Flavonoidok, testmozgás, bélből származó fenolok

Kutatási terv: A vizsgálatban résztvevők (N=85) részt vesznek a vizsgálatban, és véletlenszerűen besorolják a flavonoid- vagy placebo-kiegészítő csoportokba 2 hétig, és ez a két független csoport párhuzamosan fut (N=80 várhatóan sikeresen befejezi az összes vizsgálati fázist) . A kiegészítőket kettős vak módszerrel kapszula formájában adjuk be. A vizsgálatban részt vevők jelentkeznek a kutatóintézetben az alapszintű tesztelés és a tájékozódás céljából, majd a vizsgálat előtt és 2 hetes kiegészítés után, majd 24 órával később újra. Négy vérmintát vesznek az ábrán látható módon (kiegészítés előtt és után, edzés után/pihenés és 24 óra edzés után/pihenés). Amikor 2 hetes kiegészítés után jelentkeznek a laboratóriumban, a vizsgálat résztvevőit véletlenszerűen úgy osztják ki, hogy 45 percig üljenek vagy sétáljanak gyorsan a futópadon. Egy 20 fős, flavonoid-kiegészítőt lenyelő és 2,5 órát a laborban futó futóból álló összehasonlító csoportot is bevonunk, hogy lehetővé tegyük a mérsékelt és intenzív terhelés összehasonlítását (és kísérleti adatokkal szolgáljanak egy jövőbeli tanulmányhoz). Kiindulási tesztelés: Egy-két héttel a vizsgálat megkezdése előtt a vizsgálat résztvevői (sétálók és futók) eligazítást kapnak a vizsgálatról, majd önkéntes hozzájárulásukat adják. A 3 napos étkezési naplókban (csütörtökön, pénteken és szombaton a táplálékkiegészítés megkezdése előtt) útmutatást adunk az összes étel- és italfogyasztás rögzítésére. A demográfiai és képzési történeteket kérdőívekkel szerzik meg. Mérni fogják a magasságot, a testsúlyt és a testzsír százalékát (seca Medical Body Composition Analyzer 514 bioelektromos impedancia skála, Hannover, MD). A VO2max értékét a Bruce futópad protokollja segítségével értékelik, az oxigénfogyasztást és a szellőzést a Cosmed CPET metabolikus rendszer segítségével folyamatosan figyelemmel kísérik.

Kiegészítés előtti laborlátogatás: A vizsgálat első napján a résztvevők (sétálók és futók) éhgyomorra térnek vissza a laborba (9 vagy több óra vízen kívüli étel vagy ital nélkül). A vérmintát egy antecubitalis vénából veszik, miközben az alanyok ülnek. A résztvevők (sétálók) 2 hetes flavonoid vagy placebo kapszulákat kapnak kiegészítő tálcákba rendezve, hogy megkönnyítsék a megfelelést. A futók 2 hetes flavonoid kapszulákat kapnak. A 3 napos élelmiszer-nyilvántartást a kutatócsoport felülvizsgálja és összegyűjti, és elemzi a tápanyag- és flavonoidtartalmat a Food Processor v. 11.1 (ESHA Research, Salem, OR) segítségével. Minden étel/ital esetében meg kell vizsgálni a makro- és mikrotápanyagokat, az összes flavonoidot és a részösszegeket mind a hat flavonoid alosztályra vonatkozóan, valamint két egyedi flavonoid értéket (kvercetin, EGCG). A 3. számú laborlátogatás előtti 2 napos időszakban és a 3. látogatást is magában foglaló egész nap alatt a résztvevőket arra kérik, hogy kerüljék a szukralózt (Splenda) és mannitot tartalmazó ételeket és italokat. A szukralóz és a mannit elkerülése érdekében a résztvevőknek ellenőrizniük kell a diétás üdítők, joghurt és más tejtermékek, nassolnivalók, rágógumik és cukorkák, alacsony cukortartalmú termékek, fogkrémek és szájvíz összetevőinek listáját.

