Tratamiento de tributirina en la enfermedad de Alzheimer leve: evaluación de efectos de ácido butírico a través del cerebro intestinal (TRIM-GUT)

Experimental: Tributirina

Los participantes recibirán 1 cápsula por día durante 12 semanas. Cada cápsula contiene 450 mg de tributirinas. Las cápsulas tendrán un recubrimiento de gelatina. En el mercado, las formulaciones están disponibles con dosis que van desde 200 a 500 mg.

Suplemento dietético: tributirina

Los participantes recibirán 1 cápsula por día durante 12 semanas. Cada cápsula contiene 450 mg de tributirinas. Las cápsulas tendrán un recubrimiento de gelatina. En el mercado, las formulaciones están disponibles con dosis que van desde 200 a 500 mg.

Comparador de placebos: Placebo

El placebo consistirá en almidón de papa encapsulado en condiciones idénticas para las utilizadas para las cápsulas de tributirina, asegurando el cegamiento adecuado del estudio. La administración del placebo seguirá el mismo protocolo que la del grupo de intervención.

Otro: Placebo

El placebo consistirá en almidón de papa encapsulado en condiciones idénticas para las utilizadas para las cápsulas de tributirina, asegurando el cegamiento adecuado del estudio.

Evaluación cognitiva de Montreal (MOCA)

Para la evaluación cognitiva, se utilizará la evaluación cognitiva de Montreal (MOCA), una herramienta ampliamente reconocida desarrollada para identificar deterioro cognitivo leve. En comparación con el examen de estado mini-mental (MMSE), MOCA exhibe una mayor sensibilidad, particularmente en las primeras etapas de la EA, lo que permite la detección de déficits en áreas como atención, memoria, lenguaje, abstracción y funciones ejecutivas

El MOCA se evalúa en una escala que varía de 0 a 30, donde las puntuaciones más altas reflejan un rendimiento cognitivo superior. Una puntuación de 26 o más se considera típicamente como dentro del rango normal, mientras que las puntuaciones más bajas indican diferentes niveles de deterioro cognitivo.

Precisión en la tarea N-Back (memoria de trabajo)

Para evaluar la memoria de trabajo, los participantes realizarán la tarea N-Back (en sus 3-4 versiones de tareas) utilizando la plataforma PEBL (Psychology Experiment Building Language). El rendimiento se medirá por precisión, calculado como el porcentaje de respuestas correctas, con porcentajes más altos que indican un mejor rendimiento de la memoria de trabajo. La precisión se registrará en una escala del 0% al 100%.

Tiempo de reacción en la tarea N-Back (memoria de trabajo)

El tiempo de reacción de los participantes durante la tarea N-Back se medirá en milisegundos, utilizando la plataforma PEBL. Los tiempos de reacción más cortos generalmente indican un procesamiento cognitivo más eficiente.

Memoria verbal por prueba de rey

Se realizará una evaluación integral de las habilidades neurocognitivas utilizando herramientas de neurocomputacionales a través de la plataforma PEBL (Psychology Experiment Building Language). La prueba REY, administrada a través de PEBL, se utilizará para evaluar tanto la memoria verbal como la memoria visual, proporcionando una medida integrada de la memoria episódica. Las puntuaciones para el retiro inmediato varían de 0 a 15, y de 0 a 30 para el retiro retrasado, con puntajes más altos que indican un mejor rendimiento de la memoria verbal.

Memoria visual de Rey Test

Se realizará una evaluación integral de las habilidades neurocognitivas utilizando herramientas de neurocomputacionales a través de la plataforma PEBL (Psychology Experiment Building Language). La prueba REY, administrada a través de PEBL, se utilizará para evaluar tanto la memoria verbal como la memoria visual, proporcionando una medida integrada de la memoria episódica. Memoria visual: la prueba REY, aplicada a través de PEBL, evaluará el retiro inmediato (puntajes de 0 a 15) y retraso retrasado (puntajes de 0 a 30), con puntajes más altos que reflejan un mejor rendimiento de la memoria visual.

