Effektstudie af pioglitazon og metformin og sammenhæng mellem pioglitazonrespons og peroxisomproliferatoraktiverede receptor-gamma-genvarianter hos personer med type 2 diabetes mellitus i Bangladesh (T2DMCT)

1. Introduktion Thiazolidindioner og metformin er kendte lægemidler og især metformin er meget brugt medicin til behandling af mennesker med T2DM. Selvom pioglitazon er blevet suspenderet i mange lande, er dets sikkerhed og virkning et spørgsmål om forskning for lægemiddelforskerne. Thiazolidindioner var blevet introduceret i 1997 som et oralt anti-diabetisk lægemiddel (OAD). Metformin er blevet brugt som nøgleforbindelsen til behandling af T2DM i mange år og er den mest ordinerede OAD på verdensplan. Både metformin og thiazolidindioner betragtes som "insulinsensibiliserende". ß-celledysfunktion og insulinresistens er kernedefekterne i progressionen af ​​T2DM med tilhørende metabolisk syndrom. Beviser tyder på, at pioglitazon sænker glukose i blodet ved at øge glukoseoptagelsen i cellen og metformin ved at reducere glukoseproduktionen. Imidlertid er der mange kontroverser i kliniske undersøgelser, specielt om forbedringen af ​​insulinvirkningen af ​​metformin. I modsætning hertil anbefalede en forskning pioglitazon som den mest passende OAD for den sydasiatiske befolkning. Nøglen til dette argument er, at da pioglitazon er en proliferator-aktiveret receptor gamma (PPAR-y eller PPARG) [en gruppe af nukleare receptorproteiner, der fungerer som transkriptionsfaktorer, der regulerer ekspressionen af ​​gener] agonist og nedsætter insulinresistens, overordnet glykæmisk kontrol synes at være bedre med denne thiazolidindion. Der er dog meget få offentliggjorte dokumenter om effektiviteten og sikkerheden af ​​disse lægemidler i sydasiater. Så vidt vi ved, er der intet publiceret papir, der undersøgte og sammenlignede effektiviteten og sikkerheden af ​​disse to lægemidler hos bangladeshiske patienter T2DM. Dette dobbeltblinde spor undersøgte derfor effektiviteten og sikkerheden af ​​pioglitazon og metformin hos T2DM-individer og også sammenhængen mellem virkningerne af pioglitazon og varianterne af PPARG. Vi har sammenlignet virkningerne af pioglitazon med metformin på biomedicinske variabler hos T2DM-patienter, der var egnede til oral hypoglykæmisk behandling, og derefter analyserede vi også sammenhængen mellem virkningerne af pioglitazon og PPARG-varianter.

2. Metodik

   1. Studiemiljø:

      Undersøgelsen blev udført mellem november 2008 og september 2010. Deltagerne til denne undersøgelse blev rekrutteret fra det udendørs, BIRDEM Hospital i Dhaka, Bangladesh.

   2. Forsøgspersoner I. Individer, der var blevet diagnosticeret med T2DM, der behandlede med diæt/motion eller Metformin 850 mg eller Pioglitazon 30 mg én gang dagligt, og som gik til BIRDEMs udendørs patientafdeling (OPD) til konsultation, blev kontaktet af forskeren og inviteret til at deltage i undersøgelsen . Patienterne var allerede diagnosticeret og registreret i BIRDEM. T2DM blev konstateret baseret på World Health Organization anbefalede kriterier to gentagne mål for faste (plasma glucose ≥7,0 mmol ⁄ l eller 2-timers plasma glucose ≥11,1 mmol ⁄ l.)

      II.Vi screenede i alt 130 patienter for egnethed og udvalgte 80 patienter til indskrivning baseret på vores inklusions- og eksklusionskriterier. Men 77 T2DM-patienter med HbA1c-niveau < 7,5 %, BMI kg/m2 ≥ 25, SGPT≤ 100 IE/L, kreatinin ≤ 1,2 mg/dl) af begge køn, i alderen 40-50 år, behandlet med monoterapi af pioglitazon eller metformin lægemidlet til forsøget i henhold til inklusions- og eksklusionskriterier. 53 patienter var screeningssvigt, da nogle ikke matchede berettigelseskriterierne (n=39), nogle nægtede at deltage (n=11), og nogle var ude af stand til at deltage (n=03) på grund af ukendt årsag.

   3. Patientforberedelse:

      I.Skriftligt informeret samtykke blev indhentet fra alle deltagere før studiestart. Patienterne blev instrueret i at følge en sygdoms- og vægtorienteret diæt gennem hele undersøgelsen som før.

