방글라데시 제2형 당뇨병 환자에서 Pioglitazone과 Metformin의 효능 및 Pioglitazone 반응과 Peroxisome Proliferator-activated Receptor Gamma Gene Variants 간의 연관성 연구 (T2DMCT)

1. 소개 Thiazolidinediones와 metformin은 알려진 약물이며 특히 metformin은 T2DM 환자를 치료하는 데 널리 사용되는 약물입니다. 피오글리타존은 많은 국가에서 중단되었지만 그 안전성과 효능은 약물 조사관의 연구 문제입니다. 티아졸리딘디온은 1997년에 경구 항당뇨병제(OAD)로 도입되었습니다. Metformin은 수년 동안 T2DM을 치료하는 핵심 화합물로 사용되어 왔으며 전 세계적으로 가장 많이 처방되는 OAD입니다. 메트포르민과 티아졸리딘디온 모두 "인슐린 증감제"로 간주됩니다. ß-세포 기능 장애 및 인슐린 저항성은 대사 증후군과 관련된 T2DM 진행의 핵심 결함입니다. 증거에 따르면 피오글리타존은 세포로의 포도당 흡수를 증가시켜 혈액 내 포도당을 낮추고 포도당 생산을 감소시켜 메트포르민을 낮춥니다. 그러나 특히 메트포르민의 인슐린 작용 개선에 대해서는 임상 연구에서 많은 논란이 있다. 대조적으로 한 연구에서는 남아시아 인구에 가장 적합한 OAD로 pioglitazone을 권장했습니다. 이 주장의 핵심은 pioglitazone이 proliferator-activated receptor gamma (PPAR-γ 또는 PPARG) [유전자 발현을 조절하는 전사 인자로 기능하는 핵 수용체 단백질 그룹] 작용제이고 인슐린 저항성을 감소시키기 때문에 전반적인 혈당 조절 이 티아졸리딘디온이 더 나은 것 같습니다. 그러나 남아시아인에 대한 이러한 약물의 효능과 안전성에 대한 출판된 문서는 거의 없습니다. 우리가 아는 한, 방글라데시 환자 T2DM에서 이 두 약물의 효능과 안전성을 조사하고 비교한 출판된 논문은 없습니다. 따라서 이 이중 맹검 실험은 T2DM 개인에서 피오글리타존과 메트포르민의 효능과 안전성, 그리고 피오글리타존과 PPARG 변종의 효과의 연관성을 조사했습니다. 우리는 경구 저혈당 요법을 받을 자격이 있는 T2DM 환자의 생의학적 변수에 대한 pioglitazone과 metformin의 효과를 비교한 다음 pioglitazone과 PPARG 변형의 효과 간의 연관성을 분석했습니다.

2. 방법론

   1. 연구 설정:

      조사기간은 2008년 11월부터 2010년 9월까지였다. 이 연구의 참가자는 방글라데시 다카의 야외 BIRDEM 병원에서 모집되었습니다.

   2. 피험자 I. 식이요법/운동 또는 Metformin 850 mg 또는 Pioglitazone 30mg 1일 1회 치료를 받고 있는 제2형 당뇨병으로 진단받고 상담을 위해 BIRDEM의 야외 환자 부서(OPD)에 참석하고 있던 개인에게 연구자가 접근하여 연구 참여를 권유함 . 환자들은 이미 진단을 받고 BIRDEM에 등록되었습니다. T2DM은 세계보건기구(WHO)에서 권장하는 기준에 따라 2회 반복된 금식 측정(혈장 포도당 ≥7.0mmol ⁄ l 또는 2시간 혈장 포도당 ≥11.1mmol ⁄ l)에 따라 확인되었습니다.

      II.적격성을 위해 총 130명의 환자를 스크리닝하고 포함 및 제외 기준에 따라 등록을 위해 80명의 환자를 선택했습니다. 그러나 HbA1c 수치 < 7.5%, BMI kg/m2 ≥ 25, SGPT≤ 100 IU/L, 크레아티닌 ≤ 1.2 mg/dl인 40-50세 사이의 77명의 T2DM 환자는 피오글리타존 또는 메트포르민 단독 요법으로 치료를 받았습니다. 포함 및 제외 기준에 따라 시험을 위한 약물. 53명의 환자는 적격성 기준에 맞지 않는 경우(n=39), 참여를 거부하는 경우(n=11), 원인 불명의 경우(n=03)에 따라 선별검사에 실패하였다.