Kiegészítés utáni laborlátogatások:

A 2 hetes kiegészítési időszak után a résztvevők (sétálók és futók) egy éjszakán át éhezve térnek vissza a laborba (a hét ugyanazon a napján, mint a kiegészítés előtti laborlátogatás).

A résztvevők felfordítják a kiegészítő tálcát, hogy ellenőrizzék, betartják-e a kapszulák lenyelését. Vérmintát vesznek. A résztvevőket (sétálókat) véletlenszerűen választják ki, hogy vagy üljenek 45 percet a laboratóriumban, vagy 45 percig fürgén sétáljanak egy 5%-os fokozatú futópadon 60%-os VO2max mellett (metabolikus monitorozással az első 5 percben, majd 15, 30, és 45 perc) a Cosmed CPET metabolikus kocsi segítségével. A futók 70%-os VO2max-szal futnak 2,5 órán keresztül, osztályozatlan futópadon, 30 percenkénti anyagcsere méréssel. Vizet ad libitum minden résztvevő számára, más ital vagy étel nem megengedett. Közvetlenül az ülő- vagy sétalaboratóriumi ülések és a 2,5 órás futás előtt a résztvevők 150 ml-es oldatot fogyasztanak, amely 1 g szacharózt, 1 g laktulózt, 0,5 g L-ramnózt, 1 g eritrit, 1 g szukralózt, 0,5 g mannitot tartalmaz. .

A vizeletet 24 órán keresztül műanyag tartályokban gyűjtik, két külön frakcióban: 0-5 óra és 5-24 óra. Tilos enni vagy inni (kivéve a csapvizet) az első 5 órás vizeletgyűjtés során. A résztvevők másnap reggel éhgyomorra térnek vissza, vérmintát adnak, és vizeletmintákat adnak be.

Vizeletgyűjtési irányelvek az alanyoknak:

• Minden egyes gyűjtési időszak alatt minden csepp vizeletet össze kell gyűjtenie (5 órával az edzés kezdetétől, majd a második vizeletgyűjtéstől a következő reggelig, vagy az edzés kezdetétől számított 5-24 óráig). Nem számít, mennyi vagy kevés vizeletet bocsátanak ki minden alkalommal, amíg minden cseppet összegyűjtenek.
• Gyűjtsön össze minden csepp vizeletet nappal és éjszaka a két gyűjtőpalackba (0-5 óra, 5-24 óra, a laboratóriumi terhelési teszt kezdetétől). Tárolja az üvegeket a hűtőszekrényben. Ügyeljen arra, hogy a székletürítés során felszabaduló vizeletet összegyűjtse.
• Befejezésül másnap reggel összegyűjti az első vizeletet, és hozzáadja a gyűjtőpalackhoz. Vigye magával mindkét vizeletgyűjtő palackot a laborba (azaz az edzés utáni reggelre, amikor megadja a végső vérmintát).

Flavonoid-kiegészítő: A kiegészítőket és a placebo-kapszulákat a Reoxcyn Innovation Group LLC (Salt Lake City, UT) készíti. (Lásd a kiegészítő információkat a csatolt fájlban). Az összetevők megegyeznek a közösségi kísérletben teszteltekkel: C-vitamin (aszkorbil-palmitát formájában) (Green Wave Ingredients, La Mirada, CA), vadáfonya gyümölcskivonat (összesen 25% antocianin) (FutureCeuticals, Momence, IL), zöld tea levélkivonat (50% EGCG) (Watson Industries, Inc., Pomona, CA), kvercetin-aglikon (Novel Ingredients, East Hanover, NJ), koffein (Creative Compounds, Scott City, MO) és omega-3 zsírsavak (Novotech Nutraceuticals) , Ventura, CA). A kapszula töltő összetevői és segédanyagok közé tartozik a Nu-Flow 70R (rizshéjból), a manióka gyökér tápióka, a természetes bambusz szilícium-dioxid, a mályvacukor gyökér. A placebo kapszulák csak a töltőanyagokat és segédanyagokat tartalmazzák (a hatóanyagok nélkül). A sétálók napi adagja 2 flavonoid vagy 2 placebo kapszula. Két flavonoid kapszula 329 mg flavonoidot biztosít (az amerikai felnőtt átlag a vizsgálattól függően 240 mg naponta). A futók napi adagja 4 flavonoid kapszula (658 mg flavonoid) lesz. A résztvevők 2 hétre kapnak flavonoid vagy placebo kapszulát, a napi osztott adagok elfogyasztására vonatkozó utasításokkal (1 reggelivel és 1 ebéddel, vagy ennek duplája a futóknak). A vizsgálatban résztvevők napi egy extra kapszulát adhatnak hozzá a fogyasztás növelése érdekében, ha egy vagy két napot kihagynak a kiegészítésből. A vizsgálat résztvevői 2 kapszulát vesznek be (4 kapszulát a futóknak), közvetlenül a vérminta leadása után a séta/pihenés (vagy futás) labormunka során.

