Eksisterende kinasedomænemutationer i Ph-positive leukæmier

Baggrund Enkelt- eller multiple punktmutationer i tyrosinkinasedomænet (TKD) af BCR-ABL1-fusionsgenet i kronisk myeloid leukæmi (CML) og Ph-kromosompositiv akut lymfatisk leukæmi repræsenterer den vigtigste kendte mekanisme for resistens over for tyrosinkinasehæmmere (TKI'er) ). Det er tænkeligt, at allerede eksisterende punktmutationer i CML-stamceller, der kan tilskrives den genomiske ustabilitet, som BCR-ABL1-fusionsproteinet giver, giver anledning til udvækst af resistente subkloner og indtræden af ​​behandlingsufølsom sygdom under selektionstrykket af TKI-terapi. Tidlig påvisning af sådanne subkloner kan derfor være af prognostisk og terapeutisk relevans. Den nyligt publicerede immunfænotype af CML-stamceller (Hermann et al. Blood 2014), og vores nylige rapport om en NGS (næste-generations sekventering)-baseret metode, der letter følsom påvisning og kvantitativ overvågning af BCR-ABL1-subkloner, der bærer enkelte eller sammensatte mutationer (Kastner et al. European Journal of Cancer 2014) letter screeningen for klinisk relevante mutante subkloner i stamceller eller tidlige progenitorceller.

Hypotese Påvisning af mutante subkloner i stamcellen eller tidlige stamceller ved diagnose eller tidligt i terapi af Ph-positive leukæmier og overvågning af deres proliferationskinetik tillader tidlig forudsigelse af resistent sygdom under den igangværende TKI-behandling.

Eksperimentel tilgang Prøver af knoglemarv (BM) og perifert blod (PB) vil blive indsamlet efter informeret samtykke fra patienter med Ph-positiv leukæmi ved diagnose (BM+PB), og efterfølgende med 3-måneders intervaller (PB;BM efter tilgængelighed) under det første år af terapi baseret på eller inklusive TKI'er. Isolering af CD (cluster of differentiation) 34+ celler, der bærer yderligere fænotypiske markører, der karakteriserer stamceller eller tidlige progenitorceller (CD38-/CD25+/CD26+ i CML, CD19 i Ph-ALL) vil blive udført ved flowsortering. Hele BCR-ABL1-tyrosinkinasedomænet (TKD) vil blive amplificeret fra cDNA (komplementært DNA) eller specifikke exoner af interesse fra DNA ved etablerede protokoller, og tovejssekventering vil blive udført ved ultra-dyb sekventering ved brug af NGS. Mutante subkloner identificeret ved diagnose eller efter debulking af det meste af den behandlingsfølsomme leukæmibyrde tidligt i behandlingen (3 måneders tidspunkt), vil blive overvåget af NGS indtil 12. måneds behandling. BCR-ABL1-transskriptioner vil blive overvåget i henhold til den internationale skala (IS) parallelt. DNA isoleret fra fingernegleklip vil blive brugt som kimlinjekontrol for ABL1 TKD. Testen vil blive udført på en blind måde for at forhindre behandlingsjusteringer i henhold til eksperimentelle data.