Účinky Kalydeco na záněty horních cest dýchacích a paranazálních dutin měřené výplachem nosu a na příznaky (KPNSI)

Zařazování pacientů Do této longitudinální studie bylo 10 pacientů s CF s mutací G551D, kteří nově dostávali ivakaftor 150 mg dvakrát denně, jak bylo schváleno (1), zařazeno do center CF univerzity v Jeně (Německo) a Innsbrucku (Rakousko). Kritéria pro zařazení byla: věk pacientů s CF ≥ 6 let s diagnózou potvrzenou dvěma pozitivními potními testy a/nebo detekcí dvou mutací CFTR způsobujících onemocnění; jedním z nich je G551D. Pacienti byli povinni přísně dodržovat postupy definované v SOP a oni a/nebo jejich rodiče dali před zařazením informovaný písemný souhlas. Kritéria vyloučení byla: neschopnost provést NL standardizovaným způsobem, jak je popsáno níže, kontraindikace pro ivakaftor, těhotenství nebo kojení a účast v jiné klinické studii během 30 dnů před podáním studovaného léku. Pacienti s výplachem nosu byli důkladně vyškoleni k provádění NL ve standardizovaných domácích podmínkách (obrázky 1A-C) pomocí instruktážního videa z naší publikace v Journal of Immunological Methods 2014 (14) a ilustrovaného listu SOP. Shromážděný nativní NLF byl přenesen do umístěných reakčních zkumavek obsahujících 15 ul inhibitoru proteázy (obrázky 1D, E) a do 30 minut po odběru vzorků byl uložen v mrazáku při teplotě pod -18 °C, dokud nebyl přenesen na led do středů. Zde byly lahvičky přímo skladovány při -80 °C až do provedení laboratorních analýz. Před zahájením léčby ivakaftorem byl NL odebírán alespoň jednou týdně (průměr: 5,5 ± 3,9 odběrů/pacient) během průměrné doby 30,3 ± 19,7 dnů. Během prvního měsíce terapie (dny 0-30) byl NL odebírán každý druhý den a jednou/týdně od měsíce 2 dále (průměr: 25,9 ± 4,1 odběrů/pacient). Rozsah sledování po zahájení léčby ivakaftorem: 2,3-16,1 měsíce (medián: 5,7 měsíce). Hodnocení mediátorů zánětu Koncentrace IL-1b, IL-6 a IL-8 byly měřeny v neředěné tekutině NL pomocí souprav Milliplex® MAP (Human High Sensitivity HS TCMAG-28K, Merck Millipore; Darmstadt, Německo) a Bio-Plex ® 200 systém (Bio-Rad; Hercules, Kalifornie, USA) podle pokynů výrobce. Měření neutrofilní elastázy (NE) byla prováděna za použití Human PMN Elastase ELISA (DEH3311, Demeditec Diagnostics GmbH; Kiel, Německo) a odečtena spektrometrem FLUOstar Galaxy (BMG LABTECH GmbH; Offenburg, Německo). Jak uvádí výrobce, spodní detekční limity byly 0,12 pg/ml (IL-lb), 0,13 pg/ml (IL-6), 0,12 pg/ml (IL-8) a 0,2 ng/ml (NE). Statistické analýzy K popisu klinických charakteristik studované populace byly použity deskriptivní statistiky. Pro analýzu celkových trendů zánětlivých markerů byly provedeny modely lineárních smíšených účinků. Pro vyhlazení účinků způsobených odlehlými hodnotami zánětlivých markerů byly stanoveny individuální změny týkající se kumulativních období pro každého pacienta výpočtem mediánů pro časová období před a po zahájení léčby (tj. s ohledem na období 4, 8 a 12 týdnů během léčby, jak je znázorněno na obrázku 2). Výsledné mediány jednotlivých pacientů byly použity k výpočtu mediánů a interkvartilních rozsahů (IQR) celé kohorty na konci výše uvedených časových období. Wilcoxonův signaturní test (dvoustranný) byl použit ke stanovení změn ve výše zmíněných zánětlivých mediátorech, potním testu, FEV1 a jejich statistické významnosti (pomocí p<0,05) během nové terapie. Všechny statistické analýzy byly provedeny s IBM SPSS 19 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA); postavy byly vytvořeny pomocí GraphPad Prism (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, USA).