Imunogenetika heparinem indukované trombocytopenie: Cíl 2

Kritéria pro zařazení: 18 let nebo starší; Schopnost dát informovaný souhlas; Účastníci s heparinem/protilátkou PF4 a testováním SRA na HIT, včetně:

účastníci s negativními protilátkami proti heparinu/PF4 a negativní SRA (kontroly), účastníci s pozitivními protilátkami proti heparinu/PF4 a negativní SRA (případy sérokonverze), účastníci s pozitivními protilátkami proti heparinu/PF4 a pozitivní SRA (případy HIT); Léčba nefrakcionovaným heparinem nebo nízkomolekulárním heparinem (enoxaparin, dalteparin, tinzaparin) do 7 dnů po odběru krve

Kritéria vyloučení: Méně než 18 let; Neschopnost dát informovaný souhlas

V této studii není zahrnuta žádná randomizace. Účastníci budou zapsáni ve stejném počtu ze tří kategorií: (1) účastníci bez HIT testu negativního na protilátky proti heparinu/PF4 (kontroly); (2) účastníci bez HIT testu pozitivního na protilátky proti heparinu/PF4 (případy sérokonverze); (3) účastníci s pozitivním testováním HIT na protilátky proti heparinu/PF4 (případy HIT).

Nábor bude usnadněn prostřednictvím spolupracovníků Lékařského hematologického oddělení a prostřednictvím klíčových studijních pracovníků v Klinické koagulační laboratoři VUMC. Pacienti s pozitivními a negativními výsledky testu na heparin/PF4 a uvolňování serotoninu budou identifikováni v klinické koagulační laboratoři a poskytovatel pacienta bude osloven ohledně možné účasti ve výzkumných studiích. V případě zájmu potenciálního účastníka bude osloven studijním personálem pro popis studie a případný souhlas. Případně mohou kliničtí spolupracovníci z oddělení hematologie, kteří jsou konzultováni a přímo se podílejí na péči o pacienty, kontaktovat potenciálního účastníka přímo, aby byli ochotni se studie zúčastnit.

Pacienti, kteří souhlasí se studií, budou požádáni, aby poskytli jeden vzorek krve o objemu přibližně 150 mililitrů. Mononukleární buňky periferní krve (PBMC) budou izolovány z tohoto vzorku a skladovány při -80 °C před použitím v navrhovaných experimentech. Ze vzorku bude také izolována genomová DNA za účelem provedení sekvenování HLA.

HIT bude potvrzena testem funkčního uvolňování serotoninu a pravděpodobnost HIT na základě klinického průběhu. Budou shromážděny podrobné údaje týkající se hospitalizace účastníka, dávky a trvání heparinu, počtu krevních destiček, chirurgické anamnézy a komorbidit. Po souhlasu účastníků bude odebrán vzorek periferní krve, roztříděny CD pozitivní T buňky pomocí průtokové cytometrie a izolována genomová DNA, jak bylo popsáno výše.

Repertoár TCR a podíl specifických variant TCR pro konkrétní vzorek budou určeny pomocí kombinace nových technologií dostupných v laboratoři výzkumníka a v základních zařízeních VANTAGE. Repertoár TCR vzorku bude určen pomocí technologie sekvenování nové generace. Pravděpodobně bude použita nová souprava Adaptive Technologies ImmunoSEQ TCR, protože tato souprava byla optimalizována pro získání nestranného kvantitativního profilu přeuspořádaných alel TCR ze vzorku genomové DNA. V současné době je tato sada ve fázi beta testování a VANTAGE je jedním z testovacích míst.

Sekvenování TCR bude provedeno pomocí multiplexního systému PCR pro amplifikaci přeuspořádané DNA TCRbeta pomocí primerů specifických pro funkční segment Vbeta TCR, jak bylo popsáno dříve. Genomové templáty budou amplifikovány a pozorovaná relativní hojnost klonotypů TCR rodiny Vbeta 5.1 bude odvozena ze sekvenčních dat pomocí algoritmu maximalizace očekávání. Motivy CDR3 definované mezinárodním informačním systémem ImMunoGeneTics (IMGT) budou predikovány na základě sekvencí DNA. Pro každé čtení bude vypočítáno nejlepší srovnání sekvencí s referenčními sekvencemi a čtení s nízkým skóre kvality budou vyřazena. Aby se vyloučily nespecifické T buňky v důsledku třídicích nečistot a/nebo stimulačního pozadí, budou zanedbány klony specifické pro antigen s frekvencemi pod 1 procento.

Alely TCR, o kterých je známo, že jsou důležité ve specifickém DHS, budou cíleny pomocí kapkové digitální PCR (ddPCR). ddPCR je nová technologie, která poskytuje absolutní kvantifikaci (PCR v reálném čase poskytuje relativní kvantifikaci) cílového templátu na základě reakcí olejové emulze kapkové PCR. Laboratoř zkoušejícího má s touto novou technologií zkušenosti a testy pro řadu důležitých alel TCR již byly optimalizovány na ddPCR v laboratoři zkoušejícího.

Aby se minimalizovalo riziko, bude pro tuto studii odebrána další krev, kdykoli to bude možné, současně s odběrem laboratoří primární péče. Účastníci budou požádáni, aby poskytli 150 ml krve za účelem testování kvalitativních imunitních odpovědí. Rizika spojená s účastí v této studii se týkají méně častých komplikací venepunkce a mohou zahrnovat nepohodlí, modřiny, infekci a/nebo tvorbu krevních sraženin. Pacienti budou monitorováni z hlediska bezpečnosti a pohodlí vyškoleným klinickým personálem.

Subjekty budou v průběhu studie sledovány na jakékoli nežádoucí účinky. Závažné nežádoucí příhody budou hlášeny IRB do 10 dnů od oznámení události PI. Nezávažné nežádoucí příhody nebo případy nedodržení protokolu budou hlášeny v době pokračování kontroly. Soud bude průběžně sledován. Neexistuje žádný DSMB ani se neplánují žádné prozatímní analýzy.