フラボノイド、運動、腸由来のフェノール

研究デザイン: 研究参加者 (N=85) が研究に登録され、フラボノイドまたはプラセボ サプリメント グループに 2 週間無作為に割り付けられ、これら 2 つの独立したグループが並行して実行されます (N=80 ですべての研究フェーズを正常に完了すると予想されます)。 . サプリメントは、カプセルの形で二重盲検法で投与されます。 研究参加者は、ベースラインテストとオリエンテーションのために研究施設に報告し、次に研究前と2週間の補給後、そして24時間後に再び. 図に示すように、4 つの血液サンプルが収集されます (補充前と補充後、運動後/休息後、および運動後/休息後 24 時間)。 2週間の補給後に研究室に報告するとき、研究参加者は、45分間トレッドミルに座るか活発に歩くかのいずれかに無作為に割り付けられます. フラボノイド サプリメントを摂取し、実験室で 2.5 時間走る 20 人のランナーの比較グループが含まれ、中程度の運動と激しい運動を比較できるようになります (また、将来の研究のためのパイロット データを提供するため)。 ベースライン試験: 研究開始の 1 ～ 2 週間前に、研究参加者 (歩行者とランナー) に研究のオリエンテーションが行われ、自発的な同意が得られます。 すべての飲食物摂取量を 3 日間の食事ログ (補充開始前の木曜日、金曜日、および土曜日)​​ に記録するように指示されます。 人口統計およびトレーニング履歴は、アンケートで取得されます。 身長、体重、体脂肪率 (seca Medical Body Composition Analyzer 514 生体電気インピーダンス スケール、メリーランド州ハノーバー) を測定します。 VO2max はブルースのトレッドミル プロトコルを使用して評価され、Cosmed CPET 代謝システムを使用して酸素消費量と換気が継続的に監視されます。

補充前のラボ訪問: 研究の初日に、参加者 (歩行者およびランナー) は絶食状態 (水以外の飲食物なしで 9 時間以上) でラボに戻ります。 血液サンプルは、被験体が座位で前肘静脈から採取されます。 参加者（歩行者）には、コンプライアンスを促進するために、サプリメントトレイにまとめられたフラボノイドまたはプラセボカプセルが2週間供給されます. ランナーには 2 週間分のフラボノイド カプセルが提供されます。 3 日間の食事記録は研究チームによってレビューおよび収集され、フード プロセッサー v. 11.1 (ESHA Research、セーラム、オレゴン州) を使用して栄養素とフラボノイドの含有量が分析されます。 各食品/飲料は、多量栄養素と微量栄養素、総フラボノイドと 6 つのフラボノイド サブクラスのそれぞれの小計、および 2 つの個別のフラボノイド値 (ケルセチン、EGCG) について評価されます。 ラボへの訪問 #3 の前の 2 日間、および訪問 #3 を含む 1 日の間、参加者はスクラロース (スプレンダ) とマンニトールを含む飲食物を避けるよう求められます。 スクラロースとマンニトールを避けるために、参加者は、ダイエットソーダ、ヨーグルトやその他の乳製品、スナック食品、チューインガムとキャンディー、低糖製品、歯磨き粉、マウスウォッシュの成分リストを確認するよう求められます.

補充後のラボ訪問:

2 週間の補給期間の後、参加者 (ウォーカーとランナー) は一晩絶食状態でラボに戻ります (補給前のラボ訪問と同じ曜日)。

参加者は、カプセル摂取の順守を確認するために、サプリメント トレイを提出します。 血液サンプルが採取されます。 参加者 (歩行者) は、実験室で 45 分間座るか、最大 VO2% 60% で 5% 勾配のトレッドミルで 45 分間活発に歩くかのいずれかに無作為に割り当てられます (最初の 5 分間は代謝モニタリングを行い、その後 15、30、および 45 分) Cosmed CPET メタボリックカートを使用。 ランナーは、30 分ごとに代謝測定を行いながら、等級付けされていないトレッドミルで 70% VO2max で 2.5 時間走ります。 水はすべての参加者に自由に与えられ、他の飲み物や食べ物は許可されません。 シッティングまたはウォーキング ラボ セッション、および 2.5 時間の実行の直前に、参加者は 1 g のスクロース、1 g のラクツロース、0.5 g の L-ラムノース、1 g のエリスリトール、1 g のスクラロース、0.5 g のマンニトールを含む 150 ml の溶液を消費します。 .

尿は、プラスチック容器に 24 時間、0 ～ 5 時間と 5 ～ 24 時間の 2 つの別々の分画で収集されます。 最初の 5 時間の採尿中は、飲食は禁止されています (水道水を除く)。 参加者は翌朝、一晩絶食した状態で戻り、血液サンプルを提供し、尿サンプルを提出します。

被験者への採尿ガイドライン：

• 各採尿期間中 (運動開始から 5 時間後、2 回目の採尿は翌朝まで、または運動開始から 5 時間から 24 時間後まで) に一滴一滴の尿を採取する必要があります。 毎回の尿の量に関係なく、すべての滴が収集されます。
• 昼夜を問わず、2 つの採尿ボトルに尿を 1 滴ずつ集めます (0 ～ 5 時間、5 ～ 24 時間、ラボの運動テスト セッションの開始から開始)。 ボトルは冷蔵庫に保管してください。 排便中に排出された尿を必ず収集してください。
• 翌朝出た最初の尿を採取し、採取ボトルに加えて仕上げます。 両方の採尿ボトルを検査室に持参してください (つまり、運動セッションの翌朝、最終的な血液サンプルを提供するとき)。

