Stresszel összefüggő epigenetikai változások újszülötteknél magzati műtét után

HÁTTÉR ÉS CÉLKITŰZÉS:

A nyitott spina bifida vagy myelomeningocele (MMC) a központi idegrendszer pusztító veleszületett rendellenessége, amelyre nincs gyógymód. Az MMC etiológiája továbbra is kevéssé ismert. Az embrionális periódusban a caudalis neuropórusnál a neurális csőzáródás elsődleges meghibásodása a fejlődő gerincvelő méh környezettel való érintkezését eredményezi. Védőszöveti lefedettség nélkül a szabaddá vált idegszövet másodlagos tönkretétele trauma vagy magzatvíz következtében a terhesség alatt előfordulhat. A gerincvelő ettől a másodlagos pusztulástól való megóvása érdekében magzati sebészeti javítást lehet végezni a terhesség 20. és 26. hete között.

Pszichológiai szempontból az MMC magzati helyreállítása rendkívül megterhelő esemény mind az anya, mind a magzat számára. A mai napig azonban soha nem tanulmányozták az anyák és a gyermekek stresszét az MMC helyreállítására irányuló prenatális műtét esetén. Nem világos tehát, hogy az eljárás és annak következményei összefüggenek-e stresszel, és milyen mértékben, illetve vannak-e rövid vagy hosszabb távú következményei.

Ennek a tanulmánynak három célja van:

1. Az MMC-vel végzett magzati műtét után újszülöttek epigenetikai változásokat mutatnak a stresszszabályozásban szerepet játszó génekben?
2. Milyen orvosi és pszichoszociális változókhoz kapcsolódnak az epigenetikai változások?
3. 3 hónapos korban a magzati műtét utáni csecsemők vérmérséklete nehezebb a kontrollokhoz képest?

MÓD:

Minta: A vizsgálatba a Zürichi Egyetemi Kórházban végzett magzati műtét utáni újszülötteket és két kontrollcsoportot vonnak be. Az egyikbe az egészséges újszülöttek, a másikba pedig a terhesség alatti szintetikus glükokortikoidok (sGC) prenatális expozíciója után újszülöttek tartoznak. Minden csoportnak n=30 újszülöttet kell tartalmaznia (azaz a vizsgálatban résztvevők teljes száma: n=90).

Toborzás és eljárások: A toborzás az Egyetemi Gyermekkórházban és a Zürichi Egyetemi Kórházban történik, és a szükséges mintanagyság eléréséig folytatódik. Minden MMC-betegnél a 2. és 3. csoportba tartozó kontrollgyerek másodlagos toborzása történik (gyermeknemhez igazítva). Az összes vizsgálati csoport szüleit a felelős vizsgálati személyzet megkeresi, miután ellenőrizték a felvételi és kizárási kritériumokat. A vizsgálatról szóban tájékoztatják őket, és átadják a vizsgálati tájékoztató levelet (lásd a mellékletet). A szülőkkel több mint 24 óra elteltével személyesen vagy telefonon újra felveszi a kapcsolatot a vizsgálati személyzet, hogy válaszoljanak a kérdésekre, ha szükséges. Ha a szülők hozzájárulnak a vizsgálatban való részvételhez, be kell nyújtaniuk az aláírt írásos beleegyező nyilatkozatot (lásd a mellékletet). A vizsgálatba való bevonást követően a vizsgálati személyzet a születés után körülbelül 24-36 órával ismét kapcsolatba lép a szülőkkel a kórházban, hogy újra elmagyarázzák a nyálminták gyűjtését. A nyálmintákat ezután a szülés után 24 és 72 óra között veszik. A szülés után hat héttel és 3 hónappal a szülők postai úton kapják meg a vizsgálati kérdőíveket, és 1 héten belül felkérik őket, hogy töltsék ki és küldjék vissza. Ha a kérdőívek 10 napon belül nem érkeznek meg, a vizsgálati személyzet telefonon felveszi a kapcsolatot a szülőkkel egy szelíd emlékeztetőért. A szülők nem kapnak anyagi ellentételezést a vizsgálatban való részvételért.

Összegyűjtött adatok:

-) A DNS- és RNS-mintagyűjtés a gyermektől 24 és 72 óra között zajlik a kórházi kezelés alatt a kutató projektben képzett személyzet által. A DNS és RNS kinyerése érdekében a nyálat összegyűjtik speciális szivacsos eszközökkel, amelyeket olyan csecsemők számára terveztek, akik nem tudnak önállóan köpni.