   3. 환자 준비:

      I. 연구에 참여하기 전에 모든 참가자로부터 서면 동의서를 얻었습니다. 환자들은 이전과 같이 연구 전반에 걸쳐 질병 및 체중 중심 식이요법을 준수하도록 지시받았습니다.

      II.각 증례 이력은 증례 보고서 형식으로 문서화되었습니다. 이 연구는 Bangladesh Medical Research Council(BMRC)의 National Medical Ethics Review Boards(NMERB)의 승인을 받았습니다. 조사는 2000년에 개정된 헬싱키 선언의 원칙에 따라 수행되었습니다.

   4. 치료:

      환자들은 3개월 동안 피오글리타존 정제 001(1일 1회 30mg) 치료를 받은 후 1개월 동안 "메트포르민 휴약 기간" 치료를 받은 다음 추가 3개월 동안 메트포르민 정제 002(850mg 1일 1회)로 대체 치료 요법을 받았습니다. . 약물은 방글라데시의 Aristopharma Pharmaceutical Ltd.에서 공급했습니다.

   5. 인체 측정 I.신장: 신발을 신지 않은 상태에서 적절한 척도(Detect-Medic, Detect scales INC, USA)를 사용하여 서 있는 키를 측정했습니다.

      II.무게 : 저울을 딱딱하고 평평한 면에 놓고 무게가 0이 되는지 확인한 후 측정한다. 피실험자들은 신발을 신지 않은 채 가벼운 옷을 입고 연단 중앙에 있었다.

      III.BMI: 대상자의 체질량 지수(BMI)는 표준 공식을 사용하여 계산되었습니다: BMI= 체중(kg)/[신장(m)] 2.

      IV.혈압: WHO-IHS에 따라 전신 및 확장기 혈압을 측정하였다.

   6. 생화학적 분석을 위한 혈액 샘플 수집:

      I. 지정된 날짜 동안 환자는 금식 상태로 왔습니다. 금식 혈액 샘플(10ml)을 전주정맥에서 채취했습니다. 시간은 0시간으로 언급되었습니다. 그런 다음 환자는 약을 받았습니다. 그들은 태블릿을 삼키고 식단 차트에 따라 아침 식사를 하도록 요청 받았습니다. 다음 혈액 샘플은 30분 및 2시간에 채취되었고 그 후 그들은 한 달 내내 약물을 제공받았습니다.

      II.환자들은 29일 동안 매일 아침식사 직전에 약을 복용하도록 요청받았다.

      III.공복혈액에서 HbA1C 측정을 위해 혈액 1ml를 EDTA가 포함된 튜브에 옮기고 나머지 혈액은 EDTA가 포함된 튜브에 옮겨 즉시 원심분리하였다.

      IV. 처리 후 샘플을 멸균 상태에서 두 개의 분취량으로 나누었습니다. 한 분취량은 공복 혈당, 지질 프로필, 콜레스테롤, ALT, 인슐린, 크레아티닌에 대한 생화학 분석을 위해 보냈고 다른 한 분취량은 결과를 추가로 확인하기 위해 -80 °C에 보관했습니다. 필요한 경우.

   7. 생화학 시험 방법:

      I. 포도당 산화 효소(GOD-PAP) 방법(Randox Laboratories Ltd., UK)에 의한 혈청 포도당(절식, 1 및 2시간).

      II. 효소 비색법(GPO-PAP) 방법(Randox Laboratories Ltd., UK)에 의한 혈청 트리글리세라이드.

      III. 효소 종점(Cholesterol Oxidase/Peroxidase) 방법(Randox Laboratories Ltd., UK)에 의한 혈청 총 콜레스테롤.

      IV.마이크로플레이트 판독기(Bio-Tec, ELISA)를 사용하여 효소 비색(Cholesterol CHOD-PAP) 방법(Randox Laboratories Ltd., UK)에 의한 혈청 HDL 콜레스테롤.

      V. 효소 비색법(GPO-PAP) 방법(Randox Laboratories Ltd., UK)에 의한 혈청 크레아티닌.

      VI. ALT(GPT) opt.kit(Randox Laboratories Ltd., UK)을 이용한 UV 방법에 의한 혈청 알라닌 아미노 트랜스퍼라제(ALT).

      VII. ELISA(enzyme linked immunosorbent assay) 방법에 의한 혈청 인슐린(Linco Research Inc., USA).

      VIII.고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 방법에 의한 글리코실화 헤모글로빈(HbA1c).

