Pioglitatsonin ja metformiinin tehokkuustutkimus sekä pioglitatsonivasteen ja peroksisomiproliferaattorilla aktivoitujen reseptorin gammageenimuunnelmien välinen yhteys Bangladeshissa tyypin 2 diabetes mellituspotilailla (T2DMCT)

1. Johdanto Tiatsolidiinidionit ja metformiini ovat tunnettuja lääkkeitä ja erityisesti metformiinia käytetään laajalti T2DM-potilaiden hoitoon. Vaikka pioglitatsonin käyttö on jäädytetty monissa maissa, sen turvallisuus ja teho on lääketutkijoille tutkimuskysymys. Tiatsolidiinidionit otettiin käyttöön vuonna 1997 suun kautta otettavana diabeteslääkkeenä (OAD). Metformiinia on käytetty avainyhdisteenä T2DM:n hoidossa useiden vuosien ajan, ja se on maailmanlaajuisesti eniten määrätty OAD. Sekä metformiinia että tiatsolidiinidioneja pidetään "insuliiniherkistäjänä". ß-solujen toimintahäiriö ja insuliiniresistenssi ovat keskeisiä vikoja T2DM:n ja siihen liittyvän metabolisen oireyhtymän etenemisessä. Todisteet viittaavat siihen, että pioglitatsoni alentaa veren glukoosia lisäämällä glukoosin ottoa soluihin ja metformiini vähentämällä glukoosin tuotantoa. Kliinisissä tutkimuksissa on kuitenkin monia kiistoja erityisesti metformiinin insuliinivaikutuksen parantamisesta. Sitä vastoin tutkimus suositteli pioglitatsonia sopivimmaksi OAD:ksi Etelä-Aasian väestölle. Tämän väitteen avain on, että koska pioglitatsoni on proliferaattori-aktivoitu reseptori gamma (PPAR-y tai PPARG) [ryhmä tumareseptoriproteiineja, jotka toimivat transkriptiotekijöinä, jotka säätelevät geenien ilmentymistä] agonisti ja vähentää insuliiniresistenssiä, yleinen glykeeminen hallinta. näyttää olevan parempi tällä tiatsolidiinidionilla. Näiden lääkkeiden tehosta ja turvallisuudesta eteläaasialaisilla on kuitenkin hyvin vähän julkaistuja asiakirjoja. Tietojemme mukaan ei ole julkaistu paperia, jossa olisi tutkittu ja vertailtu näiden kahden lääkkeen tehoa ja turvallisuutta Bangladeshissa T2DM-potilailla. Tässä kaksoissokkotutkimuksessa tutkittiin siksi pioglitatsonin ja metformiinin tehoa ja turvallisuutta T2DM-potilailla sekä pioglitatsonin ja PPARG-muunnelmien vaikutusten yhteyttä. Olemme vertailleet pioglitatsonin ja metformiinin vaikutuksia biolääketieteellisiin muuttujiin T2DM-potilailla, jotka olivat kelvollisia oraaliseen hypoglykemiahoitoon, ja sitten analysoimme myös pioglitatsonin ja PPARG-varianttien vaikutusten välistä yhteyttä.

2. Metodologia

   1. Opiskeluasetukset:

      Tutkimus tehtiin marraskuun 2008 ja syyskuun 2010 välisenä aikana. Tämän tutkimuksen osallistujat rekrytoitiin ulkoilmasairaalasta BIRDEM-sairaalasta Dhakasta, Bangladeshista.

   2. Koehenkilöt I. Tutkija otti yhteyttä henkilöihin, joilla oli diagnosoitu T2DM, jotka hoidettiin ruokavaliolla/harjoittelulla tai metformiinilla 850 mg tai pioglitatsonia 30 mg kerran päivässä ja jotka olivat BIRDEMin ulkopotilasosastolla (OPD) konsultaatiossa, ja heidät kutsuttiin osallistumaan tutkimukseen. . Potilaat oli jo diagnosoitu ja rekisteröity BIRDEMiin. T2DM todettiin Maailman terveysjärjestön suosittelemien kriteerien perusteella, joissa oli kaksi toistuvaa paastomittausta (plasman glukoosi ≥ 7,0 mmol ⁄ l tai 2 tunnin plasman glukoosi ≥ 11,1 mmol ⁄ l.)

