Développement et application d'une nouvelle PCR numérique pour la leucémie myéloïde aiguë (LMA)

La maladie résiduelle minimale (MRD) fait référence à la présence de cellules cancéreuses présentes après le traitement et non détectables par les résultats cliniques, y compris les tests cliniques standard et l'imagerie radiographique. La détection du MRD avant qu’il ne devienne cliniquement détectable offre la possibilité d’intervenir et d’optimiser le traitement, avec la possibilité de guérir davantage de patients. Pour les raisons ci-dessus, la détection du MRD par l’évaluation de biomarqueurs sanguins représente un domaine prometteur pour améliorer les résultats cliniques chez les patients atteints de diverses tumeurs solides et liquides. Dans les tumeurs liquides telles que la leucémie lymphoblastique aiguë (LAL), l'évaluation du MRD fait déjà partie de la pratique clinique de routine. La MRD est fortement corrélée au risque de rechute dans la LAL, et l'évaluation de la MRD pendant et après le traitement d'induction est l'un des marqueurs pronostiques les plus informatifs disponibles. Pour ces raisons, les lignes directrices du National Comprehensive Cancer Network (NCCN), version 2.2020, indiquent que l'évaluation du MRD est un « élément essentiel de l'évaluation du patient au cours d'un traitement séquentiel » pour la LAL, et il existe plus de 250 références au MRD chez les enfants et les adultes. TOUTES les directives du NCCN. Dans la LMA, l’évaluation MRD est couramment utilisée dans les centres médicaux universitaires. Le MRD est également fortement associé au risque de rechute dans la LMA, et le statut MRD est un puissant prédicteur indépendant de la survie globale après la fin du traitement. Les lignes directrices AML NCCN version 3.2020 indiquent le « besoin indéniable de surveillance », mais des améliorations supplémentaires sont nécessaires pour rendre plus fiable la surveillance MRD chez les patients atteints de LAM. Dans cette étude, nous appliquerons une nouvelle technologie de PCR numérique hautement multiplexée, la PCR numérique (daPCR), pour l'évaluation du MRD dans la LMA qui améliorera la fiabilité du test MRD tout en réduisant les coûts et les délais d'obtention des résultats.

Actuellement, les méthodes d'évaluation du MRD dans la LMA comprennent la cytométrie en flux pour la détection d'immunophénotypes aberrants ainsi que des tests basés sur la PCR moléculaire et le séquençage de nouvelle génération (NGS) pour détecter les anomalies génétiques récurrentes associées à la LMA. Les évaluations MRD en flux et moléculaires ont une sensibilité beaucoup plus élevée que l'évaluation morphologique seule, la cytométrie en flux ayant une limite inférieure de détection comprise entre 10-4 et 10-5 et les méthodes moléculaires entre 10-3 pour les méthodes NGS et 10-5 pour les méthodes basées sur la PCR. méthodes. Chacune des méthodes actuelles présente des limites majeures qui empêchent une adoption plus large en matière de LBC. Les méthodes standard basées sur NGS ont une sensibilité insuffisante et des coûts élevés. La cytométrie en flux est une méthode techniquement difficile à standardiser, et un sous-ensemble de cas de LMA ne dispose pas de suffisamment de marqueurs de surface évaluables pour permettre la détection. Les méthodes basées sur la PCR peuvent être très sensibles, mais chaque test cible actuellement une seule anomalie génétique récurrente (par exemple, fusion PML/RARA dans la leucémie promyélocytaire aiguë), et de nombreux cas de LAM ne présentent pas d'anomalies génétiques ciblées par les tests cliniques actuels. En revanche, la technologie daPCR que nous proposons d'appliquer dans cette étude fournit une plate-forme multiplexée à haut débit (24 à 96 variantes) avec une plage dynamique sans précédent (> 108), une grande facilité d'utilisation, un faible coût et un délai d'exécution rapide. Étant donné que la daPCR peut rechercher simultanément plusieurs variantes, nous estimons que notre test initial aura le potentiel de détecter et de quantifier l'abondance d'au moins une mutation associée à l'AML dans environ 80 % des échantillons d'AML. Cette avancée technologique fournirait une solution concrète permettant une surveillance fréquente et approfondie de la réponse thérapeutique chez les patients atteints de LMA.