   8. DNA 분석을 위한 혈액 샘플 수집(PPARG 유전자):

   I. 각 처리 3개월 말에 유전자 분석을 위해 EDTA가 들어 있는 튜브에 1.5ml의 혈액을 채취하고 전혈 검체를 EDTA가 들어 있는 진공 수집 튜브에 수집하여 -20 °C ~ -80 °C에서 보관했습니다.

   II.DNA는 Chelex 방법으로 분리하고 전기영동법으로 동정한 후 프라이머를 이용하여 증폭하였다. 출판된 문서를 사용하여 PPARγ Pro12Ala/Pro12Pro 유전자형 분석을 위한 프라이머를 선택했습니다. Pro12Ala SNP 유전자형에 대한 프라이머는 역방향 프라이머 5' CTG GAA GAC AAA CTA CAA GAG 3' 및 정방향 프라이머 5' ACT CTG GGA GAT TCT CCT ATT GGC 3'을 사용하여 엑손 B를 증폭했습니다. (Sigma 제품, 주문 번호 SIGMA 03/11/09 4152936-F/185 PPARG-R 8006875247-1).

   III. 컨트롤 DNA: 영국 스코틀랜드 던디 대학교 던디 의과 대학 생물 의학 연구소의 Colin Palmer 연구실 교수는 PPARG SNP rs 1801282(Pro12Ala)에 대해 유전형이 지정된 3가지 유형 컨트롤 DNA의 6개 컨트롤 샘플을 보냈습니다.

   IV.절단부위 확인을 위해 Restriction Digestion Enzyme Endonuclease Hae 111을 사용하였다(Sigma Product No. R 5628).

3. 응답률:

1. 반응률은 FBG가 10% 이상 감소하거나 기준치에서 HbA1c가 1% 이상 감소하는 것으로 정의되었습니다.

ll.메트포르민의 2차 실패율을 알아보기 위해 메트포르민 단독 투여 3개월 후 HbA1c 비율 <7.0%로 정의한 또 다른 반응군이 있었다.

4) 통계 분석 I. 통계 분석은 Windows 버전 18용 SPSS(Statistical Package for Social Science) 소프트웨어(SPSS Inc, Chicago, Illinois, USA)를 사용하여 수행하였다. 데이터는 평균 + SD(표준 편차)로 표현되었습니다.

II. 3개월 치료 후 약물의 효과는 t pair test를 이용하여 분석하였다. 일원 분산 분석을 사용하여 그룹을 비교했습니다. p 값이 <0.05인 경우, 쌍을 이루지 않은 샘플에 대한 스튜던트 t 테스트 또는 추가 검증을 위한 단변량 분석을 통한 χ2 테스트를 사용하여 그룹을 비교했습니다. 변수간 상관계수는 Pearson's test를 이용하여 검정하였다. 유전자 분석의 경우 PPARγ 유전자형과 약물 반응 사이의 가능한 연관성을 찾기 위한 승산비와 독립적 영향 요인을 얻기 위해 다변량 로지스틱 회귀 분석을 수행했습니다.

III.p 값 <0.05는 모든 테스트에서 유의한 것으로 간주되었습니다. lv. PPARG 반응 그룹 및 메트포르민 2차 실패 그룹과 같은 그룹 내 연구에 대한 통계 분석은 여기에 표시되지 않았습니다.

5) 약어 목록

AE 부작용

ALT 알라닌 아미노전이효소

BMI 체질량 지수

BMRC 방글라데시 의학 연구 위원회

BIRDEM 방글라데시 당뇨병, 내분비 및 대사 장애 연구 및 재활 연구소

BP 혈압

DNA 데옥시핵산

DBP 이완기 혈압

DM 당뇨병 진성

EASD 유럽 당뇨병 연구 협회

EDTA 에틸렌디아민테트라아세트산

ELISA 효소 결합 면역흡착 분석법

FBG/FSG 공복 혈당/공복 혈청 포도당

FSI 단식 혈청 인슐린

2hBG 2시간 혈당

HbA1c 당화혈색소

HOMA 퍼센트 B 항상성 모델 베타 세포 기능 평가 백분율 HOMA 퍼센트 S 항상성 모델 평가 민감도 백분율

HOMA IR 항상성 모델 평가 인슐린 저항성

HDL-C 고밀도 지질 콜레스테롤

IU/L 국제 단위/리터

LDL-C 저밀도 지질 콜레스테롤

ml 밀리리터

mm 밀리미터

mg/dl 밀리그램/ 데시리터

MLR 다중 로지스틱 회귀

OPD 야외 환자과

OMIM 온라인 남자의 멘델적 유산

또는 배당률

PPARγ Peroxisome Proliferator 활성화 수용체 감마

Pro12Pro 프롤린12프롤린

Pro12Ala 프롤린 12 알라닌

Ala12Ala 알라닌12알라닌

PCR 중합효소 연쇄 반응

QUICKI 정량적 인슐린 감수성 체크 지수

SD 표준편차

사회 과학을 위한 SPSS 통계 패키지

SBP 수축기 혈압

TC 총 콜레스테롤

TG트리글리세리드

T2DM 유형 2 진성 당뇨병

TZD 티아졸리딘디온

µl 마이크로리터

WHO 세계보건기구