      II. Hver sagshistorie blev dokumenteret i sagsrapportformularen. Undersøgelsen blev godkendt af National Medical Ethics Review Boards (NMERB) i Bangladesh Medical Research Council (BMRC). Undersøgelserne blev udført i overensstemmelse med principperne i Helsinki-erklæringen som revideret i 2000.

   4. Behandling:

      Patienterne skulle modtage behandling med pioglitazon tablet 001 (30 mg én gang dagligt) i 3 måneder efterfulgt af en måneds "metformin-udvaskningsperiode", derefter til det alternative behandlingsregime i yderligere 3 måneder med metformintablet 002 (850 mg én gang dagligt) . Lægemidlerne blev leveret af Aristopharma Pharmaceutical Ltd., Bangladesh.

   5. Antropometriske mål I. Højde: Ståhøjde blev målt ved hjælp af passende skalaer (Detect-Medic, Detect scales INC, USA) uden sko.

      II.Vægt: Vægten blev målt med vægten blev placeret på en hård flad overflade og kontrolleret for nul balance før måling. Forsøgspersonerne var i midten af ​​platformen iført lette klude uden sko.

      III.BMI: Body mass index (BMI) for forsøgspersonerne blev beregnet ved hjælp af standardformlen: BMI= Vægt (kg)/[Højde (m)] 2.

      IV.Blodtryk: Systemisk og diastolisk tryk blev målt i henhold til WHO-IHS.

   6. Blodprøvetagning til biokemisk analyse:

      I. I løbet af den fastsatte dato kom patienterne i fastende tilstand. Fastende blodprøver (10 ml) blev udtaget fra den antecubitale vene. Tiden blev nævnt som 0 time. Så fik patienterne medicin. De blev bedt om at sluge tabletten og få deres morgenmad i henhold til deres kostskemaer. Næste blodprøve var blevet taget efter 30 minutter og 2 timer, og derefter fik de medicin for hele måneden.

      II. Patienterne blev bedt om at tage stoffet lige før morgenmaden hver dag i 29 dage.

      III. Fra den fastende blodprøve blev 1 ml blod overført i et EDTA-holdigt rør til måling af HbA1C, og resten af ​​blodet blev taget i et EDTA-holdigt rør og centrifugeret med det samme.

      IV. Prøver efter forarbejdning blev opdelt i to alikvoter under steril tilstand; en aliquot blev sendt til biokemisk analyse for fastende glukose, lipidprofil, kolesterol, ALT, insulin, kreatinin og en anden blev opbevaret ved -80 0C for yderligere verifikation af resultater i tilfælde af enhver nødvendighed.

   7. Biokemiske testmetoder:

      I. Serumglukose (fastende, 1 og 2 timer) ved Glucose Oxidase (GOD-PAP) metode (Randox Laboratories Ltd., UK).

      II. Serumtriglycerid ved enzymatisk kolorimetrisk (GPO-PAP) metode (Randox Laboratories Ltd., UK).

      III. Totalkolesterol i serum ved enzymatisk endepunkt (Cholesterol Oxidase/Peroxidase) metode (Randox Laboratories Ltd., UK).

      IV.Serum HDL-kolesterol ved enzymatisk kolorimetrisk (Cholesterol CHOD-PAP) metode (Randox Laboratories Ltd., UK) under anvendelse af mikropladelæser (Bio-Tec, ELISA).

      V.Serumkreatinin ved enzymatisk kolorimetrisk (GPO-PAP) metode (Randox Laboratories Ltd., UK).

      VI.Serumalaninaminotransferase (ALT) ved UV-metode under anvendelse af ALT (GPT) opt.kit (Randox Laboratories Ltd., UK).

      VII.Seruminsulin ved enzymkoblet immunosorbentanalyse (ELISA) metode (Linco Research Inc., USA).

      VIII.Glykosyleret hæmoglobin (HbA1c) ved højtydende væskekromatografi (HPLC) metode.

   8. Blodprøvetagning til DNA-analyse (PPARG-gen):

   I. Ved slutningen af ​​3. måned af hver behandling blev der taget 1,5 ml blod i et EDTA-holdigt rør til genetisk analyse, og fuldblodsprøven blev opsamlet i vakuumopsamlingsrøret indeholdende EDTA, opbevaret ved -20°C til -80°C.