A DNS esetében a 2x ORAcollect gyermekgyógyászat (OC-175; DNA Genotek Inc) segítségével gyűjtik össze a nyált, hogy elegendő DNS-mintát kapjanak.

Az RNS esetében 2x gyermekgyógyászati ​​nyálgyűjtő eszközt (CP-190; DNA Genotek Inc) használnak majd a nyálgyűjtésre, hogy elegendő RNS-mintát nyerjenek az újszülöttektől.

• Orvosi adatok: a) Gyermek: terhességi kor születéskor; nem; születési hossz és százalékos; születési súly és százalékos; fej kerülete születéskor és percentilis; Apgar pontszám; köldökartéria ph és laktát; mekóniummal festett magzatvíz; Terhességi kor a magzati műtétnél; a magzati műtét ideje és hossza; szükséges a magzat pozicionálása; áthelyezés a neonatológiára (2. és 3. csoport). b) Anya: Anyai életkor; paritás; terhességi kor a glükokortikoid kezelés során; koraszülés kezelése; gyógyszerek terhesség alatt; műtét és perinatális változók; dohányzás, alkohol, nikotin, marihuána és egyéb tiltott kábítószerek előzményei; ECS indikációja (2. és 3. csoport).
• Pszichoszociális adatok: A következő változókat kell az anyáktól standardizált és validált kérdőívekkel értékelni: születési ország (szülők, nagyszülők); Társadalmi-gazdasági helyzet, anyai és szülői végzettség; jelenlegi munkahelyi helyzet (nem, részmunkaidős, teljes munkaidős); anyai és apai traumatörténet (Childhood Trauma Questionnaire – Short Form from Bernstein & Fink, 1998; Karos et al. 2014); jelentős életesemények a terhesség alatt (Landolt és Vollrath Life Event Scale, 1998); anyai és apai szubjektív stressz a terhesség alatt (Perceived Stress Scale PSS-10, Cohen, Kamarck és Mermelstein (1983) és Klein et al. (2016); anyai és apai mentális egészség mind retrospektíven a terhesség alatt, mind pedig jelenleg a születés utáni értékelési pontokon : szorongás és depresszió a Patient Health Questionnaire PHQ két modulja segítségével (Spitzer, Kroenke és Williams (1999), poszttraumás stressz zavar a Nemzetközi Trauma Kérdőív ITQ segítségével (Cloitre et al., 2018) és a csecsemő temperamentuma A csecsemő viselkedési kérdőívének (IBQ - Very Short Form) eszközei Rothbarttól (1981). Minden intézkedés szabványosított, és érvényesített német változatban is elérhető.

Statisztikai elemzések: Az 1. célt ANCOVA-kkal vizsgáljuk, hogy összehasonlítsuk a teljes metilációt/génexpressziót (mRNS-szint) a vizsgált génrégiókban a 3 csoportban. Megvizsgálják a metilációs szintek és a génexpresszió közötti összefüggést, arra számítva, hogy a hipermetiláció csökkent génexpressziót indukál, és fordítva.

A 2. célt a prediktorváltozók és a teljes metiláció közötti (részleges) korrelációs elemzésekkel vizsgáljuk. Ha a követelmények teljesülnek, többváltozós elemzéseket kell végezni.

A 3. célt ANCOVA-kkal vizsgáljuk, összehasonlítva a három csoport IBQ-pontszámait.

Az adatok az elemzés előtt nem kerülnek átalakításra. Ha az adatok nem felelnek meg a kiválasztott statisztikai tesztek követelményeinek, akkor módosított tesztek (pl. egyirányú tesztelés) vagy megfelelő tesztek (pl. nem paraméteres módszereket) fognak alkalmazni.

A statisztikai elemzés vagy a Társadalomtudományi Statisztikai Csomag (SPSS, Version 25) vagy az R statisztikai programmal történik. A statisztikai szignifikancia α= <,05 szignifikanciaszintre lesz beállítva.

Mintanagyság: A G*Power 3.1 programmal végzett teljesítményelemző számítás szerint (Faul, Erdfelder, Buchner & Lang, 2009), a szükséges mintanagyság egy 3 csoportos ANCOVA-hoz, d=0,4 hatásmérettel (kis hatás) ) és ,90 hatványa n=84.