Studie účinnosti pioglitazonu a metforminu a souvislost mezi odpovědí na pioglitazon a variantami genu receptoru aktivovaného peroxizomovým proliferátorem u pacientů s bangladéšským diabetes mellitus 2. typu (T2DMCT)

1. Úvod Thiazolidindiony a metformin jsou známá léčiva a zejména metformin je široce používaný lék k léčbě lidí s T2DM. Ačkoli byl pioglitazon v mnoha zemích pozastaven, jeho bezpečnost a účinnost je předmětem výzkumu pro výzkumníky drog. Thiazolidindiony byly zavedeny v roce 1997 jako perorální antidiabetikum (OAD). Metformin se používá jako klíčová sloučenina k léčbě T2DM po mnoho let a je celosvětově nejčastěji předepisovanou OAD. Jak metformin, tak thiazolidindiony jsou považovány za „senzibilizátory inzulínu“. Dysfunkce ß-buněk a inzulinová rezistence jsou základními defekty v progresi T2DM s přidruženým metabolickým syndromem. Důkazy naznačují, že pioglitazon snižuje glukózu v krvi zvýšením vychytávání glukózy do buněk a metformin snížením produkce glukózy. V klinických studiích však existuje mnoho kontroverzí, zejména o zlepšení účinku metforminu na inzulín. Naproti tomu výzkum doporučil jako nejvhodnější OAD pro jihoasijskou populaci pioglitazon. Klíčem k tomuto argumentu je, že vzhledem k tomu, že pioglitazon je proliferátorem aktivovaný receptor gama (PPAR-γ nebo PPARG) [skupina proteinů nukleárních receptorů, které fungují jako transkripční faktory regulující expresi genů] agonista a snižuje inzulínovou rezistenci, celková kontrola glykémie se zdá být lepší s tímto thiazolidindionem. Existuje však velmi málo publikovaných dokumentů o účinnosti a bezpečnosti těchto léků u Jihoasijců. Pokud je nám známo, neexistuje žádná publikovaná práce, která by zkoumala a porovnávala účinnost a bezpečnost těchto dvou léků u bangladéšských pacientů T2DM. Tato dvojitě zaslepená cesta proto zkoumala účinnost a bezpečnost pioglitazonu a metforminu u jedinců s T2DM a také souvislost účinků pioglitazonu a variant PPARG. Porovnali jsme účinky pioglitazonu s metforminem na biomedicínské proměnné u pacientů s T2DM, kteří byli vhodní pro perorální hypoglykemickou léčbu, a poté jsme také analyzovali souvislost mezi účinky pioglitazonu a variant PPARG.

2. Metodologie

   1. Studijní nastavení:

      Studie probíhala od listopadu 2008 do září 2010. Účastníci této studie se rekrutovali z venkovní nemocnice BIRDEM v Dháce v Bangladéši.

   2. Subjekty I. Jednotlivci, u kterých byla diagnostikována T2DM léčba dietou/cvičením nebo metforminem 850 mg nebo pioglitazonem 30 mg jednou denně a navštěvovali Outdoor Patient Department (OPD) BIRDEM za účelem konzultace, byli výzkumníkem osloveni a pozváni k účasti ve studii. . Pacienti již byli diagnostikováni a registrováni v BIRDEM. T2DM byl zjištěn na základě kritérií doporučených Světovou zdravotnickou organizací dvěma opakovanými měřeními hladovění (glukóza v plazmě ≥7,0 mmol ⁄ l nebo 2-hodinová glukóza v plazmě ≥11,1 mmol ⁄ l.)

      II. Vyšetřili jsme celkem 130 pacientů z hlediska způsobilosti a vybrali jsme 80 pacientů k zařazení na základě našich kritérií pro zařazení a vyloučení. Ale 77 pacientů s T2DM s hladinou HbA1c < 7,5 %, BMI kg/m2 ≥ 25, SGPT≤ 100 IU/L, kreatininem ≤ 1,2 mg/dl) obou pohlaví, ve věku 40–50 let, léčených monoterapií pioglitazonem nebo metforminem lék pro zkoušku podle kritérií pro zařazení a vyloučení. 53 pacientů selhalo při screeningu, protože někteří nesplňovali kritéria způsobilosti (n=39), někteří se odmítli zúčastnit (n=11) a někteří se nemohli zúčastnit (n=03) z neznámé příčiny.

   3. Příprava pacienta:

      I. Před vstupem do studie byl od všech účastníků získán písemný informovaný souhlas. Pacienti byli instruováni, aby dodržovali dietu orientovanou na onemocnění a hmotnost v průběhu studie jako dříve.

