플라보노이드, 운동, 장 유래 페놀

연구 설계: 연구 참가자(N=85)는 연구에 참여하고 2주 동안 플라보노이드 또는 위약 보충제 그룹에 무작위 배정되며, 이 두 독립적인 그룹은 병렬로 실행됩니다(N=80은 모든 연구 단계를 성공적으로 완료할 것으로 예상됨). . 보충제는 이중 맹검 방식으로 캡슐 형태로 투여됩니다. 연구 참가자는 기본 테스트 및 오리엔테이션을 위해 연구 시설에 보고한 다음 사전 연구 및 2주 보충 후, 그리고 24시간 후에 다시 보고합니다. 그림과 같이 4개의 혈액 샘플을 수집합니다(보충 전후, 운동 후/휴식 및 운동/휴식 후 24시간). 2주 보충 후 연구실에 보고할 때 연구 참가자는 무작위로 45분 동안 러닝머신에서 활발하게 앉거나 걷도록 배정됩니다. 플라보노이드 보충제를 섭취하고 실험실에서 2.5시간을 달리는 20명의 비교 그룹이 포함되어 중등도 운동과 고강도 운동을 비교할 수 있습니다(향후 연구를 위한 파일럿 데이터 제공). 기본 테스트: 연구 시작 1~2주 전에 연구 참여자(워커 및 러너)에게 연구 오리엔테이션을 제공한 후 자발적인 동의를 제공합니다. 3일 음식 일지(보충 시작 전 목요일, 금요일, 토요일)에 모든 음식 및 음료 섭취를 기록하는 지침이 제공됩니다. 인구 통계 및 훈련 이력은 설문지를 통해 수집됩니다. 신장, 체중 및 체지방률(seca Medical Body Composition Analyzer 514 생체 전기 임피던스 척도, Hanover, MD)을 측정합니다. VO2max는 Cosmed CPET 대사 시스템을 사용하여 산소 소비 및 환기를 지속적으로 모니터링하는 Bruce의 트레드밀 프로토콜을 사용하여 평가됩니다.

보충 전 실험실 방문: 연구 첫날에 참가자(보행자 및 러너)는 금식 상태(9시간 이상 물 이외의 음식 또는 음료 없이)로 실험실로 돌아갑니다. 피험자가 앉은 자세로 전주정맥에서 혈액 샘플을 채취합니다. 참가자(보행자)는 규정 준수를 용이하게 하기 위해 보충제 트레이에 정리된 플라보노이드 또는 플라시보 캡슐을 2주간 제공합니다. 러너에게는 2주간의 플라보노이드 캡슐이 제공됩니다. 3일간의 식품 기록은 연구팀이 검토 및 수집하고 Food Processor v. 11.1(ESHA Research, Salem, OR)을 사용하여 영양소 및 플라보노이드 함량을 분석합니다. 각 식품/음료는 매크로 및 미량 영양소, 총 플라보노이드 및 6개의 플라보노이드 하위 클래스 각각에 대한 소계 및 두 가지 개별 플라보노이드 값(케르세틴, EGCG)에 대해 평가됩니다. 실험실 방문 #3 이전 2일 동안 및 방문 #3을 포함하는 하루 종일 참가자는 수크랄로스(Splenda) 및 만니톨이 함유된 음식 및 음료를 피하도록 요청받을 것입니다. 수크랄로스와 만니톨을 피하기 위해 참가자는 다이어트 소다, 요거트 및 기타 유제품, 스낵 식품, 껌 및 사탕, 저당 제품, 치약 및 구강 세정제에 대한 성분 목록을 확인해야 합니다.

보충 후 실험실 방문:

2주간의 보충 기간 후, 참가자(워커 및 러너)는 하룻밤 금식 상태로 실험실로 돌아갑니다(보충 전 실험실 방문과 같은 요일).

참가자는 캡슐 섭취 준수 여부를 확인하기 위해 보충제 트레이를 뒤집습니다. 혈액 샘플을 채취합니다. 참가자(보행자)는 무작위로 실험실에 45분 동안 앉아 있거나 5% 등급 트레드밀에서 60% VO2max(처음 5분 동안 신진대사 모니터링, 이후 15, 30, 및 45분) Cosmed CPET 대사 카트 사용. 러너는 2.5시간 동안 무등급 트레드밀에서 70% VO2max로 달리고 30분마다 신진대사를 측정합니다. 물은 모든 참가자에게 자유롭게 제공되며 다른 음료나 음식은 허용되지 않습니다. 앉거나 걷는 실험실 세션과 2.5시간 달리기 직전에 참가자는 1g 수크로스, 1g 락툴로오스, 0.5g L-람노오스, 1g 에리스리톨, 1g 수크랄로스, 0.5g 만니톨이 포함된 150ml 용액을 섭취합니다. .

소변은 플라스틱 용기에 24시간 동안 0-5시간 및 5-24시간의 두 부분으로 수집됩니다. 처음 5시간 동안 소변을 수집하는 동안 먹거나 마시면 안 됩니다(수돗물 제외). 참가자는 다음날 아침 금식 상태로 돌아와 혈액 샘플을 제공하고 소변 샘플을 제출합니다.

주제에 대한 소변 수집 지침:

• 각 수집 기간(운동 시작 5시간 후, 두 번째 수집은 다음 날 아침 또는 운동 시작 후 5~24시간) 동안 모든 소변을 수집해야 합니다. 모든 방울을 수집하는 한 매번 배출되는 소변의 양은 중요하지 않습니다.
• 2개의 수집병에 낮과 밤 동안 모든 소변 방울을 수집합니다(0-5시간, 5-24시간, 실험실 운동 테스트 세션 시작부터 시작). 병을 냉장고에 보관하십시오. 배변 중에 나오는 소변을 모두 모으십시오.
• 다음날 아침에 통과한 첫 번째 소변을 수집하여 수집 병에 추가하여 마무리합니다. 두 개의 소변 수집병을 실험실로 가져오십시오(즉, 최종 혈액 샘플을 제공할 운동 세션 후 아침).