   II.DNA blev isoleret ved Chelex-metoden, identificeret ved elektroforesemetoden og amplificeret ved anvendelse af primere. Vi brugte et offentliggjort dokument til at vælge primerne til genotypebestemmelse af PPARγ Pro12Ala/Pro12Pro. Primerne for Pro12Ala SNP-genotypen amplificerede vi exon B ved at bruge den omvendte primer 5' CTG GAA GAC AAA CTA CAA GAG 3' og den fremadrettede primer 5' ACT CTG GGA GAT TCT CCT ATT GGC 3'. (Sigma produkt, bestillingsnr. SIGMA 03/11/09 4152936-F/185 PPARG-R 8006875247-1).

   III. Kontrol-DNA: Professor Colin Palmer Laboratory, Biomedicinsk Forskningsinstitut, University of Dundee Medical School, University of Dundee, Skotland, UK sendte seks kontrolprøver af 3 typer kontrol-DNA genotypet for PPARG SNP rs 1801282 (Pro12Ala).

   IV. Restriction Fordøjelse Enzyme Endonuclease Hae 111 blev brugt til at identificere skærestedet (Sigma produktnr. R 5628).

3. Svarprocent:

1. Responsraten blev defineret ved faldet på ≥10 % FBG eller ved faldet på ≥1 % HbA1c fra basislinjeværdierne.

ll. Der var en anden responsgruppe, der blev defineret ved en HbA1c-rate <7,0 % efter 3 måneders behandling med metformin kun for at finde ud af den sekundære fejlrate for metformin.

4) Statistisk analyse: I. Statistisk analyse blev udført ved brug af SPSS (Statistical Package for Social Science) software til Windows version 18 (SPSS Inc, Chicago, Illinois, USA). Data blev udtrykt som middelværdi + SD (standardafvigelse).

II. Virkninger af lægemidler efter 3 måneders behandling blev analyseret ved hjælp af t-par test. Grupperne blev sammenlignet ved hjælp af envejs ANOVA. Hvis p-værdien var <0,05, blev grupperne sammenlignet ved hjælp af elevens t-test for uparrede prøver eller χ2-test gennem univariat analyse for yderligere verifikation. Korrelationskoefficienten blandt variablerne blev testet ved hjælp af Pearsons test. Multivariat logistisk regressionsanalyse blev udført for at opnå odds-forhold og uafhængig indflydelsesfaktor for at finde mulig sammenhæng mellem PPARγ-genotyper og lægemiddelrespons i tilfælde af genetisk analyse.

III.A p-værdi <0,05 blev betragtet som signifikant for alle tests. lv. Den statistiske analyse for inden for gruppestudier som PPARG-responsgruppe og metformin sekundær svigtgruppe er ikke blevet vist her.

5) Fortegnelse over Forkortelser

Uønskede hændelser

ALT Alanin aminotransferase

BMI Body Mass Index

BMRC Bangladesh Medical Research Council

BIRDEM Bangladesh Institut for Forskning og Rehabilitering i Diabetes, Endokrine og Metaboliske Forstyrrelser

BP Blodtryk

DNA deoxynukleinsyre

DBP diastolisk blodtryk

DM Diabetes mellitus

EASD European Association for the Study of Diabetes

EDTA Ethylen Diamine Tetra Eddikesyre

ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay

FBG/FSG Fastende blodsukker/fastende serumglukose

FSI fastende seruminsulin

2hBG 2 timers blodsukker

HbA1c glykosyleret hæmoglobin

HOMA procent B Homeostase Model Vurdering procentdel af betacellefunktion HOMA procent S Homeostase Model Vurdering procentdel af sensitivitet

HOMA IR homeostasemodelvurdering insulinresistens

HDL-C High Density Lipid Cholesterol

IU/L international enhed/liter

LDL-C Low Density Lipid Cholesterol

ml milliliter

mm millimeter

mg/dl milligram/ deciliter

MLR multipel logistisk regression

OPD Udendørs Patientafdeling

OMIM Online Mendelian Inheritance in Man

ELLER Oddsforhold

PPARγ Peroxisome Proliferator Activated Receptor gamma

Pro12Pro Proline12Proline

Pro12Ala Proline 12 Alanin

Ala12Ala Alanine12Alanine

PCR polymerase kædereaktion

QUICKI Kvantitativ insulinfølsomhedskontrolindeks

SD standardafvigelse

SPSS Statistisk Pakke for Samfundsvidenskab

SBP systolisk blodtryk

TC Total Kolesterol

TG Triglycerid

T2DM Type 2 Diabetes Mellitus

TZD Thiazolidindion

µl mikroliter

WHO Verdenssundhedsorganisationen