Flavonoides, ejercicio, fenólicos derivados del intestino

Diseño de investigación: los participantes del estudio (N=85) ingresarán al estudio y se asignarán al azar a los grupos de suplementos de flavonoides o placebo durante 2 semanas, con estos dos grupos independientes funcionando en paralelo (con N=80 anticipados para completar con éxito todas las fases del estudio) . Los suplementos se administrarán de manera doble ciego en forma de cápsula. Los participantes del estudio se presentarán en el centro de investigación para las pruebas de referencia y la orientación, y luego antes del estudio y después de la suplementación de 2 semanas, y luego nuevamente 24 horas después. Se recolectarán cuatro muestras de sangre como se muestra en la figura (antes y después de la suplementación, después del ejercicio/reposo y 24 horas después del ejercicio/reposo). Cuando se presenten en el laboratorio después de 2 semanas de suplementación, los participantes del estudio serán asignados al azar para sentarse o caminar enérgicamente en cintas de correr durante 45 minutos. Se incluirá un grupo de comparación de 20 corredores que ingieren el suplemento de flavonoides y corren 2,5 h en el laboratorio para permitir una comparación entre el esfuerzo moderado e intenso (y para proporcionar datos piloto para un estudio futuro). Pruebas de referencia: una o dos semanas antes del inicio del estudio, los participantes del estudio (caminantes y corredores) recibirán una orientación sobre el estudio y luego darán su consentimiento voluntario. Se darán instrucciones para registrar toda la ingesta de alimentos y bebidas en registros de alimentos de 3 días (jueves, viernes y sábado antes de comenzar con la suplementación). Las historias demográficas y de capacitación se adquirirán con cuestionarios. Se medirá la altura, el peso corporal y el porcentaje de grasa corporal (escala de impedancia bioeléctrica seca Medical Body Composition Analyzer 514, Hanover, MD). El VO2max se evaluará utilizando el protocolo de cinta rodante de Bruce, con el consumo de oxígeno y la ventilación continuamente monitoreados utilizando el sistema metabólico CPET de Cosmed.

Visita al laboratorio previa a la suplementación: el primer día del estudio, los participantes (caminantes y corredores) regresarán al laboratorio en ayunas (9 o más horas sin alimentos ni bebidas que no sean agua). Se tomarán muestras de sangre de una vena antecubital con los sujetos en posición sentada. Los participantes (caminantes) recibirán un suministro de 2 semanas de cápsulas de flavonoides o placebo organizadas en bandejas de suplementos para facilitar el cumplimiento. Los corredores recibirán un suministro de cápsulas de flavonoides para 2 semanas. El equipo de investigación revisará y recopilará el registro de alimentos de 3 días, y analizará el contenido de nutrientes y flavonoides utilizando el procesador de alimentos v. 11.1 (ESHA Research, Salem, OR). Cada alimento/bebida se evaluará en cuanto a macro y micronutrientes, flavonoides totales y subtotales para cada una de las seis subclases de flavonoides, y dos valores de flavonoides individuales (quercetina, EGCG). Durante el período de 2 días previo a la visita n.º 3 al laboratorio, y durante todo el día que incluye la visita n.º 3, se les pedirá a los participantes que eviten alimentos y bebidas que contengan sucralosa (Splenda) y manitol. Para evitar la sucralosa y el manitol, se les pedirá a los participantes que revisen las listas de ingredientes de refrescos dietéticos, yogur y otros productos lácteos, refrigerios, goma de mascar y dulces, productos bajos en azúcar, pasta dental y enjuague bucal.

Visitas de laboratorio posteriores a la suplementación:

Después del período de suplementación de 2 semanas, los participantes (caminantes y corredores) regresarán al laboratorio en ayunas durante la noche (el mismo día de la semana de la visita al laboratorio previa a la suplementación).

Los participantes entregarán la bandeja de suplementos para verificar el cumplimiento de la ingesta de las cápsulas. Se recolectará una muestra de sangre. Los participantes (caminantes) serán asignados al azar para sentarse durante 45 minutos en el laboratorio o para caminar enérgicamente durante 45 minutos en una cinta rodante graduada al 5 % al 60 % del VO2máx (con monitoreo metabólico durante los primeros 5 minutos y luego a los 15, 30 y y 45 minutos) utilizando el carro metabólico CPET de Cosmed. Los corredores correrán al 70% del VO2máx en una cinta rodante sin nivelar durante 2,5 h, con mediciones metabólicas realizadas cada 30 minutos. Se dará agua ad libitum a todos los participantes, no estando permitida ninguna otra bebida o comida. Justo antes de las sesiones de laboratorio sentado o caminando, y de la carrera de 2,5 h, los participantes consumirán una solución de 150 ml que contiene 1 g de sacarosa, 1 g de lactulosa, 0,5 g de L-ramnosa, 1 g de eritritol, 1 g de sucralosa, 0,5 g de manitol .

La orina se recogerá en recipientes de plástico durante 24 h en dos fracciones separadas: 0-5 h y 5-24 h. No se permitirá comer ni beber (excepto agua del grifo) durante las primeras 5 horas de recolección de orina. Los participantes regresarán a la mañana siguiente en ayunas durante la noche, proporcionarán una muestra de sangre y entregarán muestras de orina.

