Studio di efficacia di pioglitazone e metformina e associazione tra risposta di pioglitazone e varianti del gene gamma del recettore attivato dal proliferatore del perossisoma in soggetti con diabete mellito di tipo 2 del Bangladesh (T2DMCT)

1. Introduzione I tiazolidinedioni e la metformina sono farmaci noti e in particolare la metformina è un medicinale ampiamente utilizzato per trattare le persone con T2DM. Sebbene il pioglitazone sia stato sospeso in molti paesi, la sua sicurezza ed efficacia è oggetto di ricerca per i ricercatori sui farmaci. I tiazolidinedioni erano stati introdotti nel 1997 come farmaco antidiabetico orale (OAD). La metformina è stata utilizzata per molti anni come composto chiave per il trattamento del T2DM ed è l'OAD più prescritto in tutto il mondo. Sia la metformina che i tiazolidinedioni sono considerati "sensibilizzatori dell'insulina". La disfunzione delle cellule beta e l'insulino-resistenza sono i principali difetti nella progressione del T2DM con sindrome metabolica associata. L'evidenza suggerisce che il pioglitazone abbassa il glucosio nel sangue aumentando l'assorbimento di glucosio nelle cellule e la metformina diminuendo la produzione di glucosio. Tuttavia, ci sono molte controversie negli studi clinici, in particolare sul miglioramento dell'azione dell'insulina della metformina. Al contrario, una ricerca ha raccomandato il pioglitazone come l'OAD più appropriato per la popolazione dell'Asia meridionale. La chiave di questa argomentazione è che poiché il pioglitazone è un recettore gamma attivato dal proliferatore (PPAR-γ o PPARG) [un gruppo di proteine ​​del recettore nucleare che funzionano come fattori di trascrizione che regolano l'espressione dei geni] agonista e diminuisce la resistenza all'insulina, il controllo glicemico complessivo sembra essere migliore con questo tiazolidinedione. Tuttavia, ci sono pochissimi documenti pubblicati sull'efficacia e la sicurezza di questi farmaci negli asiatici del sud. Per quanto ne sappiamo, non esiste un documento pubblicato che abbia esaminato e confrontato l'efficacia e la sicurezza di questi due farmaci nei pazienti del Bangladesh T2DM. Questo percorso in doppio cieco ha quindi esaminato l'efficacia e la sicurezza di pioglitazone e metformina nei soggetti con T2DM e anche l'associazione degli effetti di pioglitazone e delle varianti di PPARG. Abbiamo confrontato gli effetti di pioglitazone con metformina sulle variabili biomediche nei pazienti con T2DM che erano eleggibili per la terapia ipoglicemizzante orale e poi abbiamo anche analizzato l'associazione tra gli effetti di pioglitazone e varianti PPARG.

2. Metodologia

   1. Ambiente di studio:

      Lo studio è stato condotto tra novembre 2008 e settembre 2010. I partecipanti a questo studio sono stati reclutati dall'ospedale all'aperto BIRDEM di Dhaka, in Bangladesh.

   2. Soggetti I. Gli individui a cui era stato diagnosticato il T2DM in trattamento con dieta/esercizio fisico o metformina 850 mg o pioglitazone 30 mg una volta al giorno e che stavano frequentando il reparto per pazienti all'aperto (OPD) di BIRDEM per un consulto sono stati contattati dal ricercatore e invitati a partecipare allo studio . I pazienti erano già stati diagnosticati e registrati in BIRDEM. Il T2DM è stato accertato in base ai criteri raccomandati dall'Organizzazione Mondiale della Sanità, due misurazioni ripetute del digiuno (glicemia plasmatica ≥7,0 mmol ⁄ l o glicemia plasmatica a 2 ore ≥11,1 mmol ⁄ l.)

      II. Abbiamo esaminato un totale di 130 pazienti per l'idoneità e selezionato 80 pazienti per l'arruolamento in base ai nostri criteri di inclusione ed esclusione. Ma 77 pazienti con diabete di tipo 2 con livello di HbA1c < 7,5 %, BMI kg/m2 ≥ 25, SGPT ≤ 100 UI/L, creatinina ≤ 1,2 mg/dl) di entrambi i sessi, di età compresa tra 40 e 50 anni, trattati in monoterapia con pioglitazone o metformina hanno ricevuto il farmaco per la sperimentazione in base ai criteri di inclusione ed esclusione. 53 pazienti hanno fallito lo screening in quanto alcuni non soddisfacevano i criteri di ammissibilità (n=39), alcuni si sono rifiutati di partecipare (n=11) e alcuni non hanno potuto partecipare (n=03) a causa di cause sconosciute.