      II.Seuloimme yhteensä 130 potilasta kelpoisuuden suhteen ja valitsimme 80 potilasta mukaan ottamista ja poissulkemista koskevien kriteeriemme perusteella. Mutta 77 T2DM-potilasta, joiden HbA1c-taso < 7,5 %, BMI kg/m2 ≥ 25, SGPT ≤ 100 IU/L, kreatiniini ≤ 1,2 mg/dl), molempia sukupuolia, iältään 40–50-vuotias, sai pioglitatsonin tai metformin monoterapiana. lääke tutkimukseen mukaanotto- ja poissulkemiskriteerien mukaan. 53 potilasta epäonnistui seulonnassa, koska osa ei vastannut kelpoisuusvaatimuksia (n=39), osa kieltäytyi osallistumasta (n=11) ja osa ei voinut osallistua (n=03) tuntemattomasta syystä.

   3. Potilaan valmistelu:

      I. Kirjallinen tietoinen suostumus saatiin kaikilta osallistujilta ennen tutkimukseen tuloa. Potilaita kehotettiin noudattamaan sairauteen ja painoon suuntautunutta ruokavaliota koko tutkimuksen ajan kuten ennenkin.

      II.Jokainen tapaushistoria dokumentoitiin tapausraporttilomakkeella. Tutkimuksen hyväksyi Bangladeshin lääketieteellisen tutkimusneuvoston (BMRC) National Medical Ethics Review Boards (NMERB). Tutkimukset suoritettiin vuonna 2000 tarkistetun Helsingin julistuksen periaatteiden mukaisesti.

   4. Hoito:

      Potilaiden piti saada pioglitatsonitablettia 001 (30 mg kerran päivässä) 3 kuukauden ajan, jota seurasi kuukauden "metformiinin poistojakso" ja sitten vaihtoehtoiseen hoito-ohjelmaan vielä 3 kuukauden ajan metformiinitabletilla 002 (850 mg kerran päivässä). . Lääkkeet toimitti Aristopharma Pharmaceutical Ltd., Bangladesh.

   5. Antropometriset mittaukset I. Korkeus: Seisomakorkeus mitattiin käyttämällä asianmukaisia ​​vaakoja (Detect-Medic, Detect scales INC, USA) ilman kenkiä.

      II. Paino: Paino mitattiin niin, että vaaka asetettiin kovalle tasaiselle pinnalle ja tarkastettiin nollatasapaino ennen mittausta. Koehenkilöt olivat lavan keskellä vaaleissa kankaissa ilman kenkiä.

      III.BMI: Koehenkilöiden kehon massaindeksit (BMI) laskettiin käyttämällä standardikaavaa: BMI = paino (kg)/[pituus (m)] 2.

      IV. Verenpaine: Systeeminen ja diastolinen paine mitattiin WHO-IHS:n mukaisesti.

   6. Verinäytteenotto biokemiallista analyysiä varten:

      I. Potilaat saapuivat määrättynä päivänä paastotilassa. Paastoverinäytteet (10 ml) otettiin kyynärpäälaskimosta. Kellonajaksi mainittiin 0 tuntia. Sitten potilaat saivat lääkettä. Heitä pyydettiin nielemään tabletti ja syömään aamiaisensa ruokavaliokaavioidensa mukaan. Seuraava verinäyte oli otettu 30 min ja 2 tunnin kohdalla ja sitten heille toimitettiin lääkkeet koko kuukaudeksi.

