Stanovení okluzního tlaku v lymfatických cévách (Occlusion)

Injekce kontrastní látky Indocyanine Green (ICG) je trikarbocyaninové barvivo, které se běžně používá pro aplikace v jaterní, kardiovaskulární, plastické chirurgii a oftalmologii. Obvykle se podává intravenózní injekcí v dávce mezi 0,1 a 0,5 mg/kg. Po podání se ICG váže na plazmatické proteiny, lipoproteiny a lipidy a je poté rychle a úplně odstraněn z krve játry. ICG je excitován a emituje fluorescenci v blízké infračervené oblasti (kolem 760 nm).

V této studii suspendujeme ICG ve 25 ml čisté vody a následně zředíme čistou vodou na konečnou koncentraci 1 mg/ml. Každý subjekt dostane subkutánní injekci 0,2 ml zředěného ICG (např. 200 ug) pomocí hypodermické jehly. Standardizujeme injekční bod a aplikujeme ICG subkutánně do prvního meziprstního prostoru podle injekční metody používané pro lymfoscintigrafii. Tímto způsobem systematicky zvýrazníme stejnou oblast povrchové lymfatické sítě.

Víme, že na horních končetinách se lateralizace neboli ručkování shoduje s funkčními (a/nebo anatomickými) asymetriemi. Aby se předešlo jakémukoli zkreslení, bude injekční paže u zdravých pacientů náhodně házet hlavami nebo ocasy.

Pořízení fluorescenčních snímků Po injekci budou místa vpichu překryta páskou, aby se zabránilo přesycení kamery a aby se zabránilo šíření ICG na kůži a nežádoucímu fluorescenčnímu pozadí na snímcích. K získání fluorescenčního zobrazení lymfatického toku paží bude použit fluorescenční zobrazovací systém v blízké infračervené oblasti (Photo Dynamic Eye, nebo PDE kamera od Hammamatsu Photonics - Japonsko). Kamera je udržována ve fixní poloze, 15 cm nad vyšetřovacím polem, pomocí přidržovacího systému od Noga Tools. Zesílený analogový signál je převeden na digitální signál pomocí převodníku od Terratec (Model Grabster AV 450 MX) a přenesen na monitor, který umožňuje vizualizovat lymfatickou síť a lymfatický tok v reálném čase. Snímky budou zaznamenávány na vyhrazený externí pevný disk Iomega, model MDHDU.

Sezení bude probíhat v temné místnosti, aby bylo možné pořídit NIR fluorescenční snímky.

Specifická manuální lymfodrenáž, vyvinutá prvním autorem a jeho týmem pod NIRF zpětnou vazbou, se provádí bezprostředně po injekci, po celou dobu experimentu, aby bylo jisté, že vyšetřované lymfatické cévy trvale obsahují lymfu. Lymfa je poháněna rukou operátora od bodu vpichu k limitní linii nakreslené na kůži ve vzdálenosti 5 cm před distálním koncem průhledné manžety. Tato optimalizovaná manuální lymfodrenáž bude prováděna po dobu 3 minut, aby bylo možné snadno detekovat povrchové lymfatické cévy v volární oblasti paže a označit oblast zájmu. MLD je standardizována prvním autorem pro tento experiment a skládá se z kontinuální a opakované sekvence, prováděné od distální k proximální, ze 3 „naplňovacích“ manévrů realizovaných v místě vstřikování, následovaných 2 „vymývacími“ manévry realizovanými od bod vpichu k mezní čáře před manžetou. Poté se na kůži nakreslí dvě fluorescenční čáry ve vzdálenosti 50 mm, aby se omezil referenční prostor.

Manžeta průhledného tlakoměru je umístěna uprostřed paže.

Tlakoměr je připojen k tlakoměru, který ukazuje mm rtuti (digitální manometr Testo® 510 s přesností 0,1 mmHg.).

Kamera PDE bude udržována kolmo na hlavní ose paže, na úrovni středu manžety.

Aby bylo zajištěno, že pozorované lymfatické cévy obsahují lymfu, je fluorescenční lymfa poháněna během veškerého zážitku rukou operátora od bodu vpichu až po mezní čáru nakreslenou na kůži ve vzdálenosti 5 cm před distálním koncem průhledné manžety. .

• První krok: jako základní linii zaznamenáme a sledujeme lymfatický tok pod nenafouknutou manžetou.
• Druhý krok: manžeta se nafoukne na 30 mmHg, snímky se zaznamenají během tří průchodů lymfy.

Jsou přítomni tři nezávislí pozorovatelé. Kontrolují tři průchody lymfy, aby dali souhlas k přechodu k dalšímu tlakovému kroku.

- Třetí krok: Nafouknutý tlak zvyšujeme v krocích po 10 mmHg a zaznamenáváme snímky při každém zvýšení (při každém kroku čekáme na tři průchody lymfy).

Experiment je ukončen, jakmile vizuálně zaznamenáme úplné zastavení progrese lymfy pod průhlednou manžetou. V tu chvíli se tlak sníží o 10 mmHg, aby se potvrdil návrat toku lymfy. Po tomto kroku sledujeme a zaznamenáváme snímky lymfatické cévy od místa vpichu až po kořen končetiny.