      II. Každý případ byl zdokumentován ve formuláři kazuistiky. Studie byla schválena National Medical Ethics Review Boards (NMERB) Bangladéšské lékařské výzkumné rady (BMRC). Šetření byla provedena v souladu se zásadami Helsinské deklarace revidované v roce 2000.

   4. Léčba:

      Pacienti měli dostávat léčbu pioglitazonem v tabletě 001 (30 mg jednou denně) po dobu 3 měsíců, po nichž následovalo jednoměsíční „období vymytí metforminu“, poté na další 3 měsíce alternativní léčebný režim s tabletou metforminu 002 (850 mg jednou denně). . Léky dodala společnost Aristopharma Pharmaceutical Ltd., Bangladéš.

   5. Antropometrická měření I. Výška: Výška vestoje byla měřena pomocí vhodných vah (Detect-Medic, Detect scales INC, USA) bez bot.

      II. Hmotnost: Váha byla měřena tak, že váha byla umístěna na tvrdý rovný povrch a před měřením byla zkontrolována nulová rovnováha. Subjekty byly uprostřed plošiny v lehkém oblečení bez bot.

      III.BMI: Indexy tělesné hmotnosti (BMI) subjektů byly vypočteny pomocí standardního vzorce: BMI = hmotnost (kg)/[výška (m)] 2.

      IV. Krevní tlak: Systémový a diastolický tlak byl měřen podle WHO-IHS.

   6. Odběr vzorků krve pro biochemickou analýzu:

      I. Ve stanoveném termínu pacienti přišli nalačno. Vzorky krve nalačno (10 ml) byly odebrány z antekubitální žíly. Čas byl uveden jako 0 hodin. Poté pacienti dostali lék. Byli požádáni, aby spolkli tabletu a nasnídali se podle jídelníčku. Další vzorek krve byl odebrán ve 30 minutách a 2 hodinách a poté jim byly poskytnuty léky na celý měsíc.

      II. Pacienti byli požádáni, aby užívali lék těsně před snídaní každý den po dobu 29 dnů.

      III. Ze vzorku krve nalačno byl 1 ml krve přenesen do zkumavky obsahující EDTA pro měření HbA1C a zbytek krve byl odebrán do zkumavky obsahující EDTA a ihned odstředěn.

      IV. Vzorky po zpracování byly rozděleny na dva alikvoty za sterilních podmínek; jeden alikvot byl odeslán k biochemické analýze na glykémii nalačno, lipidový profil, cholesterol, ALT, inzulín, kreatinin a další byl skladován při -80 0C pro další ověření výsledků v v případě jakékoli nutnosti.

   7. Biochemické testovací metody:

      I. Sérová glukóza (nalačno, 1 a 2 hodiny) metodou glukózooxidázy (GOD-PAP) (Randox Laboratories Ltd., UK).

      II. Sérové ​​triglyceridy enzymatickou kolorimetrickou (GPO-PAP) metodou (Randox Laboratories Ltd., UK).

      III. Celkový cholesterol v séru metodou enzymatického koncového bodu (Cholesterol Oxidase/Peroxidase) (Randox Laboratories Ltd., UK).

      IV. Sérový HDL cholesterol enzymatickou kolorimetrickou metodou (Cholesterol CHOD-PAP) (Randox Laboratories Ltd., UK) za použití čtečky mikrotitračních destiček (Bio-Tec, ELISA).

      V. Sérový kreatinin enzymatickou kolorimetrickou (GPO-PAP) metodou (Randox Laboratories Ltd., UK).

      VI. Sérová alaninaminotransferáza (ALT) UV metodou s použitím ALT (GPT) opt.kit (Randox Laboratories Ltd., UK).

      VII. Inzulín v séru metodou ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) (Linco Research Inc., USA).

      VIII. Glykosylovaný hemoglobin (HbA1c) metodou High Performance Liquid Chromatographic (HPLC).

   8. Odběr vzorku krve pro analýzu DNA (gen PPARG):

   I. Na konci 3. měsíce každého ošetření bylo odebráno 1,5 ml krve do zkumavky obsahující EDTA pro genetickou analýzu a vzorek plné krve byl odebrán do vakuové odběrové zkumavky obsahující EDTA, skladované při -20 °C až -80 °C.