      II. Potilaita pyydettiin ottamaan lääke juuri ennen aamiaista joka päivä 29 päivän ajan.

      III. Paastoverinäytteestä siirrettiin 1 ml verta EDTA:ta sisältävään putkeen HbA1C:n mittaamiseksi ja loput verestä otettiin EDTA:ta sisältävään putkeen ja sentrifugoitiin välittömästi.

      IV. Käsittelyn jälkeen näytteet jaettiin kahteen osaan steriileissä olosuhteissa; yksi alikvootti lähetettiin biokemialliseen analyysiin paastoglukoosin, lipidiprofiilin, kolesterolin, ALT:n, insuliinin, kreatiniinin osalta ja toinen osa säilytettiin -80 0C:ssa tulosten tarkempaa tarkistamista varten. kaikissa tarpeellisissa tapauksissa.

   7. Biokemialliset testimenetelmät:

      I. Seerumin glukoosi (paasto, 1 ja 2 tuntia) Glucose Oxidase (GOD-PAP) -menetelmällä (Randox Laboratories Ltd., UK).

      II. Seerumin triglyseridi entsymaattisella kolorimetrisellä (GPO-PAP) menetelmällä (Randox Laboratories Ltd., UK).

      III.Seerumin kokonaiskolesteroli entsymaattisen päätepisteen (kolesterolioksidaasi/peroksidaasi) menetelmällä (Randox Laboratories Ltd., UK).

      IV. Seerumin HDL-kolesteroli entsymaattisella kolorimetrisellä (Cholesterol CHOD-PAP) menetelmällä (Randox Laboratories Ltd., UK) käyttäen mikrolevylukijaa (Bio-Tec, ELISA).

      V. Seerumin kreatiniini entsymaattisella kolorimetrisellä (GPO-PAP) menetelmällä (Randox Laboratories Ltd., UK).

      VI. Seerumin alaniiniaminotransferaasi (ALT) UV-menetelmällä käyttäen ALT (GPT) opt.kit (Randox Laboratories Ltd., UK).

      VII. Seeruminsuliini entsyymikytkentäisellä immunosorbenttimäärityksellä (ELISA) -menetelmällä (Linco Research Inc., USA).

      VIII. Glykosyloitu hemoglobiini (HbA1c) korkean suorituskyvyn nestekromatografiamenetelmällä (HPLC).

   8. Verinäytteenotto DNA-analyysiä varten (PPARG-geeni):

   I. Jokaisen hoidon 3. kuukauden lopussa otettiin 1,5 ml verta EDTA:ta sisältävään putkeen geneettistä analyysiä varten ja kokoverinäyte kerättiin tyhjiökeräysputkeen, joka sisälsi EDTA:ta, säilytettynä -20 °C - -80 °C:ssa.

   II.DNA eristettiin Chelex-menetelmällä, tunnistettiin elektroforeesimenetelmällä ja monistettiin käyttämällä alukkeita. Käytimme julkaistua asiakirjaa valitaksemme alukkeet PPARy Pro12Ala/Pro12Pro-genotyypitykseen. Pro12Ala SNP-genotyypin alukkeet, monistimme eksonin B käyttämällä käänteisaluketta 5' CTG GAA GAC AAA CTA CAA GAG 3' ja eteenpäin suunnattua aluketta 5' ACT CTG GGA GAT TCT CCT ATT GGC 3'. (Sigma-tuote, tilausnro SIGMA 03/11/09 4152936-F/185 PPARG-R 8006875247-1).

   III. Kontrolli-DNA: Professori Colin Palmer Laboratory, Biomedical Research Institute, University of Dundee Medical School, University of Dundee, Skotlanti, Yhdistynyt kuningaskunta, lähetti kuusi kontrollinäytettä kolmen tyypin kontrolli-DNA:sta, joiden genotyypitys oli määritetty PPARG SNP rs 1801282:lle (Pro12Ala).

   IV. Leikkauskohdan tunnistamiseen käytettiin restriktiohajotusentsyymiendonukleaasi Hae 111:tä (Sigma-tuotenumero R 5628).

