Stressiin liittyvät epigeneettiset muutokset vastasyntyneillä sikiöleikkauksen jälkeen

TAUSTA JA TAVOITTEET:

Open spina bifida tai myelomeningocele (MMC) on tuhoisa synnynnäinen keskushermoston vika, johon ei ole parannuskeinoa. MMC:n etiologia on edelleen huonosti ymmärretty. Hermoputken sulkemisen primaarinen epäonnistuminen kaudaalisessa hermohuokosessa alkion aikana johtaa kehittyvän selkäytimen altistumiseen kohdun ympäristölle. Ilman suojaavaa kudospeittoa voi esiintyä sekundaarista altistuneen hermokudoksen tuhoutumista trauman tai lapsivesien vuoksi koko raskauden ajan. Selkäytimen suojaamiseksi tältä toissijaiselta tuholta sikiön kirurginen korjaus voidaan suorittaa raskausviikkojen 20 ja 26 välillä.

Psykologisesta näkökulmasta sikiön MMC-korjaus on erittäin stressaava tapahtuma sekä äidille että sikiölle. Tähän mennessä äitien ja lasten stressiä MMC-korjausleikkauksen yhteydessä ei ole kuitenkaan koskaan tutkittu. Tästä syystä on epäselvää, liittyykö toimenpide ja sen seuraukset stressiin ja missä määrin, ja onko sillä lyhyt- vai pidemmän aikavälin seurauksia.

Tällä tutkimuksella on kolme tavoitetta:

1. Osoittavatko vastasyntyneet MMC:n sikiöleikkauksen jälkeen epigeneettisiä muutoksia geeneissä, jotka osallistuvat stressin säätelyyn?
2. Mihin lääketieteellisiin ja psykososiaalisiin muuttujiin epigeneettiset muutokset liittyvät?
3. Onko sikiöleikkauksen jälkeen syntyneillä vauvoilla 3 kuukauden iässä vaikeampi temperamentti verrattuna verrokkeihin?

MENETELMÄT:

Näyte: Tutkimukseen osallistuvat vastasyntyneet sikiöleikkauksen jälkeen Zürichin yliopistollisessa sairaalassa ja kaksi kontrolliryhmää. Yksi sisältää terveet vastasyntyneet ja toinen, joka sisältää vastasyntyneet synteettisille glukokortikoideille (sGC) raskauden aikana altistumisen jälkeen. Jokaisessa ryhmässä tulee olla n = 30 vastasyntynyttä (eli tutkimukseen osallistuneiden kokonaismäärä: n = 90).

Rekrytointi ja menettelyt: Rekrytointi tapahtuu yliopistollisessa lastensairaalassa ja Zürichin yliopistollisessa sairaalassa, ja sitä jatketaan, kunnes vaadittu näytekoko on saavutettu. Jokaiselle MMC-potilaalle suoritetaan toissijainen verrokkilapsen rekrytointi ryhmiin 2 ja 3 (sovitettu lapsen sukupuolen mukaan). Vastuullinen tutkimushenkilöstö ottaa yhteyttä kaikkien opintoryhmien vanhempiin sisäänotto- ja poissulkemiskriteerien tarkistamisen jälkeen. Heille tiedotetaan tutkimuksesta suullisesti ja heille toimitetaan opintotietokirje (ks. liite). Opintohenkilöstö ottaa vanhempiin uudelleen yhteyttä >24h jälkeen kasvokkain tai puhelimitse tarvittaessa kysymyksiin vastaamiseksi. Jos vanhemmat suostuvat osallistumaan tutkimukseen, he toimittavat allekirjoitetun kirjallisen suostumuslomakkeen (ks. liite). Tutkimukseen osallistumisen jälkeen tutkimushenkilöstö ottaa uudelleen yhteyttä vanhemmiin sairaalassa noin 24-36 tuntia syntymän jälkeen selittääkseen uudelleen sylkinäytteiden ottamisen. Sylkinäytteet otetaan sitten 24-72 tunnin välillä synnytyksen jälkeen. Kuusi viikkoa ja 3 kuukautta synnytyksen jälkeen vanhemmat saavat tutkimuskyselyt postitse ja heitä pyydetään täyttämään ja palauttamaan ne viikon sisällä. Jos kyselylomakkeita ei saada 10 päivän kuluessa, tutkimushenkilökunta ottaa yhteyttä vanhempiin puhelimitse lempeän muistutuksen saamiseksi. Vanhemmat eivät saa taloudellista korvausta tutkimukseen osallistumisesta.

Kerätyt tiedot:

-) DNA- ja RNA-näytteiden kerääminen lapselta tapahtuu 24-72 tunnin välillä sairaalahoidon aikana koulutetun tutkimusprojektihenkilöstön toimesta. DNA:n ja RNA:n saamiseksi kerätään sylkeä erityisillä sienivälineillä, jotka on suunniteltu käytettäväksi vauvoille, jotka eivät voi sylkeä itsenäisesti.

