluidas mediciones consistentes de marcadores inflamatorios elevados en plasma de humanos y roedores con resistencia a la insulina/diabéticos. Este concepto fue establecido por el reciente descubrimiento de que el tejido adiposo obeso contiene un gran número de macrófagos residentes. De hecho, en estado magro, alrededor del 10% de todos los tipos de células dentro del tejido adiposo consisten en macrófagos, y este número puede llegar hasta el 50% en la obesidad. Además, la clasificación FACS de macrófagos de tejido adiposo basada en marcadores de superficie ha indicado que es una subpoblación de macrófagos la que explica este notable aumento. Esta subpoblación incluye macrófagos que son positivos para F4/80, CD11B y CD11C y son, por lo tanto, de tipo dendrítico en su fenotipo. También hay informes en la literatura que sugieren que el tejido adiposo visceral puede estar particularmente "inflamado" en comparación con el tejido adiposo subcutáneo y que el aumento de la infiltración de macrófagos y los marcadores inflamatorios se expresan en la grasa visceral. La evidencia más reciente, en la que la vía inflamatoria de los macrófagos está específicamente desactivada, en ratones knock-out, demuestra de manera concluyente que el macrófago puede ser el tipo de célula iniciadora u orquestadora responsable de la respuesta inflamatoria que finalmente conduce a la resistencia sistémica a la insulina.

Estos conceptos se evaluarán al utilizar las muestras de grasa subcutánea y visceral obtenidas bajo este protocolo. Las muestras de tejido adiposo serán digeridas con colagenasa para liberar todos los tipos de células adipocitos y no adipocitos dentro del tejido. Usando centrifugación diferencial y filtración, la fracción vascular estromal (SVF) se separará de los adipocitos. El SVF contiene los macrófagos, y estas células se someterán a un análisis FACS basado en la expresión de F4/80, CD11B y CD11C para determinar el número absoluto de macrófagos dentro de una muestra de tejido adiposo determinada y la proporción de macrófagos clásicos frente a células dendríticas. macrófagos A continuación, se clasificarán las células y se medirá la expresión del marcador inflamatorio en los macrófagos clásicos (F4/80 positivo, CD11B positivo, pero CD11C negativo) frente a las células dendríticas (F480 positivo, CD11B positivo y CD11C positivo). Este análisis implicará la medición directa de la expresión de citoquinas por parte de estas células (TNF, IL-1 e IL-6), así como mediciones basadas en PCR de la expresión de ARNm de los componentes de la vía inflamatoria. Estas mediciones se realizarán en el tejido adiposo subcutáneo y visceral obtenido en el momento de la cirugía inicial, así como en las muestras de tejido adiposo subcutáneo en el seguimiento después de la reducción de peso.