3. Vastausaste:

1. Vasteprosentti määritettiin ≥10 % FBG:n laskuna tai ≥1 %:n HbA1c:n laskuna perusarvoista.

ll. Toinen vasteryhmä määritettiin HbA1c-tasolla <7,0 % 3 kuukauden metformiinihoidon jälkeen vain metformiinin sekundaarisen epäonnistumisasteen selvittämiseksi.

4) Tilastollinen analyysi: I. Tilastollinen analyysi suoritettiin käyttämällä SPSS-ohjelmistoa (Statistical Package for Social Science) Windows-versiolle 18 (SPSS Inc, Chicago, Illinois, USA). Tiedot ilmaistiin keskiarvona + SD (standardipoikkeama).

II. Lääkkeiden vaikutukset 3 kuukauden hoidon jälkeen analysoitiin t-paritesteillä. Ryhmiä verrattiin käyttämällä yksisuuntaista ANOVAa. Jos p-arvo oli <0,05, ryhmiä verrattiin käyttämällä opiskelijan t-testiä parittomille näytteille tai χ2-testiä yksimuuttujaanalyysillä lisävarmennusta varten. Muuttujien välinen korrelaatiokerroin testattiin Pearsonin testillä. Monimuuttujalogistinen regressioanalyysi suoritettiin todennäköisyyssuhteiden ja riippumattoman vaikuttavan tekijän saamiseksi mahdollisen yhteyden löytämiseksi PPARy-genotyyppien ja lääkevasteen välillä geneettisen analyysin tapauksessa.

III.A p-arvoa <0,05 pidettiin merkitsevänä kaikissa testeissä. lv. Ryhmätutkimuksen, kuten PPARG-vasteryhmän ja metformiinin sekundaarisen epäonnistumisen ryhmän, tilastollista analyysiä ei ole esitetty tässä.

5) Luettelo lyhenteistä

AES haittatapahtumat

ALT Alaniiniaminotransferaasi

BMI kehon massaindeksi

BMRC Bangladesh Medical Research Council

BIRDEM Bangladeshin tutkimus- ja kuntoutusinstituutti diabeteksessa, endokriinisissä ja aineenvaihduntahäiriöissä

BP Verenpaine

DNA deoksinukleiinihappo

DBP Diastolinen verenpaine

DM Diabetes mellitus

EASD European Association for Studies of Diabetes

EDTA etyleenidiamiinitetraetikkahappo

ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay

FBG/FSG paastoverensokeri/paastoseerumin glukoosi

FSI Fasting Serum Insuliini

2hBG 2 tuntia Verensokeri

Glykosyloitu hemoglobiini HbA1c

HOMA-prosenttinen B-homeostaasimalli Arvio beetasolutoiminnan prosenttiosuudesta HOMA-prosenttisesta S-homostaasimallista Arvioineen herkkyyden prosenttiosuudesta

HOMA IR Homeostasis Model Assessment Insuliiniresistenssi

HDL-C korkean tiheyden lipidikolesteroli

IU/L kansainvälinen yksikkö/litra

LDL-C matalatiheyksinen lipidikolesteroli

ml millilitraa

mm millimetri

mg/dl milligrammaa/desilitra

MLR Multiple Logistic Regression

OPD:n ulkopotilasosasto

OMIM Online Mendelian Heritance in Man

TAI Kerroinsuhde

PPARy-peroksisomiproliferaattorin aktivoima reseptori gamma

Pro12Pro Proline12Proline

Pro12Ala Proliini 12 Alaniini

Ala12Ala Alaniini12Alaniini

PCR-polymeraasiketjureaktio

QUICKI Kvantitatiivinen insuliiniherkkyyden tarkistusindeksi

SD-standardipoikkeama

Yhteiskuntatieteiden SPSS-tilastopaketti

SBP Systolinen verenpaine

TC kokonaiskolesteroli

TG triglyseridi

T2DM tyypin 2 diabetes

TZD Tiatsolidiinidioni

µl mikrolitraa

WHO Maailman terveysjärjestö