Immunogenetik för heparininducerad trombocytopeni: Mål 2

Inklusionskriterier: 18 år eller äldre; Förmåga att ge informerat samtycke; Deltagare med heparin/PF4-antikropp och SRA-testning för HIT, inklusive:

deltagare med negativa heparin/PF4-antikroppar och negativa SRA (kontroller), deltagare med positiva heparin/PF4-antikroppar och negativa SRA (serokonversionsfall), deltagare med positiva heparin/PF4-antikroppar och positiva SRA (HIT-fall); Behandling med ofraktionerat heparin eller lågmolekylärt heparin (enoxaparin, dalteparin, tinzaparin) inom 7 dagar efter blodtagning

Uteslutningskriterier: Mindre än 18 år; Oförmåga att ge informerat samtycke

Det finns ingen randomisering involverad i denna studie. Deltagare kommer att registreras i lika antal från tre kategorier: (1) deltagare utan HIT-test negativt för heparin/PF4-antikroppar (kontroller); (2) deltagare utan HIT testade positivt för heparin/PF4-antikroppar (serokonversionsfall); (3) deltagare med HIT som testade positivt för både heparin/PF4-antikroppar (HIT-fall).

Rekryteringen kommer att underlättas genom samarbetspartners vid institutionen för medicinsk hematologi och genom nyckelpersonal inom studien i VUMC Clinical Coagulation Laboratory. Patienter med positiva och negativa heparin/PF4-antikropps- och serotoninfrisättningsanalysresultat kommer att identifieras i Clinical Coagulation Laboratory och patientens leverantör kommer att kontaktas om potentiellt deltagande i forskningsstudier. Om den potentiella deltagaren är intresserad kommer de att kontaktas av studiepersonal för studiebeskrivning och eventuellt samtycke. Alternativt kan kliniska medarbetare från avdelningen för hematologi som konsulteras och deltar direkt i en patientvård kontakta en potentiell deltagare direkt för att få delta i studien.

Patienter som samtycker till studien kommer att uppmanas att lämna ett blodprov på cirka 150 milliliter. Perifera mononukleära blodceller (PBMC) kommer att isoleras från detta prov och lagras vid -80C före användning i föreslagna experiment. Genomiskt DNA kommer också att isoleras från provet för att utföra HLA-sekvensering.

HIT kommer att bekräftas med en funktionell serotoninfrisättningsanalys och HIT-sannolikhet baserat på kliniskt förlopp. Detaljerade data kommer att samlas in om deltagarens sjukhusvistelse, heparindos och varaktighet, antal trombocyter, kirurgisk historia och samtidiga sjukdomar. Efter samtycke från deltagarna kommer ett perifert blodprov att tas, CD-positiva T-celler sorteras med flödescytometri och genomiskt DNA isoleras som tidigare beskrivits.

TCR-repertoaren och andelen specifika TCR-varianter för ett visst prov kommer att bestämmas med hjälp av en kombination av nya teknologier tillgängliga i utredarens laboratorium och VANTAGE-kärnanläggningarna. TCR-repertoaren för ett prov kommer att bestämmas med hjälp av nästa generations sekvenseringsteknologi. Det nya Adaptive Technologies ImmunoSEQ TCR-kitet kommer sannolikt att användas eftersom detta kit har optimerats för att erhålla en opartisk kvantitativ profil av omarrangerade TCR-alleler från ett genomiskt DNA-prov. För närvarande är detta kit i betatestfasen och VANTAGE är en av testplatserna.

TCR-sekvensering kommer att utföras med användning av multiplex PCR-system för att amplifiera omarrangerat TCRbeta-DNA med användning av primrar som är specifika för ett funktionellt TCR-Vbeta-segment som tidigare beskrivits. Genomiska mallar kommer att amplifieras och observerade relativa överflöd av Vbeta 5.1-familjen TCR-klonotyper kommer att härledas från sekvensdata med användning av en förväntningsmaximeringsalgoritm. CDR3-motiv enligt definitionen av det internationella informationssystemet ImMunoGeneTics (IMGT) kommer att förutsägas baserat på DNA-sekvenser. För varje läsning kommer bästa sekvensinriktning mot referenssekvenser att beräknas och läsningar med låga kvalitetspoäng kommer att kasseras. För att utesluta ospecifika T-celler på grund av sorteringsföroreningar och/eller stimuleringsbakgrund kommer antigenspecifika kloner med frekvenser under 1 procent att försummas.

TCR-alleler som är kända för att vara viktiga i specifik DHS kommer att riktas in med hjälp av droplet digital PCR (ddPCR). ddPCR är en ny teknologi som ger absolut kvantifiering (realtids-PCR ger relativ kvantifiering) av målmallen baserad på olje-emulsionsdroppar PCR-reaktioner. Utredarens laboratorium har erfarenhet av denna nya teknologi och analyser för ett antal viktiga TCR-alleler har redan optimerats på ddPCR i utredarens laboratorium.

För att minimera risken kommer extra blod att samlas in för denna studie samtidigt som primärvårdslaboratorier tas när så är möjligt. Deltagarna kommer att uppmanas att ge 150 ml blod för att testa kvalitativa immunsvar. Riskerna förknippade med att delta i denna studie relaterar till ovanliga komplikationer av venpunktion och kan inkludera obehag, blåmärken, infektion och/eller blodproppbildning. Patienterna kommer att övervakas för säkerhet och komfort av utbildad klinisk personal.

Försökspersoner kommer att övervakas under studiens gång för eventuella biverkningar. Allvarliga negativa händelser kommer att rapporteras till IRB inom 10 dagar efter PI:s meddelande om händelsen. Icke-allvarliga biverkningar eller fall av bristande efterlevnad av protokollet kommer att rapporteras vid tidpunkten för fortsatt granskning. Rättegången kommer att övervakas på ett löpande sätt. Det finns ingen DSMB och inte heller några interimsanalyser planerade.