Tratamento da tributirina em doença leve de Alzheimer: Avaliação dos efeitos do ácido butírico via intestino-cérebro (TRIM-GUT)

Experimental: Tributyrin

Os participantes receberão 1 cápsula por dia durante 12 semanas. Cada cápsula contém 450 mg de tributirinas. As cápsulas terão um revestimento de gelatina. No mercado, as formulações estão disponíveis com dosagens que variam de 200 a 500 mg.

Suplemento dietético: Tributyrin

Os participantes receberão 1 cápsula por dia durante 12 semanas. Cada cápsula contém 450 mg de tributirinas. As cápsulas terão um revestimento de gelatina. No mercado, as formulações estão disponíveis com dosagens que variam de 200 a 500 mg.

Comparador de Placebo: Placebo

O placebo consistirá em amido de batata encapsulado em condições idênticas às usadas para as cápsulas de tributirina, garantindo a cegamento adequado do estudo. A administração do placebo seguirá o mesmo protocolo que o do grupo de intervenção.

Outro: Placebo

O placebo consistirá em amido de batata encapsulado em condições idênticas às usadas para as cápsulas de tributirina, garantindo a cegamento adequado do estudo.

Avaliação Cognitiva de Montreal (MOCA)

Para avaliação cognitiva, a avaliação cognitiva de Montreal (MOCA) será utilizada, uma ferramenta amplamente reconhecida desenvolvida para identificar um comprometimento cognitivo leve. Em comparação com o Exame Mini Mental do Estado (MMSE), o MOCA exibe maior sensibilidade, particularmente nos estágios iniciais da DA, permitindo a detecção de déficits em áreas como atenção, memória, linguagem, abstração e funções executivas

O MOCA é avaliado em uma escala que varia de 0 a 30, onde pontuações mais altas refletem o desempenho cognitivo superior. Uma pontuação de 26 ou superior é tipicamente considerada dentro da faixa normal, enquanto escores mais baixos indicam diferentes níveis de comprometimento cognitivo.

Precisão na tarefa N-Back (memória de trabalho)

Para avaliar a memória de trabalho, os participantes executarão a tarefa N-BACK (em suas versões de 3-4 tarefas) usando a plataforma PEBL (Psychology Experiment Building Language). O desempenho será medido pela precisão, calculado como a porcentagem de respostas corretas, com porcentagens mais altas indicando melhor desempenho da memória de trabalho. A precisão será registrada em uma escala de 0% a 100%.

Tempo de reação na tarefa N-Back (memória de trabalho)

O tempo de reação dos participantes durante a tarefa N-back será medido em milissegundos, usando a plataforma PEBL. Os tempos de reação mais curtos geralmente indicam processamento cognitivo mais eficiente.

Memória verbal por teste Rey

Uma avaliação abrangente das habilidades neurocognitivas será realizada usando ferramentas neurocomputacionais através da plataforma PEBL (Psychology Experiment Building Language). O teste Rey, administrado via PEBL, será usado para avaliar a memória verbal e a memória visual, fornecendo uma medida integrada de memória episódica. As pontuações para recall imediata variam de 0 a 15 e de 0 a 30 para recuperação atrasada, com pontuações mais altas indicando melhor desempenho da memória verbal.

Memória visual por teste Rey

Uma avaliação abrangente das habilidades neurocognitivas será realizada usando ferramentas neurocomputacionais através da plataforma PEBL (Psychology Experiment Building Language). O teste Rey, administrado via PEBL, será usado para avaliar a memória verbal e a memória visual, fornecendo uma medida integrada de memória episódica. Memória visual: o teste Rey, aplicado através do PEBL, avaliará a recuperação imediata (pontuações de 0 a 15) e recall tardia (pontuações de 0 a 30), com pontuações mais altas refletindo melhor desempenho da memória visual.

Tempo de reação no teste Stroop (atenção)

Para realizar uma avaliação abrangente das habilidades neurocognitivas, as ferramentas neurocomputacionais serão empregadas através da plataforma PEBL (Psychology Experiment Building Language), que oferece uma variedade de testes projetados para medir diferentes aspectos da cognição. O teste Stroop será aplicado para examinar a atenção, especificamente a capacidade de inibir respostas automáticas e gerenciar a atenção na presença de estímulos conflitantes. O tempo de reação será medido pelo tempo de reação (em milissegundos), com tempos mais curtos indicando melhor controle cognitivo.

Precisão no teste de Stroop (atenção)

Para realizar uma avaliação abrangente das habilidades neurocognitivas, as ferramentas neurocomputacionais serão empregadas através da plataforma PEBL (Psychology Experiment Building Language), que oferece uma variedade de testes projetados para medir diferentes aspectos da cognição. A precisão, medida no teste de Stroop, será registrada como a porcentagem de respostas corretas, variando de 0% a 100%, com porcentagens mais altas refletindo melhor desempenho.

