Alterazioni epigenetiche associate allo stress nei neonati dopo chirurgia fetale

BACKGROUND E OBIETTIVI:

La spina bifida aperta o mielomeningocele (MMC) è un difetto congenito devastante del sistema nervoso centrale per il quale non esiste una cura. L'eziologia della MMC rimane poco conosciuta. Il fallimento primario della chiusura del tubo neurale al neuroporo caudale nel periodo embrionale provoca l'esposizione del midollo spinale in via di sviluppo all'ambiente uterino. Senza copertura tissutale protettiva, durante la gestazione può verificarsi la distruzione secondaria del tessuto neurale esposto a causa di traumi o liquido amniotico. Per proteggere il midollo spinale da questa distruzione secondaria, è possibile eseguire una riparazione chirurgica del feto tra la 20a e la 26a settimana di gestazione.

Da un punto di vista psicologico la riparazione fetale della MMC costituisce un evento altamente stressante sia per la madre che per il feto. Ad oggi, tuttavia, lo stress delle madri e dei bambini in caso di intervento chirurgico prenatale per la riparazione di MMC non è mai stato studiato. Non è quindi chiaro se e fino a che punto la procedura e le sue conseguenze siano associate allo stress e se vi siano conseguenze a breve oa lungo termine.

Gli obiettivi di questo studio sono tre:

1. I neonati dopo un intervento chirurgico fetale per MMC mostrano alterazioni epigenetiche nei geni coinvolti nella regolazione dello stress?
2. A quali variabili mediche e psicosociali sono associate le alterazioni epigenetiche?
3. All'età di 3 mesi, i neonati dopo un intervento chirurgico fetale hanno un temperamento più difficile rispetto ai controlli?

METODI:

Campione: lo studio includerà neonati dopo chirurgia fetale per MMC presso l'ospedale universitario di Zurigo e due gruppi di controllo. Uno comprendente neonati sani e un altro comprendente neonati dopo esposizione prenatale a glucocorticoidi sintetici (sGC) in gravidanza. Ogni gruppo deve includere n=30 neonati (ovvero numero totale di partecipanti allo studio: n=90).

Reclutamento e procedure: il reclutamento avrà luogo presso l'Ospedale pediatrico universitario e l'Ospedale universitario di Zurigo e continuerà fino al raggiungimento della dimensione del campione richiesta. Per ogni paziente MMC, verrà eseguito il reclutamento secondario di un bambino di controllo per il gruppo 2 e 3 (appaiato per sesso del bambino). I genitori di tutti i gruppi di studio saranno contattati dal personale dello studio responsabile dopo aver verificato i criteri di inclusione ed esclusione. Saranno informati oralmente sullo studio e verrà fornita la lettera informativa sullo studio (vedi allegato). I genitori saranno ricontattati dopo> 24 ore faccia a faccia o telefonicamente dal personale dello studio per rispondere a qualsiasi domanda, se necessario. Se i genitori accettano di partecipare allo studio, forniranno il modulo di consenso informato scritto firmato (vedi allegato). Dopo l'inclusione nello studio, i genitori saranno ricontattati in ospedale dal personale dello studio circa 24-36 ore dopo la nascita per spiegare nuovamente la raccolta dei campioni di saliva. I campioni di saliva verranno quindi raccolti tra le 24 e le 72 ore dopo il parto. Sei settimane e 3 mesi dopo il parto, i genitori riceveranno i questionari dello studio per posta e verrà chiesto loro di completarli e restituirli entro 1 settimana. Se i questionari non vengono ricevuti dopo 10 giorni, il personale dello studio contatterà telefonicamente i genitori per un gentile sollecito. I genitori non sono compensati finanziariamente per la partecipazione allo studio.

Dati raccolti:

-) La raccolta del campione di DNA e RNA dal bambino avverrà tra le 24 e le 72 ore di vita durante il ricovero da personale addestrato del progetto di ricerca. Per ottenere DNA e RNA, la saliva verrà raccolta utilizzando speciali dispositivi a spugna progettati per l'uso con neonati che non possono sputare autonomamente.

