急性骨髄性白血病（AML）に対する新しいデジタルアレイPCRの開発と応用

微小残存病変 (MRD) とは、治療後に存在し、標準的な臨床検査や X 線画像などの臨床所見では検出できないがん細胞の存在を指します。 MRD が臨床的に検出可能になる前に検出できれば、介入して治療を最適化する機会が得られ、より多くの患者を治癒できる可能性があります。 上記の理由により、血液ベースのバイオマーカーの評価による MRD の検出は、さまざまな固形腫瘍および液性腫瘍を有する患者の臨床転帰を改善するための有望な分野となります。 急性リンパ芽球性白血病 (ALL) などの液性腫瘍では、MRD 評価はすでに日常的な臨床診療の一部となっています。 MRD は ALL の再発リスクと強く相関しており、寛解導入療法中および導入療法後の MRD 評価は、利用できる最も有益な予後マーカーの 1 つです。 こうした理由から、National Comprehensive Cancer Network (NCCN) ガイドライン バージョン 2.2020 では、MRD 評価が ALL の「一連の治療の過程における患者評価の不可欠な要素」であると示しており、小児および成人における MRD への言及は 250 件を超えています。すべての NCCN ガイドライン。 AML では、MRD 評価は学術医療センターで日常的に使用されています。 MRD は AML の再発リスクとも強く関連しており、MRD の状態は治療完了後の全生存期間の強力な独立した予測因子です。 AML NCCN ガイドライン バージョン 3.2020 では、「モニタリングの必要性は否定できない」と示されていますが、AML 患者の MRD モニタリングをより信頼できるものにするためには、さらなる改良が必要です。 この研究では、新しい高度に多重化されたデジタル PCR 技術であるデジタル アレイ PCR (daPCR) を AML における MRD の評価に適用します。これにより、コストと結果が得られるまでの時間を削減しながら、MRD アッセイの信頼性が向上します。

現在、AML における MRD 評価の方法には、異常な免疫表現型を検出するためのフローサイトメトリーのほか、再発性の AML 関連遺伝子異常を検出するための分子 PCR および次世代シークエンシング (NGS) ベースのアッセイが含まれます。 フローおよび分子 MRD 評価はどちらも形態学的評価単独よりもはるかに高い感度を持ち、フローサイトメトリーの検出下限は 10-4 ～ 10-5、分子法では NGS 法の 10-3 から PCR ベースの 10-5 の間です。方法。 現在の各方法には大きな制限があり、AML での広範な採用を妨げています。 標準的な NGS ベースの手法では、感度が不十分でコストが高くなります。 フローサイトメトリーは標準化が困難な技術的に難しい方法であり、AML 症例の一部には検出を可能にする十分な評価可能な表面マーカーがありません。 PCR ベースの方法は非常に感度が高い可能性がありますが、各アッセイは現在、単一の再発性遺伝子異常 (例、急性前骨髄球性白血病における PML/RARA 融合) を対象としており、多くの AML 症例には現在の臨床アッセイの対象となる遺伝子異常がありません。 対照的に、この研究で適用することを提案しているdaPCR技術は、前例のないダイナミックレンジ（>108）、高い使いやすさ、低コスト、および迅速なターンアラウンドタイムを備えた高スループットの多重化プラットフォーム（24〜96のバリアント）を提供します。 daPCR は複数の変異を同時にプローブできるため、最初のアッセイでは、AML サンプルの約 80% で少なくとも 1 つの AML 関連変異の存在量を検出および定量できる可能性があると推定されています。 この技術の進歩により、AML患者の治療反応を頻繁かつ詳細にモニタリングできる現実のソリューションが提供されるでしょう。