Tiempo de reacción en la prueba Stroop (atención)

Para realizar una evaluación integral de las habilidades neurocognitivas, se emplearán herramientas de neurocomputacionales a través de la plataforma PEBL (Lenguaje de construcción de experimentos de psicología), que ofrece una variedad de pruebas diseñadas para medir diferentes aspectos de la cognición. La prueba Stroop se aplicará para examinar la atención, específicamente la capacidad de inhibir las respuestas automáticas y manejar la atención en presencia de estímulos conflictivos. El tiempo de reacción se medirá por tiempo de reacción (en milisegundos), con tiempos más cortos que indican un mejor control cognitivo.

Precisión en la prueba de Stroop (atención)

Para realizar una evaluación integral de las habilidades neurocognitivas, se emplearán herramientas de neurocomputacionales a través de la plataforma PEBL (Lenguaje de construcción de experimentos de psicología), que ofrece una variedad de pruebas diseñadas para medir diferentes aspectos de la cognición. La precisión, medida a través de la prueba Stroop, se registrará como el porcentaje de respuestas correctas, que van del 0% al 100%, con porcentajes más altos que reflejan un mejor rendimiento.

Tiempo de finalización en la prueba KEFS (flexibilidad cognitiva)

Para realizar una evaluación integral de las habilidades neurocognitivas, se emplearán herramientas de neurocomputacionales a través de la plataforma PEBL (Lenguaje de construcción de experimentos de psicología), que ofrece una variedad de pruebas diseñadas para medir diferentes aspectos de la cognición. Para evaluar la flexibilidad cognitiva, se utilizarán los D-Kefs, midiendo la capacidad de cambiar entre diferentes estrategias y adaptarse a las nuevas demandas. El tiempo de finalización administrado a través de PEBL se medirá mediante el tiempo de finalización (en segundos), con tiempos más cortos que indican una mejor flexibilidad cognitiva.

Precisión en la prueba KEFS (flexibilidad cognitiva)

Para realizar una evaluación integral de las habilidades neurocognitivas, se emplearán herramientas de neurocomputacionales a través de la plataforma PEBL (Lenguaje de construcción de experimentos de psicología), que ofrece una variedad de pruebas diseñadas para medir diferentes aspectos de la cognición. Para evaluar la flexibilidad cognitiva, se utilizarán los D-Kefs, midiendo la capacidad de cambiar entre diferentes estrategias y adaptarse a las nuevas demandas. Se registrará la precisión medida a través del D-Kefs, con una mayor precisión que refleja una mejor flexibilidad cognitiva.

Precisión en la prueba GO/no-go (inhibición)

Para realizar una evaluación integral de las habilidades neurocognitivas, se emplearán herramientas de neurocomputacionales a través de la plataforma PEBL (Lenguaje de construcción de experimentos de psicología), que ofrece una variedad de pruebas diseñadas para medir diferentes aspectos de la cognición. La prueba GO/No-Go evaluará la inhibición, midiendo la capacidad de controlar las respuestas impulsivas a ciertos estímulos. La precisión se medirá por precisión (el porcentaje de respuestas correctas), con puntajes que van del 0% al 100%. Los valores más altos indican un mejor control sobre la inhibición.

Tiempo de reacción en la prueba GO/no-go (inhibición)

Para realizar una evaluación integral de las habilidades neurocognitivas, se emplearán herramientas de neurocomputacionales a través de la plataforma PEBL (Lenguaje de construcción de experimentos de psicología), que ofrece una variedad de pruebas diseñadas para medir diferentes aspectos de la cognición. La prueba GO/No-Go evaluará la inhibición, midiendo la capacidad de controlar las respuestas impulsivas a ciertos estímulos. El tiempo de reacción también se evaluará en la prueba GO/NO-GO. Las respuestas más rápidas generalmente indican una inhibición más eficiente de los impulsos. El tiempo de reacción puede variar según la versión específica de la tarea.