Per il DNA, verranno utilizzati 2x ORAcollect for pediatrics (OC-175; DNA Genotek Inc) per raccogliere la saliva al fine di ottenere un campione di DNA sufficiente.

Per l'RNA, verranno utilizzati 2 dispositivi di raccolta della saliva per pediatria (CP-190; DNA Genotek Inc) per raccogliere la saliva al fine di ottenere un campione di RNA sufficiente dai neonati.

• Dati sanitari: a) Bambino: età gestazionale alla nascita; Genere; lunghezza e percentile alla nascita; peso alla nascita e percentile; circonferenza cranica alla nascita e percentile; Punteggio Apgar; ph e lattato dell'arteria ombelicale; liquido amniotico macchiato di meconio; Età gestazionale alla chirurgia fetale; tempo e durata della chirurgia fetale; posizionamento del feto necessario; trasferimento in neonatologia (gruppo 2 e 3). b) Madre: età materna; parità; età gestazionale al trattamento con glucocorticoidi; trattamento del travaglio pretermine; farmaci durante la gravidanza; chirurgia e variabili perinatali; storia in termini di fumo, alcol, nicotina, marijuana, altre droghe illecite; Indicazione per ECS (gruppo 2 e 3).
• Dati psicosociali: le seguenti variabili devono essere valutate dalle madri mediante questionari standardizzati e convalidati: paese di nascita (genitori, nonni); Stato socio-economico, istruzione materna e parentale; situazione lavorativa attuale (no, part-time, full-time); storia del trauma materno e paterno (Childhood Trauma Questionnaire - Short Form from Bernstein & Fink, 1998; Karos et al. 2014); eventi di vita significativi durante la gravidanza (Life Event Scale di Landolt & Vollrath, 1998); stress soggettivo materno e paterno durante la gravidanza (Perceived Stress Scale PSS-10 di Cohen, Kamarck, & Mermelstein (1983) e Klein et al. (2016); salute mentale materna e paterna sia retrospettivamente durante la gravidanza che attualmente ai punti di valutazione dopo la nascita : ansia e depressione mediante due moduli del Patient Health Questionnaire PHQ di Spitzer, Kroenke, & Williams (1999); disturbo da stress post-traumatico mediante l'International Trauma Questionnaire ITQ (Cloitre et al., 2018) e il temperamento del bambino mediante mezzo dell'Infant Behavior Questionnaire IBQ - Very Short Form di Rothbart (1981). Tutte le misure sono standardizzate e disponibili in versioni tedesche convalidate.

Analisi statistiche: L'Obiettivo 1 sarà esaminato con ANCOVA per confrontare la metilazione totale / l'espressione genica (livello di mRNA) per le regioni geniche studiate nei 3 gruppi. Verrà studiata la correlazione tra i livelli di metilazione e l'espressione genica, prevedendo che l'ipermetilazione induca una ridotta espressione genica e viceversa.

L'obiettivo 2 sarà esaminato mediante analisi correlazionali (parziali) tra variabili predittive e metilazione totale. Se i requisiti sono soddisfatti, verranno eseguite analisi multivariate.

L'obiettivo 3 sarà esaminato con ANCOVA confrontando i punteggi IBQ tra i tre gruppi.

I dati non verranno trasformati prima dell'analisi. Se i dati non soddisfano i requisiti per i test statistici selezionati, i test modificati (ad es. test unidirezionale) o test appropriati (ad es. metodi non parametrici).

L'analisi statistica verrà eseguita con il programma Pacchetto statistico per le scienze sociali (SPSS, versione 25) o con il programma statistico R. La significatività statistica sarà impostata su un livello di significatività di α= <.05.

Dimensione del campione: secondo un calcolo di analisi della potenza con il programma G*Power 3.1 (Faul, Erdfelder, Buchner & Lang, 2009), la dimensione del campione richiesta per un ANCOVA con 3 gruppi, una dimensione dell'effetto di d=0,4 (piccolo effetto ) e una potenza di .90 è n=84.