Auswirkungen von Kalydeco auf die Entzündung der oberen Atemwege und der Nasennebenhöhlen, gemessen anhand der Nasenspülung und auf die Symptome (KPNSI)

Einschluss von Patienten In diese Längsschnittstudie wurden 10 CF-Patienten mit einer G551D-Mutation, die neu Ivacaftor 150 mg zweimal täglich gemäß Zulassung (1) erhielten, in den CF-Zentren der Universitäten Jena (Deutschland) und Innsbruck (Österreich) eingeschlossen. Einschlusskriterien waren: Alter der CF-Patienten ≥ 6 Jahre mit einer Diagnose, die durch zwei positive Schweißtests und/oder Nachweis von zwei krankheitsverursachenden CFTR-Mutationen bestätigt wurde; einer von ihnen ist G551D. Die Patienten mussten die in den SOPs definierten Verfahren strikt befolgen, und sie und/oder ihre Eltern gaben vor der Aufnahme ihre schriftliche Einwilligung nach Aufklärung. Ausschlusskriterien waren: Unfähigkeit, NL wie unten beschrieben standardisiert durchzuführen, Kontraindikation für Ivacaftor, Schwangerschaft oder Stillzeit und Teilnahme an einer anderen klinischen Studie innerhalb von 30 Tagen vor Verabreichung des Studienmedikaments. Patienten mit Nasenspülung wurden gründlich darin geschult, NL unter standardisierten häuslichen Bedingungen (Abbildungen 1A-C) durchzuführen, indem das Anleitungsvideo aus unserer Veröffentlichung im Journal of Immunological Methods 2014 (14) und ein illustriertes SOP-Blatt verwendet wurden. Das gepoolte native NLF wurde in entsorgte Reaktionsröhrchen mit 15 &mgr;l Proteaseinhibitor ( 1D , E) überführt und innerhalb von 30 Minuten nach der Probenahme in einem Gefrierschrank unter –18 °C gelagert, bis es auf Eis in die Zentren überführt wurde. Hier wurden die Fläschchen bis zur Durchführung von Laboranalysen direkt bei -80°C gelagert. Vor Beginn der Ivacaftor-Therapie wurde NL mindestens einmal pro Woche (Mittelwert: 5,5 ± 3,9 Proben/Patient) über einen mittleren Zeitraum von 30,3 ± 19,7 Tagen entnommen. Während des ersten Behandlungsmonats (Tage 0–30) wurde NL jeden zweiten Tag und ab dem zweiten Monat einmal pro Woche gesammelt (Mittelwert: 25,9 ± 4,1 Proben/Patient). Nachbeobachtungszeitraum nach Beginn der Behandlung mit Ivacaftor: 2,3–16,1 Monate (Median: 5,7 Monate). Bewertung der Entzündungsmediatoren Die Konzentrationen von IL-1b, IL-6 und IL-8 wurden in unverdünnter NL-Flüssigkeit unter Verwendung von Milliplex® MAP-Kits (Human High Sensitivity HS TCMAG-28K, Merck Millipore; Darmstadt, Deutschland) und einem Bio-Plex gemessen ® 200-System (Bio-Rad; Hercules, Kalifornien, USA) gemäß den Anweisungen des Herstellers. Messungen von Neutrophilen-Elastase (NE) wurden unter Verwendung von Human-PMN-Elastase-ELISA (DEH3311, Demeditec Diagnostics GmbH; Kiel, Deutschland) durchgeführt und von einem FLUOstar Galaxy-Spektrometer (BMG LABTECH GmbH; Offenburg, Deutschland) abgelesen. Wie vom Hersteller angegeben, lagen die unteren Nachweisgrenzen bei 0,12 pg/mL (IL-1b), 0,13 pg/mL (IL-6), 0,12 pg/mL (IL-8) und 0,2 ng/mL (NE). Statistische Analysen Zur Beschreibung der klinischen Merkmale der Studienpopulation wurden beschreibende Statistiken verwendet. Lineare Mixed-Effects-Modelle wurden durchgeführt, um Gesamttrends von Entzündungsmarkern zu analysieren. Um durch Ausreißer bei Entzündungsmarkerwerten verursachte Effekte zu glätten, wurden individuelle Veränderungen hinsichtlich der kumulativen Zeiträume für jeden Patienten bestimmt, indem Mediane für die Zeiträume vor und nach Behandlungsbeginn berechnet wurden (d. h. in Bezug auf Zeiträume von 4, 8 und 12 Wochen während der Behandlung, wie in Abbildung 2 gezeigt). Aus den resultierenden Medianen der einzelnen Patienten wurden Mediane und Interquartilsabstände (IQR) der gesamten Kohorte am Ende der oben genannten Zeiträume berechnet. Der Wilcoxon-Vorzeichen-Rang-Test (zweiseitig) wurde angewendet, um Veränderungen der oben genannten Entzündungsmediatoren, des Schweißtests, des FEV1 und ihrer statistischen Signifikanz (unter Verwendung von p < 0,05) während der neuen Therapie zu bestimmen. Alle statistischen Analysen wurden mit IBM SPSS 19 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) durchgeführt; Figuren wurden mit GraphPad Prism (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, USA) erstellt.