Atividade de Sementeira de Agregação de a-Sinucleína no Plasma como um Novo Biomarcador para Doenças Neurodegenerativas

A doença da sinucleína, também conhecida como Sinucleinopatias, é um termo geral para uma classe de doenças degenerativas. Inclui principalmente a doença de Parkinson (DP), Demência com corpos de Lewy (DCL), Atrofia de múltiplos sistemas (AMS), entre outras. A doença caracteriza-se pela dobragem anormal da alfa-sinucleína (α-syn) no sistema nervoso periférico e central, resultando na produção de corpos de Lewy, neurites de Lewy, neurónios e inclusões citoplasmáticas gliais em neurónios ou células gliais. A localização intracelular e o padrão de acumulação da α-syn variam em diferentes doenças da sinucleína. Existem condições sobrepostas entre as doenças da sinucleína, o que também torna a precisão do diagnóstico clínico das sinucleinopatias muito baixa. Um diagnóstico definitivo só pode ser feito após a morte do paciente e a avaliação de amostras cerebrais através de coloração imuno-histoquímica. Portanto, para intervir e salvar a doença da sinucleína antecipadamente, é necessário desenvolver métodos de diagnóstico mais precisos e menos invasivos.

A Conversão Induzida por Agitação em Tempo Real (RT-QuIC) é um método para amplificação in vitro de sementes proteicas patogénicas, que pode permitir que proteínas semente com capacidade de amplificação in vitro transformem substratos em sementes mal dobradas sob condições específicas. O RT-QuIC foi originalmente utilizado no diagnóstico de pacientes com proteína priónica. A técnica pode identificar a proteína priónica na forma mal dobrada no líquido cefalorraquidiano de pacientes com doença de Creutzfeldt-Jakob com uma especificidade de 100% e uma sensibilidade de 95-98%, pelo que foi incorporada nos critérios de diagnóstico clínico para a doença de Creutzfeldt-Jakob esporádica. Estudos mostram que sementes patogénicas extraídas do líquido cefalorraquidiano ou de outros fluidos biológicos ou tecidos dos pacientes são incubadas com substratos proteicos recombinantes, e o uso de agitação intermitente para promover a interação entre a semente e o substrato pode forçar o substrato a transformar-se em sementes proteicas patogénicas. O processo de reação RT-QuIC é monitorizado em tempo real por um detetor dentro da máquina para a tioflavina, um corante fluorescente que fluoresce quando ligado à camada beta laminar, que também é típica das fibrilas amiloides. Estudos mostram que testar o líquido cefalorraquidiano dos pacientes com RT-QuIC pode distinguir com precisão a demência com corpos de Lewy da demência não parkinsoniana. Neste estudo, a técnica RT-QuIC foi utilizada para amplificar a α-syn mal dobrada em amostras clínicas para explorar as diferenças nas características proteicas entre as doenças da sinucleína, e tentar diagnosticar as doenças da sinucleína por este método. Primeiramente, foram incluídos casos clínicos de doença da sinucleína, e foram estabelecidos plasma de 100 indivíduos de controlo, 221 casos de pacientes com DP e 127 casos de pacientes com AMS, 10 casos de pacientes com PSP. Utilizando a tecnologia RT-QuIC, usámos a aSyn (preparada com sucesso no nosso laboratório) para amplificar o plasma de indivíduos normais e de pacientes com Sinucleinopatias. Verificou-se que a intensidade máxima de fluorescência (valor extremo), tempo de pico, K/2 (inclinação no valor extremo/2) e Tmax/2 (tempo de atingir o valor extremo/2) podem ser utilizados como indicadores de diagnóstico e diagnóstico diferencial para Sinucleinopatias.