Activité d'ensemencement de l'agrégation de l'a-synucléine plasmatique comme nouveau biomarqueur pour la maladie neurodégénérative

La maladie à synucléine, également connue sous le nom de synucléinopathies, est un terme général désignant une classe de maladies dégénératives. Elle comprend principalement la maladie de Parkinson (MP), la démence à corps de Lewy (DCL), l'atrophie multisystématisée (AMS) et ainsi de suite. La maladie se caractérise par le repliement anormal de l'alpha-synucléine (α-syn) dans le système nerveux périphérique et central, entraînant la production de corps de Lewy, de neurites de Lewy, de neurones et d'inclusions cytoplasmiques gliales dans les neurones ou les cellules gliales. La localisation intracellulaire et le schéma d'accumulation de l'α-syn varient dans différentes maladies à synucléine. Il existe des conditions qui se chevauchent entre les maladies à synucléine, ce qui rend également la précision du diagnostic clinique des maladies à synucléine très faible. Un diagnostic définitif ne peut être posé qu'après le décès du patient et l'évaluation d'échantillons cérébraux par coloration immunohistochimique. Par conséquent, afin d'intervenir et de sauver la maladie à synucléine à l'avance, il est nécessaire de développer des méthodes de diagnostic plus précises et moins invasives.

La conversion induite par secousses en temps réel (RT-QuIC) est une méthode d'amplification in vitro de graines de protéines pathogènes, qui peut permettre aux protéines graines ayant une capacité d'amplification in vitro de transformer des substrats en graines mal repliées dans des conditions spécifiques. RT-QuIC était initialement utilisé dans le diagnostic des patients atteints de protéine prion. La technique peut identifier la protéine prion sous forme mal repliée dans le liquide céphalo-rachidien des patients atteints de la maladie de Creutzfeldt-Jakob avec une spécificité de 100% et une sensibilité de 95-98%, elle a donc été intégrée dans les critères de diagnostic clinique de la maladie de Creutzfeldt-Jakob sporadique. Des études ont montré que des graines pathogènes extraites du liquide céphalo-rachidien ou d'autres fluides ou tissus biologiques des patients sont incubées avec des substrats protéiques recombinants, et l'utilisation de secousses intermittentes pour promouvoir l'interaction entre la graine et le substrat peut forcer le substrat à se transformer en graines de protéines pathogènes. Le processus de réaction RT-QuIC est surveillé en temps réel par un détecteur à l'intérieur de la machine pour la thioflavine, un colorant fluorescent qui fluoresce lorsqu'il se lie à la couche lamellaire bêta, ce qui est également typique des fibrilles amyloïdes. Des études ont montré que le test du liquide céphalo-rachidien des patients avec RT-QuIC peut distinguer avec précision la démence à corps de Lewy de la démence non parkinsonienne. Dans cette étude, la technique RT-QuIC a été utilisée pour amplifier l'α-syn mal repliée dans des échantillons cliniques afin d'explorer les différences de caractéristiques protéiques entre les maladies à synucléine, et de tenter de diagnostiquer les maladies à synucléine par cette méthode. Premièrement, des cas cliniques de maladie à synucléinopathie ont été inclus, et le plasma de 100 sujets témoins, 221 cas de patients MP et 127 cas de patients AMS, 10 cas de patients PSP, a été établi. En utilisant la technologie RT-QuIC, nous avons utilisé aSyn (préparé avec succès dans notre laboratoire) pour amplifier le plasma des sujets normaux et des patients atteints de synucléinopathies. Il a été constaté que l'intensité de fluorescence maximale (valeur extrême), le temps de pic, K/2 (pente à valeur extrême/2) et Tmax/2 (temps pour atteindre valeur extrême/2) peuvent être utilisés comme indicateurs de diagnostic et de diagnostic différentiel pour les synucléinopathies.