Determinazione della pressione di occlusione nei vasi linfatici (Occlusion)

Iniezione dell'agente di contrasto Il verde di indocianina (ICG) è un colorante tricarbocianina comunemente utilizzato per applicazioni epatiche, cardiovascolari, di chirurgia plastica e oftalmologiche. Di solito viene iniettato per via endovenosa ad una dose compresa tra 0,1 e 0,5 mg/kg. Dopo la somministrazione, l'ICG si lega alle proteine ​​plasmatiche, alle lipoproteine ​​e ai lipidi e viene quindi rapidamente e completamente eliminato dal sangue dal fegato. ICG è eccitato ed emette fluorescenza nel vicino infrarosso (circa 760 nm).

In questo studio, sospenderemo l'ICG in 25 ml di acqua pura e successivamente diluito con acqua pura per raggiungere una concentrazione finale di 1 mg/ml. Ogni soggetto riceverà un'iniezione sottocutanea di 0,2 ml di ICG diluito (ad es. 200 µg), utilizzando un ago ipodermico. Standardizzeremo il punto di iniezione e inietteremo l'ICG per via sottocutanea nel primo spazio interdigitale, secondo il metodo di iniezione utilizzato per la linfoscintigrafia. In questo modo si evidenzia sistematicamente la stessa area della rete linfatica superficiale.

Sappiamo che negli arti superiori la lateralizzazione o manualità coincide con asimmetrie funzionali (e/o anatomiche). Per evitare qualsiasi pregiudizio, il braccio iniettato in pazienti sani sarà randomizzato lanciando testa o croce.

Acquisizione di immagini in fluorescenza Dopo l'iniezione, i siti di iniezione saranno coperti con nastro adesivo per evitare l'eccessiva saturazione della fotocamera e per evitare la diffusione dell'ICG sulla pelle e uno sfondo fluorescente indesiderato sulle immagini. Per ottenere l'imaging in fluorescenza del flusso linfatico del braccio, verrà utilizzato un sistema di imaging in fluorescenza nel vicino infrarosso (Photo Dynamic Eye, o telecamera PDE di Hammamatsu Photonics - Giappone). La telecamera è mantenuta in una posizione fissa, 15 cm sopra il campo di indagine, da un sistema di supporto di Noga Tools. Il segnale analogico amplificato viene trasformato in segnale digitale da un convertitore Terratec (Modello Grabster AV 450 MX) e trasferito su un monitor, che permette di visualizzare in tempo reale la rete linfatica e il flusso linfatico. Le immagini verranno registrate su un hard disk esterno dedicato Iomega, modello MDHDU.

La sessione si svolgerà in camera oscura, per consentire l'acquisizione di immagini in fluorescenza NIR.

Il drenaggio linfatico manuale specifico, sviluppato dal primo autore e dal suo team sotto feedback NIRF, viene eseguito immediatamente dopo l'iniezione, durante l'intera sessione sperimentale per essere sicuri che i vasi linfatici esaminati contengano permanentemente linfa. La linfa viene spinta con la mano dell'operatore dal punto di iniezione ad una linea limite tracciata sulla pelle a 5 cm prima dell'estremità distale della cuffia trasparente. Questo drenaggio linfatico manuale ottimizzato verrà eseguito per 3 minuti al fine di rilevare facilmente i vasi linfatici superficiali nella regione volare del braccio e contrassegnare l'area di interesse. Il MLD è standardizzato dal primo autore per questo esperimento, e composto da una sequenza continua e ripetuta, eseguita da distale a prossimale, di 3 manovre di "fill up" realizzate sul punto di iniezione, seguite da 2 manovre di "wash out" realizzate da il punto di iniezione alla linea limite prima della cuffia. Vengono quindi tracciate sulla pelle due linee fluorescenti a una distanza di 50 mm per delimitare lo spazio di riferimento.

Il bracciale dello sfigmomanometro trasparente è posizionato al centro del braccio.

Lo sfigmomanometro è collegato a un misuratore di pressione, che indica mm di mercurio (precisione del manometro digitale Testo® 510 0,1 mmHg.).

La telecamera PDE verrà mantenuta perpendicolarmente sull'asse maggiore del braccio, a livello della metà del bracciale.

Per assicurarsi che i vasi linfatici osservati contengano linfa, la linfa fluorescente viene spinta durante tutta l'esperienza con la mano dell'operatore dal punto di iniezione fino a una linea limite tracciata sulla pelle a 5 cm prima dell'estremità distale della cuffia trasparente .

• Primo passo: come linea di base registriamo e osserviamo il flusso linfatico sotto la cuffia non gonfiata.
• Secondo passaggio: il bracciale viene gonfiato a 30 mmHg, le immagini vengono registrate durante tre passaggi del flusso linfatico.

Sono presenti tre osservatori indipendenti. Controllano i tre passaggi della linfa per dare il consenso a passare alla fase di pressione successiva.

- Terzo passaggio: aumentiamo la pressione gonfiata in passi di 10 mmHg registrando immagini ad ogni aumento (aspettando tre passaggi di linfa ad ogni passo).

L'esperimento è completato non appena notiamo visivamente l'arresto completo della progressione linfatica sotto il bracciale trasparente. In quel momento, la pressione viene ridotta di 10 mmHg per convalidare il ritorno del flusso linfatico. Dopo questo passaggio, osserviamo e registriamo le immagini del vaso linfatico dal punto di iniezione fino alla radice dell'arto.