   3. Preparazione del paziente:

      I. Il consenso informato scritto è stato ottenuto da tutti i partecipanti prima dell'ingresso nello studio. I pazienti sono stati istruiti a seguire una dieta orientata alla malattia e al peso durante lo studio come prima.

      II. Ogni anamnesi è stata documentata nel case report form. Lo studio è stato approvato dal National Medical Ethics Review Boards (NMERB) del Bangladesh Medical Research Council (BMRC). Le indagini sono state condotte in conformità con i principi della Dichiarazione di Helsinki rivista nel 2000.

   4. Trattamento:

      I pazienti dovevano ricevere il trattamento con pioglitazone compressa 001 (30 mg una volta al giorno) per 3 mesi seguito da un mese di "periodo di sospensione della metformina", quindi al regime di trattamento alternativo per ulteriori 3 mesi con metformina compressa 002 (850 mg una volta al giorno) . I farmaci sono stati forniti dalla Aristopharma Pharmaceutical Ltd., Bangladesh.

   5. Misurazioni antropometriche I. Altezza: l'altezza in piedi è stata misurata utilizzando apposite bilance (Detect-Medic, Detect scales INC, USA) senza scarpe.

      II.Peso: il peso è stato misurato con la bilancia posizionata su una superficie dura e piana e verificata che non vi fosse equilibrio zero prima della misurazione. I soggetti si trovavano al centro della pedana indossando panni leggeri senza scarpe.

      III.BMI: Gli indici di massa corporea (BMI) dei soggetti sono stati calcolati utilizzando la formula standard: BMI= Peso (kg)/[Altezza (m)] 2.

      IV. Pressione sanguigna: la pressione sistemica e diastolica è stata misurata secondo l'OMS-IHS.

   6. Raccolta di campioni di sangue per analisi biochimiche:

      I. Durante la data stabilita i pazienti sono venuti a digiuno. Campioni di sangue a digiuno (10 ml) sono stati prelevati dalla vena antecubitale. Il tempo è stato indicato come 0 ore. Allora i pazienti hanno ricevuto una preparazione. È stato chiesto loro di ingoiare la compressa e fare colazione secondo le loro tabelle dietetiche. Il successivo prelievo di sangue era stato prelevato a 30 min e 2 ore e poi sono stati forniti i farmaci per tutto il mese.

      II. Ai pazienti è stato chiesto di assumere il farmaco appena prima di colazione tutti i giorni per 29 giorni.

      III. Dal campione di sangue a digiuno 1 ml di sangue è stato trasferito in una provetta contenente EDTA per la misurazione dell'HbA1C e il resto del sangue è stato prelevato in una provetta contenente EDTA e centrifugato immediatamente.

      IV. I campioni dopo l'elaborazione sono stati divisi in due aliquote in condizioni sterili; un'aliquota è stata inviata per l'analisi biochimica per glucosio a digiuno, profilo lipidico, colesterolo, ALT, insulina, creatinina e un'altra è stata conservata a -80 °C per un'ulteriore verifica dei risultati in caso di qualsiasi necessità.

   7. Metodi di test biochimici:

      I. Glicemia sierica (a digiuno, 1 e 2 ore) con il metodo della glucosio ossidasi (GOD-PAP) (Randox Laboratories Ltd., Regno Unito).

      II.Trigliceride sierico mediante metodo colorimetrico enzimatico (GPO-PAP) (Randox Laboratories Ltd., Regno Unito).

      III.Colesterolo totale sierico mediante metodo enzimatico endpoint (colesterolo ossidasi/perossidasi) (Randox Laboratories Ltd., Regno Unito).

      IV.Colesterolo HDL sierico mediante metodo colorimetrico enzimatico (Cholesterol CHOD-PAP) (Randox Laboratories Ltd., UK) utilizzando un lettore di micropiastre (Bio-Tec, ELISA).

      V. Creatinina sierica mediante metodo colorimetrico enzimatico (GPO-PAP) (Randox Laboratories Ltd., Regno Unito).

      VI. Alanina aminotransferasi sierica (ALT) mediante metodo UV utilizzando ALT (GPT) opt.kit (Randox Laboratories Ltd., Regno Unito).

      VII. Insulina sierica mediante metodo ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) (Linco Research Inc., USA).

      VIII. Emoglobina glicosilata (HbA1c) mediante metodo cromatografico liquido ad alta prestazione (HPLC).

   8. Prelievo di campioni di sangue per l'analisi del DNA (gene PPARG):

   I. Alla fine del 3° mese di ogni trattamento, 1,5 ml di sangue sono stati prelevati in una provetta contenente EDTA per l'analisi genetica e il campione di sangue intero è stato raccolto nella provetta sottovuoto contenente EDTA, conservata a una temperatura compresa tra -20 °C e -80 °C.