DNA:ta varten käytetään 2x ORAcollect for pediatric -laitetta (OC-175; DNA Genotek Inc) syljen keräämiseen riittävän DNA-näytteen saamiseksi.

RNA:ta varten käytetään 2x lasten syljenkeräyslaitteita (CP-190; DNA Genotek Inc.) syljen keräämiseen, jotta vastasyntyneiltä saadaan riittävästi RNA-näytettä.

• Lääketieteelliset tiedot: a) Lapsi: Raskausikä syntymähetkellä; sukupuoli; syntymäpituus ja prosenttipiste; syntymäpaino ja prosenttipiste; pään ympärysmitta syntymähetkellä ja prosenttipiste; Apgar-pisteet; napavaltimon ph ja laktaatti; mekoniumin värjätty lapsivesi; Raskausaika sikiön leikkauksessa; sikiöleikkauksen aika ja pituus; sikiön sijoittaminen välttämätön; siirto neonatologiaan (ryhmät 2 ja 3). b) Äiti: Äidin ikä; pariteetti; raskausikä glukokortikoidihoidossa; ennenaikaisen synnytyksen hoito; lääkkeet raskauden aikana; kirurgia ja perinataaliset muuttujat; historia tupakoinnin, alkoholin, nikotiinin, marihuanan ja muiden laittomien huumeiden osalta; Indikaatio ECS:lle (ryhmät 2 ja 3).
• Psykososiaaliset tiedot: Seuraavat muuttujat on arvioitava äideiltä standardoiduilla ja validoiduilla kyselylomakkeilla: syntymämaa (vanhemmat, isovanhemmat); Sosioekonominen asema, äitien ja vanhempien koulutus; nykyinen työtilanne (ei, osa-aikainen, kokopäiväinen); äidin ja isän traumahistoria (Childhood Trauma Questionnaire - Short Form, Bernstein & Fink, 1998; Karos et al. 2014); merkittävät elämäntapahtumat raskauden aikana (Life Event Scale, Landolt & Vollrath, 1998); äidin ja isän subjektiivinen stressi raskauden aikana (Perceived Stress Scale PSS-10, Cohen, Kamarck, & Mermelstein (1983) ja Klein et al. (2016); äidin ja isän mielenterveys sekä takautuvasti raskauden aikana että tällä hetkellä syntymän jälkeisissä arviointipisteissä : ahdistuneisuus ja masennus Spitzerin, Kroenken ja Williamsin (1999) Patient Health Questionnaire PHQ:n kahdella moduulilla; posttraumaattinen stressihäiriö International Trauma Questionnaire ITQ:n avulla (Cloitre et al., 2018) ja lapsen temperamentti Rothbartin (1981) Infant Behavior Questionnaire IBQ - Very Short Form keinoin. Kaikki toimenpiteet ovat standardoituja ja saatavilla validoituina saksalaisina versioina.

Tilastolliset analyysit: Tavoite 1 tutkitaan ANCOVA:illa, jotta voidaan verrata kokonaismetylaatiota/geenin ilmentymistä (mRNA-taso) tutkituilla geenialueilla kolmessa ryhmässä. Metylaatiotasojen ja geenin ilmentymisen välistä korrelaatiota tutkitaan odottaen, että hypermetylaatio indusoi vähentynyttä geeniekspressiota ja päinvastoin.

Tavoitetta 2 tarkastellaan ennustajamuuttujien ja kokonaismetylaation välisillä (osittaisilla) korrelaatioanalyyseillä. Jos vaatimukset täyttyvät, suoritetaan monimuuttujaanalyysejä.

Tavoitetta 3 tarkastellaan ANCOVA-testeillä vertaamalla IBQ-pisteitä kolmen ryhmän välillä.

Tietoja ei muunneta ennen analysointia. Jos tiedot eivät täytä valittujen tilastollisten testien vaatimuksia, niin muokatut testit (esim. yksisuuntainen testaus) tai sopivat testit (esim. ei-parametrisiä menetelmiä) käytetään.

Tilastollinen analyysi suoritetaan joko yhteiskuntatieteiden tilastopaketilla (SPSS, versio 25) tai tilasto-ohjelmalla R. Tilastollinen merkitsevyys asetetaan merkitsevyystasolle α= <.05.

Otoskoko: Tehoanalyysilaskelman mukaan G*Power 3.1 -ohjelmalla (Faul, Erdfelder, Buchner & Lang, 2009), vaadittu otoskoko ANCOVAlle, jossa on 3 ryhmää, vaikutuskoko d=0,4 (pieni vaikutus ) ja 0,90:n potenssi on n=84.