Стресс-ассоциированные эпигенетические изменения у новорожденных после операций на плоде

ПРЕДПОСЫЛКИ И ЦЕЛИ:

Открытая расщелина позвоночника или миеломенингоцеле (MMC) представляет собой разрушительный врожденный дефект центральной нервной системы, от которого нет лекарства. Этиология ММС остается малоизученной. Первичная недостаточность закрытия нервной трубки в каудальном нейропоре в эмбриональном периоде приводит к тому, что развивающийся спинной мозг подвергается воздействию среды матки. Без защитного тканевого покрытия во время беременности может произойти вторичное разрушение открытой нервной ткани из-за травмы или амниотической жидкости. Чтобы защитить спинной мозг от этой вторичной деструкции, между 20 и 26 неделями гестации может быть проведена хирургическая коррекция плода.

С психологической точки зрения репарация ГМК у плода представляет собой крайне стрессовое событие как для матери, так и для плода. Однако до настоящего времени стресс у матерей и детей при пренатальных операциях по поводу пластики ММК никогда не изучался. Поэтому неясно, связаны ли и в какой степени процедура и ее последствия со стрессом, и есть ли краткосрочные или долгосрочные последствия.

Цели этого исследования триедины:

1. Имеются ли у новорожденных после фетальной хирургии по поводу ММС эпигенетические изменения в генах, участвующих в регуляции стресса?
2. С какими медицинскими и психосоциальными переменными связаны эпигенетические изменения?
3. Имеют ли дети после операции на плоде в возрасте 3 месяцев более сложный темперамент по сравнению с контрольной группой?

МЕТОДЫ:

Образец: в исследование будут включены новорожденные после внутриутробной операции по поводу MMC в Университетской клинике Цюриха и две контрольные группы. Один включает здоровых новорожденных, а другой включает новорожденных после внутриутробного воздействия синтетических глюкокортикоидов (сГК) во время беременности. В каждой группе должно быть n=30 новорожденных (т.е. общее количество участников исследования: n=90).

Набор и процедуры: Набор будет проводиться в Детской университетской больнице и Университетской больнице Цюриха и будет продолжаться до тех пор, пока не будет достигнут необходимый размер выборки. Для каждого ММС-пациента будет проводиться вторичный набор контрольного ребенка во 2-ю и 3-ю группы (подобранные по полу ребенка). Ответственный исследовательский персонал свяжется с родителями всех учебных групп после проверки критериев включения и исключения. Они будут устно проинформированы об исследовании, и им будет предоставлено информационное письмо об исследовании (см. Приложение). Исследовательский персонал снова свяжется с родителями через > 24 часов лично или по телефону, чтобы ответить на любые вопросы, если это необходимо. Если родители согласны на участие в исследовании, они должны предоставить подписанную письменную форму информированного согласия (см. приложение). После включения в исследование исследовательский персонал снова свяжется с родителями в больнице примерно через 24-36 часов после рождения, чтобы повторно объяснить сбор образцов слюны. Затем образцы слюны будут собираться между 24 и 72 часами после родов. Через шесть недель и 3 месяца после родов родители получат анкеты по почте, и их попросят заполнить и вернуть их в течение 1 недели. Если анкеты не будут получены в течение 10 дней, исследовательский персонал свяжется с родителями по телефону для мягкого напоминания. Родители не получают материальной компенсации за участие в исследовании.

Собранные данные:

-) Сбор образцов ДНК и РНК у ребенка будет проводиться между 24 и 72 часами жизни во время госпитализации обученным персоналом исследовательского проекта. Для получения ДНК и РНК слюну будут собирать с помощью специальных губчатых устройств, предназначенных для использования у младенцев, которые не могут плеваться самостоятельно.

Для ДНК будет использоваться 2x ORAcollect для педиатрии (OC-175; DNA Genotek Inc) для сбора слюны, чтобы получить достаточное количество образца ДНК.

Для РНК будут использоваться 2 устройства для сбора слюны для педиатрии (CP-190; DNA Genotek Inc) для сбора слюны, чтобы получить достаточное количество образцов РНК от новорожденных.

• Медицинские данные: а) Ребенок: гестационный возраст при рождении; Пол; длина тела при рождении и процентиль; вес при рождении и процентиль; окружность головы при рождении и процентиль; оценка по шкале Апгар; ph и лактат пупочной артерии; околоплодные воды, окрашенные меконием; Срок беременности при фетальной хирургии; время и продолжительность операции на плоде; необходимое положение плода; перевод в неонатологию (2 и 3 группа). б) Мать: Материнский возраст; паритет; срок беременности при лечении глюкокортикоидами; лечение преждевременных родов; лекарства во время беременности; хирургия и перинатальные переменные; история с точки зрения курения, алкоголя, никотина, марихуаны, других запрещенных наркотиков; Показания к ЭКС (группа 2 и 3).
• Психосоциальные данные: Следующие переменные должны быть оценены у матерей с помощью стандартизированных и утвержденных вопросников: страна рождения (родители, бабушки и дедушки); Социально-экономический статус, материнское и родительское образование; текущая ситуация с работой (нет, неполный рабочий день, полный рабочий день); материнская и отцовская травма в анамнезе (опросник детской травмы — краткая форма от Bernstein & Fink, 1998; Karos et al., 2014); значимые жизненные события во время беременности (Шкала жизненных событий от Landolt & Vollrath, 1998); субъективный стресс матери и отца во время беременности (Шкала воспринимаемого стресса PSS-10 от Cohen, Kamarck, & Mermelstein (1983) и Klein et al. (2016); психическое здоровье матери и отца как ретроспективно во время беременности, так и в настоящее время в точках оценки после рождения тревожность и депрессия с помощью двух модулей Опросника здоровья пациента PHQ от Spitzer, Kroenke, & Williams (1999); посттравматическое стрессовое расстройство с помощью Международного опросника о травмах ITQ (Cloitre et al., 2018) и темперамент младенца с помощью средства Опросника поведения младенцев IBQ - очень короткая форма Ротбарта (1981). Все меры стандартизированы и доступны в проверенных немецких версиях.

Статистический анализ: цель 1 будет исследована с помощью ANCOVA для сравнения общего метилирования/экспрессии генов (уровень мРНК) для изучаемых областей генов в 3 группах. Будет исследована корреляция между уровнями метилирования и экспрессией генов, ожидая, что гиперметилирование вызывает снижение экспрессии генов и наоборот.

Цель 2 будет изучена с помощью (частичного) корреляционного анализа между предикторными переменными и общим метилированием. Если требования соблюдены, будет проведен многофакторный анализ.

Цель 3 будет изучена с помощью ANCOVA, сравнивающих оценки IBQ в трех группах.

Данные не будут преобразованы перед анализом. Если данные не соответствуют требованиям для выбранных статистических тестов, модифицированные тесты (например, одностороннее тестирование) или соответствующие тесты (например, будут использоваться непараметрические методы).

Статистический анализ будет выполняться либо с помощью программы «Статистический пакет для социальных наук» (SPSS, версия 25), либо с помощью статистической программы R. Статистическая значимость будет установлена ​​на уровне значимости α = <0,05.

Размер выборки: Согласно расчету анализа мощности с помощью программы G*Power 3.1 (Faul, Erdfelder, Buchner & Lang, 2009), требуемый размер выборки для ANCOVA с 3 группами, размер эффекта d = 0,4 (малый эффект ), а степень 0,90 равна n = 84.