Mutations préexistantes du domaine kinase dans les leucémies Ph-positives

Contexte Les mutations ponctuelles uniques ou multiples dans le domaine de la tyrosine kinase (TKD) du gène de fusion BCR-ABL1 dans la leucémie myéloïde chronique (LMC) et la leucémie aiguë lymphoblastique à chromosome Ph positif représentent le mécanisme connu le plus important de résistance aux inhibiteurs de la tyrosine kinase (ITK). ). Il est concevable que des mutations ponctuelles préexistantes dans les cellules souches de la LMC attribuables à l'instabilité génomique conférée par la protéine de fusion BCR-ABL1 donnent lieu à la croissance de sous-clones résistants et à l'apparition d'une maladie insensible au traitement sous la pression de sélection de la thérapie TKI. La détection précoce de tels sous-clones peut donc avoir une pertinence pronostique et thérapeutique. L'immunophénotype récemment publié des cellules souches de LMC (Hermann et al. Blood 2014), et notre rapport récent sur une méthode basée sur le NGS (séquençage de nouvelle génération) facilitant la détection sensible et le suivi quantitatif des sous-clones BCR-ABL1 porteurs de mutations simples ou composées (Kastner et al. European Journal of Cancer 2014) facilitent le dépistage de sous-clones mutants cliniquement pertinents dans les cellules souches ou les cellules progénitrices précoces.

Hypothèse La détection de sous-clones mutants dans les compartiments des cellules souches ou des progéniteurs précoces au moment du diagnostic ou au début du traitement des leucémies Ph-positives, et le suivi de leur cinétique de prolifération, permettent une prédiction précoce de la maladie résistante sous le traitement TKI en cours.

Approche expérimentale Des échantillons de moelle osseuse (BM) et de sang périphérique (PB) seront prélevés sur consentement éclairé des patients atteints de leucémie Ph-positive au moment du diagnostic (BM+PB), puis à intervalles de 3 mois (PB ;BM selon disponibilité) pendant la première année de thérapie basée sur ou incluant des ITK. L'isolement des cellules CD (cluster of differentiation) 34+ portant des marqueurs phénotypiques supplémentaires caractérisant les cellules souches ou les cellules progénitrices précoces (CD38-/CD25+/CD26+ dans la LMC, CD19 dans la Ph-ALL) sera effectué par tri en flux. L'ensemble du domaine tyrosine kinase BCR-ABL1 (TKD) sera amplifié à partir d'ADNc (ADN complémentaire) ou d'exons spécifiques d'intérêt de l'ADN par des protocoles établis, et le séquençage bidirectionnel sera effectué par séquençage ultra-profond à l'aide de NGS. Les sous-clones mutants identifiés au moment du diagnostic ou après la réduction de la majeure partie de la charge leucémique sensible au traitement au début du traitement (3 mois) seront surveillés par NGS jusqu'au 12 mois de traitement. Les transcrits BCR-ABL1 seront surveillés selon l'échelle internationale (IS) en parallèle. L'ADN isolé à partir de coupures d'ongles sera utilisé comme contrôle de la lignée germinale pour l'ABL1 TKD. Les tests seront effectués en aveugle pour éviter les ajustements de traitement en fonction des données expérimentales.