헤파린유발성혈소판감소증의 면역유전학: 목적 2

포함 기준: 18세 이상; 정보에 입각한 동의를 제공할 수 있는 능력 HIT에 대한 헤파린/PF4 항체 및 SRA 테스트를 받는 참가자는 다음을 포함합니다.

헤파린/PF4 항체가 음성이고 SRA가 음성인 참가자(대조군), 헤파린/PF4 항체가 양성이고 SRA가 음성인 참가자(혈청전환 사례), 헤파린/PF4 항체가 양성이고 SRA가 양성인 참가자(HIT 사례); 채혈 후 7일 이내에 미분획 헤파린 또는 저분자량 헤파린(에녹사파린, 달테파린, 틴자파린)으로 치료

제외 기준: 18세 미만; 정보에 입각한 동의를 제공할 수 없음

이 연구에는 무작위화가 포함되어 있지 않습니다. 참가자는 세 범주에서 동일한 수로 등록됩니다. (1) 헤파린/PF4 항체(대조군)에 대해 음성 HIT 테스트가 없는 참가자 (2) 헤파린/PF4 항체에 대해 양성인 HIT 테스트가 없는 참가자(혈청전환 사례); (3) 헤파린/PF4 항체 모두에 대해 HIT 검사가 양성인 참가자(HIT 케이스).

모집은 의학 혈액학과의 협력자와 VUMC 임상 응고 연구실의 주요 연구 인력을 통해 촉진될 것입니다. 양성 및 음성 헤파린/PF4 항체 및 세로토닌 방출 분석 결과를 가진 환자는 임상 응고 실험실에서 식별되고 환자의 제공자는 연구 연구에 잠재적인 참여에 대해 접근할 것입니다. 잠재적 참가자가 관심이 있는 경우 연구 설명 및 가능한 동의를 위해 연구 담당자가 접근할 것입니다. 또는 환자 치료에 직접 참여하고 상담을 받는 혈액학 분과의 임상 협력자가 잠재적 참여자에게 연구 참여 의사를 직접 문의할 수 있습니다.

연구에 동의하는 환자는 약 150밀리리터의 혈액 샘플 하나를 제공하도록 요청받을 것입니다. 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)는 이 샘플에서 분리되어 제안된 실험에 사용하기 전에 -80C에서 보관됩니다. 게놈 DNA는 또한 HLA 시퀀싱을 수행하기 위해 샘플에서 분리됩니다.

HIT는 기능적 세로토닌 방출 분석 및 임상 과정에 기반한 HIT 가능성으로 확인됩니다. 참가자의 입원, 헤파린 용량 및 기간, 혈소판 수, 수술 이력 및 동반 질환에 관한 자세한 데이터가 수집됩니다. 참가자의 동의 후 말초 혈액 샘플을 수집하고 CD 양성 T 세포를 유동 세포 계측법을 사용하여 분류하고 이전에 설명한 대로 게놈 DNA를 분리합니다.

TCR 레퍼토리와 특정 샘플에 대한 특정 TCR 변이체의 비율은 연구자의 실험실과 VANTAGE 핵심 시설에서 사용할 수 있는 새로운 기술의 조합을 사용하여 결정됩니다. 샘플의 TCR 레퍼토리는 차세대 시퀀싱 기술을 사용하여 결정됩니다. 새로운 Adaptive Technologies ImmunoSEQ TCR 키트는 게놈 DNA 샘플에서 재배열된 TCR 대립유전자의 편향되지 않은 정량 프로파일을 얻기 위해 최적화되었기 때문에 활용될 가능성이 높습니다. 현재 이 키트는 베타 테스트 단계에 있으며 VANTAGE는 테스트 사이트 중 하나입니다.

TCR 시퀀싱은 앞서 설명한 바와 같이 기능적 TCR Vbeta 세그먼트에 특이적인 프라이머를 사용하여 재배열된 TCRbeta DNA를 증폭하기 위해 다중 PCR 시스템을 사용하여 수행됩니다. 게놈 템플릿이 증폭되고 Vbeta 5.1 계열 TCR 클론형의 상대적 풍부도가 관찰되며 기대 최대화 알고리즘을 사용하여 시퀀스 데이터에서 추론됩니다. 국제 ImMunoGeneTics 정보 시스템(IMGT)에 의해 정의된 CDR3 모티프는 DNA 서열을 기반으로 예측됩니다. 모든 읽기에 대해 참조 시퀀스에 대한 최상의 시퀀스 정렬이 계산되고 품질 점수가 낮은 읽기는 폐기됩니다. 분류 불순물 및/또는 자극 배경으로 인해 비특이적 T 세포를 배제하기 위해 빈도가 1% 미만인 항원 특이적 클론은 무시됩니다.

특정 DHS에서 중요한 것으로 알려진 TCR 대립유전자는 액적 디지털 PCR(ddPCR)을 사용하여 표적화됩니다. ddPCR은 oil-emulsion droplet PCR 반응을 기반으로 target template의 절대 정량화(real-time PCR은 상대적 정량화 제공)를 제공하는 새로운 기술입니다. 연구자 실험실은 이 새로운 기술에 대한 경험이 있으며 여러 중요한 TCR 대립유전자에 대한 분석이 이미 연구자 실험실의 ddPCR에 최적화되어 있습니다.

위험을 최소화하기 위해 가능할 때마다 1차 진료 실험실을 뽑는 것과 동시에 이 연구를 위해 추가 혈액을 수집할 것입니다. 참가자는 정성적 면역 반응을 테스트하기 위해 150ml의 혈액을 제공해야 합니다. 이 연구에 참여하는 것과 관련된 위험은 정맥 천자의 흔하지 않은 합병증과 관련이 있으며 불편함, 타박상, 감염 및/또는 혈전 형성을 포함할 수 있습니다. 훈련된 임상 직원이 환자의 안전과 편안함을 모니터링합니다.

모든 부작용에 대해 연구 과정 동안 피험자를 모니터링할 것입니다. 심각한 이상반응은 PI가 해당 이상반응을 통지한 후 10일 이내에 IRB에 보고됩니다. 심각하지 않은 부작용 또는 프로토콜 비준수 사례는 검토를 계속할 때 보고됩니다. 시험은 지속적인 방식으로 모니터링됩니다. DSMB도 없고 중간 분석도 계획되어 있지 않습니다.