Funciones ejecutivas e impulsividad

Para realizar una evaluación integral de las habilidades neurocognitivas, se emplearán herramientas de neurocomputacionales a través de la plataforma PEBL (Lenguaje de construcción de experimentos de psicología), que ofrece una variedad de pruebas diseñadas para medir diferentes aspectos de la cognición. La Prueba de Juego de Cambridge (CGT) se utilizará para evaluar la toma de decisiones y los comportamientos de toma de riesgos, proporcionando información sobre las funciones ejecutivas y la impulsividad de los participantes. El rendimiento generalmente se evalúa por precisión (el porcentaje de opciones correctas) y la inclinación a asumir riesgos, donde una mayor precisión indica habilidades de toma de decisiones más fuertes. El comportamiento de toma de riesgos se mide por la cantidad de dinero que se aposta, con apuestas más grandes que indican una mayor tendencia a asumir riesgos.

Cuestionario de inventario neuropsiquiátrico (NPI-Q)

Para obtener una comprensión integral de las manifestaciones clínicas asociadas con AD leve, además de las herramientas neurocognitivas mencionadas, se empleará el cuestionario de inventario neuropsiquiátrico (NPI-Q). Esta herramienta permite la identificación y evaluación de la gravedad de los síntomas neuropsiquiátricos comunes en esta población, como agitación, depresión, ansiedad, apatía y comportamientos desinhibidos, así como el nivel de angustia que estos síntomas causan a los cuidadores. La gravedad de cada síntoma generalmente se clasifica en una escala de 0 a 12, con puntajes más altos que indican síntomas más graves. La angustia del cuidador se mide en una escala de 0 a 5, donde las puntuaciones más altas reflejan una mayor angustia.

Composición de microbiota intestinal (secuenciación del gen 16S rRNA)

Para explorar la influencia de la suplementación con tributirina en la composición de la microbiota intestinal, se realizará la secuenciación del gen 16S rRNA en muestras fecales de los participantes antes, al final de la suplementación, y tres meses después de su conclusión. El ADN bacteriano total de las muestras de heces frescas se extraerá utilizando el kit de heces de ADN rápida (Thermo Fisher Scientific, California, EE. UU.). El gen 16S rRNA se secuenciará utilizando cebadores universales (341F/806R) para apuntar a la región V3-V4, siguiendo métodos descritos en estudios anteriores. Los datos sin procesar se procesarán con el software QIIME2, y se realizarán un análisis bioinformático adicional utilizando la plataforma en línea de MicrobiomeAnalyst (https://www.microbiomeanalyst.ca). Esto incluirá evaluaciones de diversidad alfa y beta, análisis de microbioma central y modelado de bosques aleatorios.

Niveles de AGCC (Acetato, Propionato y Butirato) en heces

Para evaluar si la suplementación con butirato promueve un aumento en los niveles de AGCC, se medirán los niveles de acetato, propionato y butirato. Se recogerán muestras fecales antes, después de 12 meses y tres meses después de la intervención. Las muestras fecales se recogerán en el domicilio utilizando tubos que contienen un medio estabilizante. Los tubos se sellarán herméticamente para minimizar el riesgo de volatilización de los AGCC y garantizar la integridad de la muestra. Los niveles de AGCC se cuantificarán mediante cromatografía de gases-espectrometría de masas (GC-MS) (Agilent Technologies). Las unidades de medida de los AGCC se expresarán en µmol/g de heces.

Permeabilidad intestinal

La proteína ZO-1 plasmática, una proteína andamio central de las uniones estrechas, se cuantificará porque su reducción refleja la pérdida estructural del epitelio; se sabe que la disminución de la disponibilidad de butirato regula a la baja la expresión de ZO-1 y aumenta la permeabilidad paracelular. Para complementar este indicador estructural, se medirá la proteína de unión a LPS (LBP) como el marcador principal de la exposición sistémica al LPS de origen intestinal, lo que representa la vía descendente canónica de la disfunción de la barrera que activa la señalización TLR4-NF-κB implicada en la activación neuroinmune relacionada con la EA. También se evaluará la proteína de unión a ácidos grasos intestinal 2 (I-FABP2) como un indicador sensible de la integridad de la membrana del enterocito. Las muestras se analizarán con kits ELISA para ZO-1 (Catálogo: EEL211), para LBP (Catálogo: EH297RB) y para I-FABP2 (Catálogo: EHFABP2) de Thermo Fisher (California, EE. UU.). Las muestras se almacenarán a -80°C hasta el análisis. Los niveles de proteína se medirán en pg/mL.