   II.DNA byla izolována metodou Chelex, identifikována metodou elektroforézy a amplifikována pomocí primerů. Použili jsme publikovaný dokument k výběru primerů pro genotypizaci PPARy Pro12Ala/Pro12Pro. Primery pro genotyp Pro12Ala SNP jsme amplifikovali exon B pomocí reverzního primeru 5' CTG GAA GAC AAA CTA CAA GAG 3' a přímého primeru 5' ACT CTG GGA GAT TCT CCT ATT GGC 3'. (Výrobek Sigma, obj. č. SIGMA 03/11/09 4152936-F/185 PPARG-R 8006875247-1).

   III. Kontrolní DNA: Laboratoř profesora Colina Palmera, Biomedical Research Institute, University of Dundee Medical School, University of Dundee, Skotsko, Velká Británie zaslala šest kontrolních vzorků 3 typů kontrolní DNA genotypizované pro PPARG SNP rs 1801282 (Pro12Ala).

   IV. Restrikční trávicí enzym Endonukleáza Hae 111 byla použita k identifikaci místa řezání (Sigma Product No. R 5628).

3. Míra odezvy:

1. Míra odpovědi byla definována poklesem o ≥ 10 % FBG nebo poklesem o ≥ 1 % HbA1c oproti výchozím hodnotám.

11. Existovala další skupina odpovědí, která byla definována mírou HbA1c <7,0 % po 3 měsících léčby metforminem, pouze za účelem zjištění míry sekundárního selhání metforminu.

4) Statistická analýza: I. Statistická analýza byla provedena pomocí softwaru SPSS (Statistical Package for Social Science) pro Windows verze 18 (SPSS Inc, Chicago, Illinois, USA). Data byla vyjádřena jako průměr + SD (standardní odchylka).

II. Účinky léků po 3 měsících léčby byly analyzovány pomocí t pair testů. Skupiny byly porovnány pomocí jednosměrné ANOVA. Pokud byla hodnota p < 0,05, byly skupiny porovnány pomocí studentova t testu pro nepárové vzorky nebo χ2 testu pomocí jednorozměrné analýzy pro další ověření. Korelační koeficient mezi proměnnými byl testován pomocí Pearsonova testu. Byla provedena mnohorozměrná logistická regresní analýza, aby se získaly poměry šancí a nezávislý ovlivňující faktor pro nalezení možné asociace mezi genotypy PPARy a lékovou odpovědí v případě genetické analýzy.

III.A p hodnota <0,05 byla považována za významnou pro všechny testy. lv. Statistická analýza pro skupinovou studii, jako je skupina odpovědí PPARG a skupina sekundárního selhání metforminu, zde nebyla zobrazena.

5) Seznam zkratek

Nežádoucí příhody AE

ALT Alaninaminotransferáza

BMI index tělesné hmotnosti

BMRC Bangladéšská rada pro lékařský výzkum

BIRDEM Bangladéšský institut pro výzkum a rehabilitaci diabetu, endokrinních a metabolických poruch

BP krevní tlak

DNA deoxynukleová kyselina

Diastolický krevní tlak DBP

DM Diabetes Mellitus

EASD Evropská asociace pro studium diabetu

EDTA Ethylen Diamin Tetra Kyselina octová

ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay

FBG/FSG Glukóza nalačno/Glukóza v séru nalačno

FSI Fasting Serum Insulin

2hBG 2 hodiny Glukóza v krvi

HbA1c Glykosylovaný hemoglobin

HOMA procento B model homeostázy hodnocení procento funkce beta buněk HOMA procento S model homeostázy hodnocení procento citlivosti

Posouzení modelu homeostázy HOMA IR Inzulinová rezistence

HDL-C lipidový cholesterol s vysokou hustotou

Mezinárodní jednotka IU/L/litr

LDL-C lipidový cholesterol s nízkou hustotou

ml mililitr

mm milimetr

mg/dl miligram/decilitr

Vícenásobná logistická regrese MLR

Oddělení venkovních pacientů OPD

OMIM Online Mendelovská dědičnost u člověka

NEBO Poměr šancí

PPARy Peroxisome Proliferator Activated Receptor gama

Pro12Pro Proline12Proline

Pro12Ala Proline 12 Alanin

Ala12Ala Alanin12Alanin

PCR polymerázová řetězová reakce

QUICKI kvantitativní kontrolní index citlivosti na inzulín

SD standardní odchylka

SPSS Statistický balíček pro sociální vědy

Systolický krevní tlak SBP

TC celkový cholesterol

TG triglycerid

T2DM Diabetes Mellitus typu 2

TZD Thiazolidindion

µl mikrolitrů

WHO Světová zdravotnická organizace