Tempo de conclusão no teste KEFS (flexibilidade cognitiva)

Para realizar uma avaliação abrangente das habilidades neurocognitivas, as ferramentas neurocomputacionais serão empregadas através da plataforma PEBL (Psychology Experiment Building Language), que oferece uma variedade de testes projetados para medir diferentes aspectos da cognição. Para avaliar a flexibilidade cognitiva, os D-KEFs serão usados, medindo a capacidade de alternar entre diferentes estratégias e se adaptar a novas demandas. O tempo de conclusão administrado pelo PEBL será medido por tempo de conclusão (em segundos), com tempos mais curtos indicando melhor flexibilidade cognitiva.

Precisão no teste KEFS (flexibilidade cognitiva)

Para realizar uma avaliação abrangente das habilidades neurocognitivas, as ferramentas neurocomputacionais serão empregadas através da plataforma PEBL (Psychology Experiment Building Language), que oferece uma variedade de testes projetados para medir diferentes aspectos da cognição. Para avaliar a flexibilidade cognitiva, os D-KEFs serão usados, medindo a capacidade de alternar entre diferentes estratégias e se adaptar a novas demandas. A precisão medida através dos D-KEFs será registrada, com maior precisão refletindo uma melhor flexibilidade cognitiva.

Precisão no teste Go/No-Go (inibição)

Para realizar uma avaliação abrangente das habilidades neurocognitivas, as ferramentas neurocomputacionais serão empregadas através da plataforma PEBL (Psychology Experiment Building Language), que oferece uma variedade de testes projetados para medir diferentes aspectos da cognição. O teste GO/NO-Go avaliará a inibição, medindo a capacidade de controlar respostas impulsivas a certos estímulos. A precisão será medida pela precisão (a porcentagem de respostas corretas), com pontuações variando de 0% a 100%. Valores mais altos indicam melhor controle sobre a inibição.

Tempo de reação no teste Go/No-Go (inibição)

Para realizar uma avaliação abrangente das habilidades neurocognitivas, as ferramentas neurocomputacionais serão empregadas através da plataforma PEBL (Psychology Experiment Building Language), que oferece uma variedade de testes projetados para medir diferentes aspectos da cognição. O teste GO/NO-Go avaliará a inibição, medindo a capacidade de controlar respostas impulsivas a certos estímulos. O tempo de reação também será avaliado no teste GO/NO-Go. Respostas mais rápidas geralmente indicam inibição mais eficiente dos impulsos. O tempo de reação pode variar dependendo da versão específica da tarefa.

Funções executivas e impulsividade

Para realizar uma avaliação abrangente das habilidades neurocognitivas, as ferramentas neurocomputacionais serão empregadas através da plataforma PEBL (Psychology Experiment Building Language), que oferece uma variedade de testes projetados para medir diferentes aspectos da cognição. O teste de jogo de Cambridge (CGT) será utilizado para avaliar comportamentos de tomada de decisão e risco, fornecendo informações sobre as funções executivas e a impulsividade dos participantes. O desempenho é geralmente avaliado pela precisão (a porcentagem de escolhas corretas) e a inclinação para correr riscos, onde maior precisão indica habilidades mais fortes de tomada de decisão. O comportamento de correr riscos é medido pela quantidade de dinheiro apostada, com apostas maiores indicando uma tendência maior de correr riscos.

Questionário de inventário neuropsiquiátrico (NPI-Q)

Para obter uma compreensão abrangente das manifestações clínicas associadas a DA leve, além das ferramentas neurocognitivas mencionadas, será empregado o Questionário de Inventário Neuropsiquiátrico (NPI-Q). Essa ferramenta permite a identificação e avaliação da gravidade dos sintomas neuropsiquiátricos comuns nessa população, como agitação, depressão, ansiedade, apatia e comportamentos desinibidos, bem como o nível de angústia que esses sintomas causam aos cuidadores. A gravidade de cada sintoma é normalmente classificada em uma escala de 0 a 12, com pontuações mais altas indicando sintomas mais graves. O sofrimento do cuidador é medido em uma escala de 0 a 5, onde pontuações mais altas refletem maior sofrimento.

Composição da microbiota intestinal (sequenciamento do gene 16S rRNA)

Para explorar a influência da suplementação de tributirina na composição da microbiota intestinal, o sequenciamento do gene 16S rRNA será realizado em amostras fecais de participantes antes, no final da suplementação e três meses após sua conclusão. O DNA bacteriano total de amostras de fezes frescas será extraído usando o kit de fezes de DNA rápido (Thermo Fisher Scientific, Califórnia, EUA). O gene 16S rRNA será sequenciado usando iniciadores universais (341F/806R) para atingir a região V3-V4, seguindo métodos descritos em estudos anteriores. Os dados brutos serão processados ​​com o software QIIME2, e a análise bioinformática adicional será realizada usando a plataforma on -line microbiomeanalyst (https://www.microbiomeanalyst.ca). Isso incluirá avaliações da diversidade alfa e beta, análise de microbiomas centrais e modelagem florestal aleatória.