플라보노이드 보충제: 보충제 및 위약 캡슐은 Reoxcyn Innovation Group LLC(Salt Lake City, UT)에서 준비합니다. (첨부 파일의 보충 정보 참조). 성분은 커뮤니티 시험에서 테스트한 것과 동일합니다: 비타민 C(ascorbyl palmitate)(Green Wave Ingredients, La Mirada, CA), 야생 월귤나무 열매 추출물(25% 총 안토시아닌)(FutureCeuticals, Momence, IL), 녹차 잎 추출물(50% EGCG)(Watson Industries, Inc., Pomona, CA), 케르세틴 아글리콘(Novel Ingredients, East Hanover, NJ), 카페인(Creative Compounds, Scott City, MO), 오메가 3 지방산(Novotech Nutraceuticals) , 벤츄라, 캘리포니아). 캡슐 충전 성분 및 부형제에는 Nu-Flow 70R(왕겨에서 추출), 카사바 뿌리에서 추출한 타피오카, 천연 대나무 실리카, 마시멜로 뿌리가 포함됩니다. 위약 캡슐에는 충전 성분과 부형제(활성 성분 제외)만 포함됩니다. 워커를 위한 일일 서빙은 플라보노이드 2개 또는 플라시보 캡슐 2개입니다. 2개의 플라보노이드 캡슐은 329mg의 플라보노이드를 제공합니다(연구에 따라 미국 성인 평균은 하루 240mg입니다). 러너를 위한 일일 제공량은 플라보노이드 캡슐 4개(플라보노이드 658mg)입니다. 참가자에게는 플라보노이드 또는 플라시보 캡슐을 2주 분량으로 나누어 매일 섭취하는 방법에 대한 지침이 제공됩니다(아침에 1개, 점심에 1개, 러너의 경우 그 양의 두 배). 연구 참가자는 하루 또는 이틀 동안 보충제 복용을 놓친 경우 소비를 늘리기 위해 하루에 캡슐 1개를 추가할 수 있습니다. 연구 참여자는 걷기/휴식(또는 달리기) 실험실 세션 동안 혈액 샘플을 제공한 직후 2개의 캡슐(달리기의 경우 4개)을 섭취합니다.

보충 캡슐은 Mary Ann Lila 박사(NCSU, Plants for Human Health Institute, NCRC)가 연구 전후에 플라보노이드 함량에 대해 테스트할 것입니다.

표적 대사체학 분석:

내장 유래 페놀 대사산물은 100μL 조직 추출을 위한 자동화 플랫폼 및 사내 96-웰 SPE 프로토콜(60mg, 3mL; Phenomenex)을 사용하여 SPE에 의해 혈장에서 정제됩니다. 모든 분석 물질은 이전에 CV≤10%에서 80-100% 회수율의 추출 효율에 대해 최적화되었습니다. 추출물은 이전에 발표되고 검증된 방법론을 포함하는 액체 크로마토그래피 직렬 MS/MS를 통해 분리 및 정량화됩니다. 간략하게 설명하면, HPLC-ESI-MS/MS 분석은 전자분무 이온화(ESI) Turbo-V 소스(혈액 및 분변 대사 산물)가 장착된 SCIEX UPLC 결합 6500 + MS/MS-QTRAP™을 사용하여 샘플을 Kinetex PFP 컬럼 및 이동상 구배는 물(A)의 0.1% 포름산(v/v)과 아세토니트릴(B)의 0.1% 포름산(v/v)으로 구성되었으며 분리 시간은 24분이었습니다. 표적 대사산물 분석 프로토콜은 3-5개의 고유한 전이를 포함하는 단편화 프로파일링을 사용하여 확인된 추정 Phase II 접합체와 함께 당사 라이브러리의 실제 상업적 및 합성 표준과 비교하여 정량화된 200개 이상의 분석물을 검출하도록 최적화 및 검증되었습니다. 여기에는 황산염, 글루쿠로니드, 메틸 및 글리신 접합체에 해당하는 1000개 이상의 전이를 스캔하는 작업이 포함됩니다. 이 SMRM 방법론은 이전에 Rexocyn 치료에 최적화되었으며 고유한 화합물 의존성을 허용하는 것 외에도 단위 시간당 더 많은 수의 전환을 모니터링할 수 있으므로 기존의 다중 반응 모니터링(MRM) 스캐닝 절차보다 훨씬 더 민감한 방법을 제공합니다. 각 분석물에 활용되는 매개변수를 통해 감도가 향상됩니다. 마지막으로 대사산물은 머무름 시간(가능한 경우 인증 및 합성 표준 사용)과 3개 이상의 전구체에서 생산 이온으로의 전이를 기반으로 확인됩니다. 플라보노이드 분석에는 0~10μM, 페놀 대사산물 분석에는 0~50μM 범위의 7점 매트릭스 일치 검량선이 사용됩니다.

장 투과성, 소변 락툴로스/람노스:

소변 당 농도는 고압 액체 크로마토그래피로 측정합니다. 0-5시간 소변의 자당, 0-5시간 소변의 락툴로오스/람노스(L/R) 비율 및 5-24시간 소변의 수크랄로스/에리스리톨(S/E) 비율이 위십이지장에 대한 지표로 사용됩니다. , 소장 및 대장 투과성.