Attività di Semina dell'Aggregazione dell'a-Sinucleina Plasmatica come Nuovo Biomarcatore per le Malattie Neurodegenerative

La sinucleinopatia, nota anche come Sinucleinopatie, è un termine generale per una classe di malattie degenerative. Include principalmente il morbo di Parkinson (PD), la demenza a corpi di Lewy (DLB), l'atrofia multisistemica (MSA) e così via. La malattia è caratterizzata dalla piegatura anormale dell'alfa-sinucleina (α-syn) nel sistema nervoso periferico e centrale, che porta alla produzione di corpi di Lewy, neuriti di Lewy, neuroni e corpi di inclusione citoplasmatica gliale nei neuroni o nelle cellule gliali. La posizione intracellulare e il modello di accumulo di α-syn variano nelle diverse sinucleinopatie. Ci sono condizioni sovrapposte tra le sinucleinopatie, il che rende anche la precisione della diagnosi clinica delle sinucleinopatie molto bassa. Una diagnosi definitiva può essere fatta solo dopo la morte del paziente e la valutazione di campioni cerebrali mediante colorazione immunoistochimica. Pertanto, per intervenire e salvare la sinucleinopatia in anticipo, è necessario sviluppare metodi diagnostici più accurati e meno invasivi.

La conversione indotta da scuotimento in tempo reale (RT-QuIC) è un metodo per l'amplificazione in vitro di semi proteici patogeni, che può consentire a proteine seme con capacità di amplificazione in vitro di trasformare substrati in semi mal ripiegati in condizioni specifiche. RT-QuIC è stato originariamente utilizzato nella diagnosi di pazienti con proteina prionica. La tecnica può identificare la proteina prionica nella forma mal ripiegata nel liquido cerebrospinale di pazienti con malattia di Creutzfeldt-Jakob con una specificità del 100% e una sensibilità del 95-98%, quindi è stata incorporata nei criteri diagnostici clinici per la malattia di Creutzfeldt-Jakob sporadica. Gli studi hanno dimostrato che semi patogeni estratti dal liquido cerebrospinale dei pazienti o da altri fluidi biologici o tessuti vengono incubati con substrati proteici ricombinanti, e l'uso di scuotimento intermittente per promuovere l'interazione tra il seme e il substrato può forzare il substrato a trasformarsi in semi proteici patogeni. Il processo di reazione RT-QuIC viene monitorato in tempo reale da un rivelatore all'interno della macchina per la tioflavina, un colorante fluorescente che fluoresce quando legato allo strato beta lamellare, tipico anche delle fibrille amiloidi. Gli studi hanno dimostrato che testare il liquido cerebrospinale dei pazienti con RT-QuIC può distinguere accuratamente la demenza a corpi di Lewy dalla demenza non parkinsoniana. In questo studio, la tecnica RT-QuIC è stata utilizzata per amplificare l'α-syn mal ripiegata in campioni clinici per esplorare le differenze nelle caratteristiche proteiche tra le sinucleinopatie e per tentare di diagnosticare le sinucleinopatie con questo metodo. In primo luogo, sono stati arruolati casi clinici di sinucleinopatia e sono stati stabiliti campioni di plasma di 100 soggetti di controllo, 221 casi di pazienti PD e 127 casi di pazienti MSA, 10 casi di pazienti PSP. Utilizzando la tecnologia RT-QuIC, abbiamo utilizzato aSyn (preparato con successo nel nostro laboratorio) per amplificare il plasma di soggetti normali e pazienti con sinucleinopatie. È stato scoperto che l'intensità di fluorescenza massima (valore estremo), il tempo di picco, K/2 (pendenza al valore estremo/2) e Tmax/2 (tempo per raggiungere il valore estremo/2) possono essere utilizzati come indicatori diagnostici e differenziali per le sinucleinopatie.