Níveis de AGCC (Acetato, Propionato e Butirato) nas fezes

Para avaliar se a suplementação com butirato promove o aumento dos níveis de AGCC, serão medidos os níveis de acetato, propionato e butirato. As amostras fecais serão recolhidas antes, após 12 meses e três meses após a intervenção. As amostras fecais serão recolhidas em ambiente doméstico utilizando tubos contendo um meio estabilizador. Os tubos serão hermeticamente selados para minimizar o risco de volatilização dos AGCC e garantir a integridade da amostra. Os níveis de AGCC serão quantificados através de cromatografia gasosa-espectrometria de massa (GC-MS) (Agilent Technologies). As unidades de medida dos AGCC serão expressas em μmol/g de fezes.

Permeabilidade intestinal

O ZO-1 plasmático, uma proteína central de suporte das junções herméticas, será quantificado, uma vez que a sua redução reflete a perda estrutural epitelial; sabe-se que a disponibilidade diminuída de butirato reduz a expressão de ZO-1 e aumenta a permeabilidade paracelular. Para complementar este indicador estrutural, a proteína ligadora de LPS (LBP) será medida como o principal marcador da exposição sistémica ao LPS de origem intestinal, representando a via canónica a jusante da disfunção da barreira que ativa a sinalização TLR4-NF-κB implicada na ativação neuroimune relacionada com a doença de Alzheimer. A proteína intestinal de ligação a ácidos gordos 2 (I-FABP2) também será avaliada como um indicador sensível da integridade da membrana dos enterócitos. As amostras serão analisadas por kits ELISA para ZO-1 (Catálogo: EEL211), para LBP (Catálogo: EH297RB) e para I-FABP2 (Catálogo: EHFABP2) da Thermo Fisher (Califórnia, EUA). As amostras serão armazenadas a -80°C até à análise. Os níveis de proteína serão medidos em pg/mL.

Inflamação sistémica

Devido ao butirato ter demonstrado a capacidade de inibir citocinas pró-inflamatórias, ao mesmo tempo que promove a produção de citocinas anti-inflamatórias, bem como reduzir marcadores de stresse oxidativo. Os níveis das citocinas IL-1β, IL-6, TNF-α e IL-10. Serão recolhidas amostras de sangue dos participantes para avaliar as citocinas mencionadas no início, no final da intervenção de 12 semanas e três meses após a sua conclusão, utilizando kits ELISA de acordo com as instruções do fabricante (Thermo Fisher, Califórnia, EUA). As amostras de sangue serão recolhidas em três momentos. Após a recolha das amostras, estas serão centrifugadas a 2000 x g durante 15 minutos, será obtido o soro e as amostras de sangue serão armazenadas a -80°C para análises subsequentes. Os níveis de citocinas serão quantificados em pg/mL.

Níveis séricos de NfL

A cadeia leve de neurofilamento (NfL) será avaliada como um indicador robusto de lesão axonal de grande calibre, comummente elevada em contextos de ativação microglial e sinalização inflamatória periférica. O NfL plasmático será quantificado utilizando kits ELISA comerciais, seguindo as instruções do fabricante (Catálogo para NfL: BMS2362 da Thermo Fisher). Os níveis serão quantificados em pg/mL.

Níveis séricos de pTau217

A tau fosforilada na treonina-217 (pTau217), o marcador periférico mais específico da tauopatia precoce, fornece uma leitura molecular sensível da atividade anormal da τ-cinase, que pode ser exacerbada pela inflamação sistémica crónica. pTau217 será quantificada usando kits ELISA comerciais seguindo as instruções do fabricante (Catálogo. ab318936 da Abcam, Cambridge, Reino Unido). Os níveis serão quantificados em pg/mL.

Níveis séricos da razão Amilóide42/40

A proporção de amilóide-β42/amilóide-β40 (Aβ42/40) será quantificada como um indicador do processamento amiloidogénico, uma vez que alterações periféricas mediadas por citocinas podem modular a atividade da γ- e β-secretase e, assim, influenciar a dinâmica do amilóide-β. A proporção plasmática de Aβ42/40 será quantificada utilizando kits ELISA comerciais, seguindo as instruções do fabricante (Catálogo para Aβ40: KHB3481 e para Aβ42: KHB3441 da Thermo Fisher, Califórnia, EUA). Os níveis serão medidos em pg/ml.

Atenção sustentada por CPT

O Teste de Performance Contínua (CPT), administrado através da plataforma PEBL, será utilizado para avaliar a atenção sustentada, a vigilância e o controlo inibitório. Os participantes devem responder a estímulos-alvo, enquanto inibem as respostas a não-alvos. O desempenho será quantificado usando três índices: (i) tempo de reação (milissegundos), que reflete a velocidade de processamento; (ii) erros de omissão (intervalo de 0 ao número total de tentativas-alvo), indicando falhas na deteção de alvos; e (iii) erros de comissão (intervalo de 0 ao número total de tentativas não-alvo), refletindo respostas impulsivas a não-alvos. Pontuações mais elevadas de omissão e comissão denotam uma atenção sustentada e controlo inibitório mais fracos, enquanto tempos de reação mais rápidos e estáveis refletem um melhor desempenho atencional.