フラボノイド サプリメント: サプリメントおよびプラセボ カプセルは、Reoxcyn Innovation Group LLC (ユタ州ソルトレイクシティ) によって調製されます。 (添付ファイルの補足情報を参照してください)。 成分はコミュニティ試験でテストされたものと同じです：ビタミンC（パルミチン酸アスコルビルとして）（Green Wave Ingredients、La Mirada、CA）、野生のビルベリー果実抽出物（総アントシアニン25％）（FutureCeuticals、Momente、IL）、緑茶葉抽出物 (50% EGCG) (Watson Industries, Inc.、カリフォルニア州ポモナ)、ケルセチンアグリコン (Novel Ingredients、ニュージャージー州イーストハノーバー)、カフェイン (Creative Compounds、ミズーリ州スコットシティ)、およびオメガ 3 脂肪酸 (Novotech Nutraceuticals) 、カリフォルニア州ベンチュラ）。 カプセル充填成分と賦形剤には、Nu-Flow 70R (もみ殻由来)、キャッサバ根由来タピオカ、天然竹シリカ、マシュマロ根が含まれます。 プラセボ カプセルには、充填成分と賦形剤のみが含まれます (有効成分は含まれません)。 歩行者の毎日の摂取量は、フラボノイド 2 カプセルまたはプラセボ カプセル 2 カプセルです。 2 つのフラボノイド カプセルは 329 mg のフラボノイドを提供します (調査によると、アメリカの成人の平均は 1 日あたり 240 mg です)。 ランナーの毎日の摂取量は、フラボノイド カプセル 4 個 (フラボノイド 658 mg) です。 参加者には、フラボノイド カプセルまたはプラセボ カプセルのいずれかが 2 週間分与えられ、1 日 1 回を朝食と一緒に、もう 1 つを昼食と一緒に、またはランナーにはその量を 2 倍に分けて摂取する方法が説明されています。 研究参加者は、サプリメントの摂取を 1 日または 2 日逃した場合、消費量を増やすために 1 日あたり 1 カプセルを追加することが許可されます。 研究参加者は、ウォーク/レスト (またはランニング) ラボ セッション中に血液サンプルを提供した直後に 2 つのカプセル (ランナーの場合は 4 つ) を摂取します。

サプリメント カプセルは、Dr. Mary Ann Lila (NCSU、Plants for Human Health Institute、NCRC) によるフラボノイド含有量の事前および事後調査が行われます。

ターゲットを絞ったメタボロミクス分析:

腸由来のフェノール代謝産物は、100 μL の組織を抽出するための自動化されたプラットフォームと社内の 96 ウェル SPE プロトコル (60mg、3mL; Phenomenex) を使用して SPE によって血漿から精製されます。 すべての検体は、CV≤10% で 80 ～ 100% の回収率の抽出効率になるように事前に最適化されています。 抽出物は、以前に公開され検証された方法論を含む液体クロマトグラフィー タンデム MS/MS によって分離および定量化されます。 簡単に説明すると、HPLC-ESI-MS/MS 分析は、エレクトロ スプレー イオン化 (ESI) Turbo-V ソース (血液および糞便代謝物) を備えた SCIEX UPLC 結合 6500 + MS/MS-QTRAP™ を使用して実行され、サンプルはKinetex PFP カラムと移動相勾配は、水中の 0.1% ギ酸 (v/v) (A) とアセトニトリル中の 0.1% ギ酸 (v/v) (B) で構成され、分離時間は 24 分でした。 標的代謝物分析プロトコルは最適化および検証されており、200 を超える分析物を検出するように最適化されています。これらの分析物は、当社のライブラリにある本物の商用標準および合成標準と比較して定量化されており、推定されるフェーズ II コンジュゲートは、3 ～ 5 の固有の遷移を含むフラグメンテーション プロファイリングを使用して識別されます。 これには、硫酸塩、グルクロニド、メチル、およびグリシン複合体に対応する 1000 以上の遷移のスキャンが含まれます。 この SMRM 方法論は以前に Rexocyn 治療用に最適化されており、従来の多重反応モニタリング (MRM) スキャン手順よりもはるかに感度の高い方法を提供します。分析物ごとにパラメーターを使用することで、感度が向上します。 最後に、代謝物は、保持時間 (可能な場合は本物の合成標準を使用) と 3 つ以上の前駆体から生成物イオンへの遷移に基づいて確認されます。 フラボノイドの分析には 0 ～ 10 μM、フェノール代謝産物の分析には 0 ～ 50 μM の範囲の 7 点マトリックス適合検量線が使用されます。

腸透過性、尿ラクツロース/ラムノース:

尿糖濃度は高圧液体クロマトグラフィーで測定します。 0 ～ 5 時間尿中のスクロース、0 ～ 5 時間尿中のラクツロース/ラムノース (L/R) 比、および 5 ～ 24 時間尿中のスクラロース/エリスリトール (S/E) 比は、胃十二指腸の指標として使用されます。 、それぞれ小腸および大腸の透過性。