Pautas de recolección de orina para los sujetos:

• Debe recolectar cada gota de orina durante cada período de recolección (5 horas desde el inicio del ejercicio, y luego la segunda recolección hasta la mañana siguiente o de 5 a 24 horas desde el inicio del ejercicio). No importa cuánta orina se pase cada vez, siempre y cuando se recolecte cada gota.
• Recoja cada gota de orina durante el día y la noche en las dos botellas de recolección (0-5 horas, 5-24 horas, comenzando con el inicio de la sesión de prueba de esfuerzo de laboratorio). Guarde las botellas en el refrigerador. Asegúrese de recolectar la orina que haya pasado durante las deposiciones.
• Termine recogiendo la primera orina expulsada a la mañana siguiente, añadiéndola al frasco de recogida. Lleve ambos frascos de recolección de orina con usted al laboratorio (es decir, la mañana después de la sesión de ejercicio cuando proporcione su muestra de sangre final).

Suplemento de flavonoides: las cápsulas de suplemento y placebo serán preparadas por Reoxcyn Innovation Group LLC (Salt Lake City, UT). (VER información complementaria en archivo adjunto). Los ingredientes serán los mismos que se probaron en el ensayo comunitario: vitamina C (como palmitato de ascorbilo) (Green Wave Ingredients, La Mirada, CA), extracto de fruta de arándano silvestre (25 % de antocianinas totales) (FutureCeuticals, Momence, IL), té verde extracto de hoja (50% EGCG) (Watson Industries, Inc., Pomona, CA), aglicona de quercetina (Novel Ingredients, East Hanover, NJ), cafeína (Creative Compounds, Scott City, MO) y ácidos grasos omega 3 (Novotech Nutraceuticals , Ventura, CA). Los ingredientes y excipientes del relleno de la cápsula incluyen Nu-Flow 70R (de cáscaras de arroz), tapioca de raíz de mandioca, sílice de bambú natural, raíz de malvavisco. Las cápsulas de placebo contendrán solo los ingredientes de relleno y los excipientes (sin los ingredientes activos). La porción diaria para los caminantes será de 2 flavonoides o 2 cápsulas de placebo. Dos cápsulas de flavonoides proporcionan 329 mg de flavonoides (el promedio de adultos estadounidenses, según el estudio, es de 240 mg por día). La ración diaria para los corredores será de 4 cápsulas de flavonoides (658 mg de flavonoides). Los participantes recibirán un suministro para 2 semanas de cápsulas de flavonoides o placebo, con instrucciones sobre cómo consumir diariamente en dosis divididas (1 con el desayuno y 1 con el almuerzo, o el doble de esa cantidad para los corredores). A los participantes del estudio se les permitirá agregar una cápsula adicional por día para aumentar el consumo si se pierden uno o dos días de tomar el suplemento. Los participantes del estudio ingerirán 2 cápsulas (4 para los corredores) justo después de proporcionar la muestra de sangre durante la sesión de laboratorio de caminata/descanso (o carrera).

La Dra. Mary Ann Lila (NCSU, Plants for Human Health Institute, NCRC) PRUEBA el contenido de flavonoides antes y después del estudio de las CÁPSULAS DE SUPLEMENTO.

Análisis metabolómico dirigido:

Los metabolitos fenólicos derivados del intestino se purificarán del plasma mediante SPE utilizando una plataforma automatizada y un protocolo de SPE interno de 96 pocillos (60 mg, 3 ml; Phenomenex) para la extracción de 100 μl de tejido. Todos los analitos han sido previamente optimizados para eficiencias de extracción de entre 80-100% de recuperación con CV≤10%. Los extractos se separarán y cuantificarán mediante cromatografía líquida en tándem-MS/MS con metodologías previamente publicadas y validadas. Brevemente, el análisis HPLC-ESI-MS/MS se realizará usando un SCIEX UPLC acoplado 6500 + MS/MS-QTRAP™ equipado con una fuente de ionización por electrospray (ESI) Turbo-V (metabolitos de sangre y heces), con muestras inyectadas en un La columna Kinetex PFP y el gradiente de fase móvil constaban de ácido fórmico al 0,1 % (v/v) en agua (A) y ácido fórmico al 0,1 % (v/v) en acetonitrilo (B) y un tiempo de separación de 24 min. El protocolo de análisis de metabolitos específicos se optimizó y validó para detectar más de 200 analitos que se cuantifican en relación con los estándares comerciales y sintéticos auténticos de nuestra biblioteca, con conjugados putativos de fase II identificados mediante perfiles de fragmentación que involucran de 3 a 5 transiciones únicas. Esto implica escanear más de 1000 transiciones correspondientes a conjugados de sulfato, glucurónido, metilo y glicina. Esta metodología SMRM se optimizó previamente para el tratamiento con Rexocyn y proporciona un método significativamente más sensible que los procedimientos tradicionales de escaneo de monitoreo de reacciones múltiples (MRM), ya que permite monitorear un mayor número de transiciones por unidad de tiempo, además de permitir parámetros que se utilizarán para cada analito, lo que resulta en una mayor sensibilidad. Finalmente, los metabolitos se confirmarán sobre la base del tiempo de retención (utilizando estándares auténticos y sintetizados cuando sea posible) y tres o más transiciones de iones de precursor a producto. Para el análisis de flavonoides se utilizarán curvas de calibración emparejadas con matriz de siete puntos que van de 0 a 10 μM o de 0 a 50 μM para el análisis de metabolitos fenólicos.

Permeabilidad intestinal, lactulosa/ramnosa en orina:

Las concentraciones de azúcar en la orina se determinarán mediante cromatografía líquida de alta presión. La sacarosa en la orina de 0-5 h, la relación lactulosa/ramnosa (L/R) en la orina de 0-5 h y la relación sucralosa/eritritol (S/E) en la orina de 5-24 h se utilizarán como indicadores de gastroduodenal. , permeabilidad del intestino delgado y grueso, respectivamente.