ヘパリン誘発性血小板減少症の免疫遺伝学: 目的 2

参加基準: 18 歳以上。インフォームドコンセントを与える能力。ヘパリン/PF4 抗体および HIT の SRA 検査を受けた参加者。以下が含まれます。

ヘパリン/PF4抗体が陰性でSRAが陰性の参加者（対照）、ヘパリン/PF4抗体が陽性でSRAが陰性の参加者（血清変換症例）、ヘパリン/PF4抗体が陽性でSRAが陽性の参加者（HIT症例）。採血後7日以内の未分画ヘパリンまたは低分子量ヘパリン（エノキサパリン、ダルテパリン、チンザパリン）による治療

除外基準: 18 歳未満。インフォームドコンセントを与えることができない

この研究にはランダム化は含まれていません。 参加者は 3 つのカテゴリーから同数登録されます: (1) HIT 検査を受けず、ヘパリン/PF4 抗体陰性の参加者 (対照)。 (2) HIT 検査を受けずにヘパリン/PF4 抗体陽性反応を示した参加者 (血清変換症例)。 (3) HIT 検査でヘパリン/PF4 抗体の両方が陽性となった参加者 (HIT 症例)。

採用は血液内科の協力者および VUMC 臨床凝固研究所の主要な研究担当者を通じて促進されます。 ヘパリン/PF4 抗体およびセロトニン放出アッセイの結果が陽性および陰性の患者は、臨床凝固検査室で特定され、患者の提供者に研究への参加の可能性について打診されます。 潜在的な参加者が興味を持った場合、研究担当者が研究の説明と同意の可能性について連絡します。 あるいは、相談を受け、患者のケアに直接参加している血液内科の臨床協力者が、潜在的な参加者に直接連絡して、研究への参加の意思を確認することもできます。

研究に同意した患者は、約150ミリリットルの血液サンプルを1回提供するよう求められる。 末梢血単核球 (PBMC) はこのサンプルから分離され、提案された実験で使用する前に -80℃ で保存されます。 HLA シーケンスを実行するために、サンプルからゲノム DNA も単離されます。

HIT は、機能的セロトニン放出アッセイと臨床経過に基づく HIT の可能性によって確認されます。 参加者の入院、ヘパリンの用量と期間、血小板数、手術歴、併存疾患に関する詳細なデータが収集されます。 参加者の同意後、末梢血サンプルが取得され、フローサイトメトリーを使用して CD 陽性 T 細胞が選別され、前述のようにゲノム DNA が単離されます。

特定のサンプルの TCR レパートリーと特定の TCR 変異体の割合は、研究者の研究室と VANTAGE の中核施設で利用可能な新しい技術を組み合わせて決定されます。 サンプルの TCR レパトアは、次世代シーケンス技術を使用して決定されます。 新しい Adaptive Technologies ImmunoSEQ TCR キットは、ゲノム DNA サンプルから再構成された TCR 対立遺伝子の公平な定量的プロファイルを取得するために最適化されているため、使用される可能性が高くなります。 現在、このキットはベータテスト段階にあり、VANTAGE はテストサイトの 1 つです。

ＴＣＲ配列決定は、前述のように機能的ＴＣＲ Ｖベータセグメントに特異的なプライマーを使用して再構成されたＴＣＲベータＤＮＡを増幅するマルチプレックスＰＣＲシステムを使用して実行される。 ゲノムテンプレートが増幅され、観察された Vbeta 5.1 ファミリー TCR クロノタイプの相対的な存在量が、期待値最大化アルゴリズムを使用して配列データから推定されます。 国際 ImMunoGeneTics 情報システム (IMGT) によって定義されている CDR3 モチーフは、DNA 配列に基づいて予測されます。 すべてのリードについて、参照配列に対する最良の配列アライメントが計算され、品質スコアの低いリードは破棄されます。 不純物や刺激バックグラウンドの選別により非特異的 T 細胞を除外するため、頻度が 1% 未満の抗原特異的クローンは無視されます。

特定の DHS で重要であることが知られている TCR 対立遺伝子は、液滴デジタル PCR (ddPCR) を使用して標的とされます。 ddPCR は、油エマルジョン液滴 PCR 反応に基づいてターゲット テンプレートの絶対定量 (リアルタイム PCR は相対定量) を提供する新しいテクノロジーです。 研究者の研究室はこの新しい技術の経験があり、多くの重要な TCR 対立遺伝子のアッセイはすでに研究者の研究室の ddPCR で最適化されています。

リスクを最小限に抑えるため、この研究では可能な限りプライマリケア検査室での採血と同時に追加の血液が収集されます。 参加者は定性的な免疫反応をテストするために150mlの血液を提供するよう求められます。 この研究への参加に関連するリスクは、静脈穿刺のまれな合併症に関連しており、不快感、打撲傷、感染症、および/または血栓形成が含まれる可能性があります。 訓練を受けた臨床スタッフが患者の安全性と快適性を監視します。

研究期間中、被験者は有害事象がないか監視されます。 重篤な有害事象は、PI による事象の通知から 10 日以内に IRB に報告されます。 重篤でない有害事象またはプロトコル不遵守の事例は、継続審査時に報告されます。 治験は継続的に監視される予定だ。 DSMB はなく、中間分析も計画されていません。