Inflamación sistémica

Debido a que el butirato ha demostrado la capacidad de inhibir las citocinas proinflamatorias mientras promueve la producción de citocinas antiinflamatorias, así como de reducir los marcadores de estrés oxidativo. Los niveles de las citocinas IL-1β, IL-6, TNF-α e IL-10. Se recolectarán muestras de sangre de los participantes para evaluar las citocinas mencionadas al inicio, al final de la intervención de 12 semanas y tres meses después de su conclusión, utilizando kits ELISA siguiendo las instrucciones del fabricante (Thermo Fisher, California, EE. UU.). Las muestras de sangre se recolectarán en tres momentos. Después de la recolección de las muestras, se centrifugará a 2000 x g durante 15 minutos, se obtendrá el suero y las muestras de sangre se almacenarán a -80°C para su posterior análisis. Los niveles de citocinas se cuantificarán en pg/mL.

Niveles séricos de NfL

La cadena ligera de neurofilamentos (NfL) se evaluará como un indicador robusto de lesión axonal de gran calibre, comúnmente elevada en contextos de activación microglial y señalización inflamatoria periférica. El NfL plasmático se cuantificará utilizando kits ELISA comerciales siguiendo las instrucciones del fabricante (Catálogo. para NfL: BMS2362 de Thermo Fisher. Los niveles se cuantificarán en pg/mL.

Niveles séricos de pTau217

La tau fosforilada en treonina-217 (pTau217), el marcador periférico más específico de la tauopatía temprana, proporciona una lectura molecular sensible de la actividad anormal de la τ-cinasa, que puede verse exacerbada por la inflamación sistémica crónica. pTau217 se cuantificará utilizando kits ELISA comerciales siguiendo las instrucciones del fabricante (Catálogo ab318936 de Abcam, Cambridge, Reino Unido). Los niveles se cuantificarán en pg/mL.

Niveles séricos de la relación Amiloide42/40

La relación amiloide-β42/amiloide-β40 (Aβ42/40) se cuantificará como indicador del procesamiento amiloidogénico, ya que los cambios periféricos impulsados por citocinas pueden modular la actividad de la γ- y β-secretasa y, por lo tanto, influir en la dinámica del amiloide-β. La relación plasmática Aβ42/40 se cuantificará utilizando kits ELISA comerciales siguiendo las instrucciones del fabricante (Catálogo para Aβ40: KHB3481 y para Aβ42: KHB3441 de Thermo Fisher, California, EE. UU.). Los niveles se medirán en pg/ml.

Atención sostenida mediante CPT

La Prueba de Rendimiento Continuo (CPT), administrada a través de la plataforma PEBL, se utilizará para evaluar la atención sostenida, la vigilancia y el control inhibitorio. Los participantes deben responder a los estímulos objetivo mientras inhiben las respuestas a los no objetivos. El rendimiento se cuantificará utilizando tres índices: (i) tiempo de reacción (milisegundos), que refleja la velocidad de procesamiento; (ii) errores de omisión (rango de 0 al número total de ensayos objetivo), que indican fallos en la detección de objetivos; y (iii) errores de comisión (rango de 0 al número total de ensayos no objetivo), que reflejan respuestas impulsivas a los no objetivos. Puntuaciones más altas en omisión y comisión denotan una atención sostenida y un control inhibitorio más deficientes, mientras que tiempos de reacción más rápidos y estables reflejan un mejor rendimiento atencional.