A KIEGÉSZÍTŐ KAPSZULÁK flavonoidtartalmát a vizsgálat előtt és után teszteli Dr. Mary Ann Lila (NCSU, Plants for Human Health Institute, NCRC).

Célzott metabolizmus elemzés:

A bélből származó fenolos metabolitokat SPE tisztítja meg a plazmából egy automatizált platform és egy házon belüli 96-lyukú SPE protokoll (60 mg, 3 ml; Phenomenex) segítségével 100 μl szövet extrahálására. Az összes analitot korábban 80-100% közötti extrakciós hatékonyságra optimalizálták, CV≤10% mellett. A kivonatokat folyadékkromatográfiás tandem-MS/MS módszerrel választják el és mennyiségileg meghatározzák, korábban publikált és validált módszereket alkalmazva. Röviden, a HPLC-ESI-MS/MS analízist egy SCIEX UPLC csatolt 6500 + MS/MS-QTRAP™ segítségével végezzük el, amely elektrospray ionizációs (ESI) Turbo-V forrással van felszerelve (vér és széklet metabolitok), a mintákat egy A Kinetex PFP oszlop és a mozgófázis gradiens 0,1% hangyasavból (v/v) vízben (A) és 0,1% hangyasavból (v/v) acetonitrilben (B) és 24 perces elválasztási időből állt. A célzott metabolitelemzési protokollt optimalizálták és validálták több mint 200 analit kimutatására, amelyeket a könyvtárunkban található hiteles kereskedelmi és szintetikus standardokhoz képest számszerűsítenek, a feltételezett II. fázisú konjugátumokat pedig 3-5 egyedi átmenetet magában foglaló fragmentációs profilozással azonosították. Ez magában foglalja a szulfát-, glükuronid-, metil- és glicin konjugátumoknak megfelelő 1000 átmenetet. Ezt az SMRM-módszert korábban a Rexocyn-kezelésre optimalizálták, és lényegesen érzékenyebb módszert biztosít, mint a hagyományos többszörös reakció-monitoring (MRM) szkennelési eljárások, mivel lehetővé teszi időegységenkénti több átmenet monitorozását, emellett egyedi vegyületfüggőséget tesz lehetővé. az egyes analitokhoz felhasználandó paraméterek, ami fokozott érzékenységet eredményez. Végül a metabolitokat a retenciós idő (ahol lehetséges autentikus és szintetizált standardok felhasználásával) és három vagy több prekurzor-termék ionátmenet alapján kell megerősíteni. A flavonoidok analíziséhez hétpontos, 0 és 10 μM közötti, 0 és 50 μM közötti, a fenolos metabolitok analíziséhez pedig 0 és 50 μM közötti kalibrációs görbéket kell használni.

Béláteresztőképesség, vizelet laktulóz/ramnóz:

A vizelet cukorkoncentrációját nagynyomású folyadékkromatográfiával kell meghatározni. A gasztroduodenális betegség indikátoraként a szacharózt a 0-5 órás vizeletben, a laktulóz/ramnóz (L/R) arányt a 0-5 órás vizeletben és a szukralóz/eritrit (S/E) arányt az 5-24 órás vizeletben fogják használni. , vékony- és vastagbél permeabilitását, ill.