   II.DNA è stato isolato con il metodo Chelex, identificato con il metodo dell'elettroforesi e amplificato utilizzando i primer. Abbiamo utilizzato un documento pubblicato per selezionare i primer per la genotipizzazione di PPARγ Pro12Ala/Pro12Pro. I primer per il genotipo Pro12Ala SNP, abbiamo amplificato l'esone B utilizzando il reverse primer 5' CTG GAA GAC AAA CTA CAA GAG 3' e il forward primer 5' ACT CTG GGA GAT TCT CCT ATT GGC 3'. (Prodotto Sigma, N. ordine SIGMA 03/11/09 4152936-F/185 PPARG-R 8006875247-1).

   III. DNA di controllo: il Professor Colin Palmer Laboratory, Biomedical Research Institute, University of Dundee Medical School, University of Dundee, Scotland, UK ha inviato sei campioni di controllo di 3 tipi di DNA di controllo genotipizzati per PPARG SNP rs 1801282 (Pro12Ala).

   IV.Restriction Digestion Enzyme Endonuclease Hae 111 è stato utilizzato per identificare il sito di taglio (Sigma Product No. R 5628).

3. Tasso di risposta:

1. Il tasso di risposta è stato definito dalla diminuzione di ≥10% FBG o dalla diminuzione di ≥1% HbA1c rispetto ai valori basali.

ll. C'era un altro gruppo di risposta definito dal tasso di HbA1c <7,0% dopo 3 mesi di trattamento con metformina solo per scoprire il tasso di fallimento secondario della metformina.

4) Analisi statistica: I. L'analisi statistica è stata eseguita utilizzando il software SPSS (Statistical Package for Social Science) per Windows versione 18 (SPSS Inc, Chicago, Illinois, USA). I dati sono stati espressi come media + deviazione standard (deviazione standard).

II. Gli effetti dei farmaci dopo 3 mesi di trattamento sono stati analizzati mediante t pair test. I gruppi sono stati confrontati utilizzando ANOVA unidirezionale. Se il valore p era <0,05, i gruppi sono stati confrontati utilizzando il test t di Student per campioni non appaiati o il test χ2 attraverso l'analisi univariata per ulteriore verifica. Il coefficiente di correlazione tra le variabili è stato testato utilizzando il test di Pearson. L'analisi di regressione logistica multivariata è stata eseguita per ottenere gli odds ratio e il fattore di influenza indipendente per trovare una possibile associazione tra genotipi PPARγ e risposta al farmaco in caso di analisi genetica.

III.Un valore p <0,05 è stato considerato significativo per tutti i test. liv. L'analisi statistica per lo studio all'interno del gruppo come il gruppo di risposta PPARG e il gruppo con fallimento secondario della metformina non è stata visualizzata qui.

5) Elenco delle abbreviazioni

Eventi avversi AE

ALT Alanina aminotransferasi

Indice di massa corporea BMI

BMRC Consiglio per la ricerca medica del Bangladesh

BIRDEM Bangladesh Institute of Research and Rehabilitation in Diabetes,Endocrine and Metabolic Disorder

PA Pressione sanguigna

Acido desossinucleico del DNA

Pressione arteriosa diastolica DBP

DM Diabete Mellito

EASD Associazione europea per lo studio del diabete

EDTA Etilene Diammina Tetra Acido acetico

Saggio di immunoassorbimento enzimatico ELISA

FBG/FSG Glicemia a digiuno/Glucosio sierico a digiuno

Insulina sierica a digiuno FSI

2hBG 2 ore Glicemia

Emoglobina glicosilata HbA1c

HOMA percent B Homeostasis Model Assessment percentuale della funzione delle cellule beta HOMA percent S Homeostasis Model Assessment percentuale di sensibilità

Valutazione del modello di omeostasi HOMA IR Resistenza all'insulina

Colesterolo lipidico ad alta densità HDL-C

IU/L Unità Internazionale/Litro

Colesterolo lipidico a bassa densità LDL-C

ml millilitro

mm millimetro

mg/dl milligrammi/decilitri

Regressione logistica multipla MLR

Reparto pazienti all'aperto OPD

OMIM Online Ereditarietà mendeliana nell'uomo

O Rapporto di probabilità

Gamma del recettore attivato per il proliferatore del perossisoma PPARγ

Pro12Pro Proline12Proline

Pro12Ala Prolina 12 Alanina

Ala12Ala Alanina12Alanina

PCR reazione a catena della polimerasi

Indice di controllo della sensibilità quantitativa all'insulina QUICKI

SD Deviazione standard

Pacchetto statistico SPSS per le scienze sociali

SBP Pressione arteriosa sistolica

TC Colesterolo Totale

Trigliceridi TG

T2DM Diabete mellito di tipo 2

TZD Tiazolidinedione

µl Microlitro

OMS Organizzazione Mondiale della Sanità