Efectos de Kalydeco sobre la inflamación de las vías respiratorias superiores y los senos paranasales medidos por lavado nasal y sobre los síntomas (KPNSI)

Inscripción de pacientes En este ensayo longitudinal, se incluyeron en los centros universitarios de FQ de Jena (Alemania) e Innsbruck (Austria) 10 pacientes con FQ con una mutación G551D que acababan de recibir ivacaftor 150 mg dos veces al día, tal como se aprobó (1). Los criterios de inclusión fueron: pacientes con FQ de edad ≥ 6 años con un diagnóstico confirmado por dos pruebas de sudor positivas y/o detección de dos mutaciones CFTR causantes de la enfermedad; uno de ellos es G551D. Los pacientes debían seguir estrictamente los procedimientos definidos en los SOP y ellos y/o sus padres dieron su consentimiento informado por escrito antes de la inscripción. Los criterios de exclusión fueron: incapacidad para realizar la NL de manera estandarizada como se describe a continuación, contraindicación para ivacaftor, embarazo o lactancia y participación en otro estudio clínico dentro de los 30 días anteriores a la administración del fármaco del estudio. Los pacientes de lavado nasal fueron completamente capacitados para realizar NL en condiciones estandarizadas en el hogar (Figuras 1A-C) mediante el uso del video de instrucciones de nuestra publicación en Journal of Immunological Methods 2014 (14) y una hoja ilustrada de SOP. El NLF nativo agrupado se transfirió a tubos de reacción desechados que contenían 15 μL de inhibidor de proteasa (Figuras 1D, E) y, dentro de los 30 minutos posteriores al muestreo, se almacenó en un congelador por debajo de -18 °C hasta la transferencia en hielo a los centros. Aquí, los viales se almacenaron directamente a -80°C hasta la realización de los análisis de laboratorio. Antes del inicio del tratamiento con ivacaftor, se recogieron NL al menos una vez a la semana (media: 5,5 ± 3,9 muestras/paciente) durante un tiempo medio de 30,3 ± 19,7 días. Durante el primer mes de terapia (días 0-30), se recolectaron NL cada dos días y una vez por semana a partir del segundo mes (media: 25,9 ± 4,1 muestreos/paciente). Intervalo de seguimiento tras el inicio de ivacaftor: 2,3-16,1 meses (mediana: 5,7 meses). Evaluación de mediadores inflamatorios Se midieron las concentraciones de IL-1b, IL-6 e IL-8 en líquido NL sin diluir utilizando kits Milliplex® MAP (Human High Sensitivity HS TCMAG-28K, Merck Millipore; Darmstadt, Alemania) y un Bio-Plex ® 200 (Bio-Rad; Hercules, California, EE. UU.) según las instrucciones del fabricante. Las mediciones de elastasa de neutrófilos (NE) se realizaron utilizando ELISA de elastasa PMN humana (DEH3311, Demeditec Diagnostics GmbH; Kiel, Alemania) y se leyeron con un espectrómetro FLUOstar Galaxy (BMG LABTECH GmbH; Offenburg, Alemania). Según lo especificado por el fabricante, los límites de detección inferiores fueron 0,12 pg/mL (IL-1b), 0,13 pg/mL (IL-6), 0,12 pg/mL (IL-8) y 0,2 ng/mL (NE). Análisis estadísticos Se utilizaron estadísticas descriptivas para describir las características clínicas de la población de estudio. Se realizaron modelos lineales de efectos mixtos para analizar las tendencias generales de los marcadores inflamatorios. Para suavizar los efectos causados ​​por los valores atípicos en los valores de los marcadores inflamatorios, se determinaron los cambios individuales con respecto a los períodos acumulativos para cada paciente calculando las medianas de los períodos de tiempo antes y después del inicio del tratamiento (es decir, con respecto a períodos de 4, 8 y 12 semanas durante el tratamiento como se muestra en la Figura 2). Las medianas de los pacientes individuales resultantes se utilizaron para calcular las medianas y los rangos intercuartílicos (RIC) de toda la cohorte al final de los períodos de tiempo mencionados anteriormente. Se aplicó la prueba de rango con signo de Wilcoxon (dos colas) para determinar los cambios en los mediadores inflamatorios antes mencionados, la prueba del sudor, el FEV1 y su significación estadística (usando p<0.05) durante la nueva terapia. Todos los análisis estadísticos se realizaron con IBM SPSS 19 (SPSS Inc., Chicago, IL, EE. UU.); las figuras se crearon con GraphPad Prism (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, EE. UU.).