エクアドルにおける糞線虫症の評価: フィールドラボ精度研究 (ESTRELLA)

目的と目的 このプロジェクトの目的は、S. stercoralis 感染の評価のための診断方法の性能と適用性に関する基本的な情報を提供し、WHO 2030 疾病管理の一環として実施される今後の WHO の世界的な糞線虫症管理プログラムに情報を提供することです。ターゲット。

具体的な目的は次のとおりです。

1. S. stercoralis の診断に現在利用可能な選択された診断方法の精度を推定する。
2. 対象母集団による各テストおよび関連するサンプル収集方法の受容性を評価する。
3. フィールドベースの診断として、また流行地域での監視および評価ツールとして展開するための各アッセイの実現可能性を評価する

方法 以前に収集された予備データに基づく、糞線虫症の有病率が高い地域における横断研究。 研究は学校ベースのアプローチをとります。

調査地域と参加者 調査は、エクアドルのエスメラルダス州サン ロレンソで実施されます。 行政上、サン ロレンソは 12 の地方教区に分かれています (アルト タンボ、アンコン デ サルディナス (パルマ レアル)、カルデロン、カロンデレット、5 デ ジュニオ、コンセプシオン、マタヘ、サン ハビエル デ カチャヴィ、サンタ リタ、タンビージョ、トゥルルビー - リカウテ、ウルビーナ)。 、そのうちの 2 つは海路でしか行くことができません (島であるタンビージョと、海の海岸にあるアンコン デ サルディナスまたはパルマ レアル)。

San Lorenzo 保健地区の本部は首都にあり、そこには 75 床の病院と 4 つの基本的な専門分野 (内科、小児科、産婦人科、外科) があり、24 時間体制の保健センターでは外来患者の診察、臨床検査、ワクチン接種を行っています。 、軽度の手術、合併症のない出産の支援。 さらに、いくつかの地域に 12 の保健センターがあり、すべて最近改装され、電気が完備されています。 各保健センターには、医師、看護師、歯科医、助産師、および第 1 レベルの医療従事者で構成されるチームがあります。 薬を含め、医療費は無料です。 しかし、物資が不足していることがよくあります。 コミュニティの疫学活動と基本的なヘルスケアトレーニングは、Cecomet チーム (Esmeraldas Center for Community Epidemiology and Tropical Medicine) によって何年にもわたって調整されてきました。 各保健センターはさまざまな数の村をカバーしており、保健チームが 2 ～ 3 か月ごとに訪問します。 後者は予防活動を実施し、慢性患者と危険にさらされている特定のグループを監視します。 さまざまな民族グループに属する一部の健康促進者は、コミュニティの健康管理者およびチームとコミュニティ間のコーディネーターの役割を果たし、ボランティアとして何年もこの地域で活動しています。

毎月、プロモーターとチームは、活動を監視し、臨床例について話し合い、死亡を報告することを目的として、Cecomet が調整する会議に参加します。 参加者は、罹患率と死亡率を防ぐために可能な対策について話し合い、翌月の村への訪問を計画するよう招待されています。 一般的な病理学は、南半球の多くの国で進行中の疫学的移行を反映しています。現在、かなりの疫学的重要性。 腸内寄生虫は、基本的なサービス (安全な水と衛生設備) が不足しているか存在しないことを考えると、子供たちにとって大きな問題であり続けています。

この研究は、サン ロレンツォの 12 の農村教区のうち 5 つで、主にアフリカ系住民が住む 7 つの村 (カルデロン、カロンデレット、リカウルト、S.リタ、S.フランシスコ デル ボゴタ、ラボカ、タンビージョ) の小学校で行われます。子孫。

研究手順 有益で教育的な会議が各コミュニティで開催され、糞線虫症、研究の目的、およびサンプルの収集方法について住民に通知されます。 この点で、地元の人口文化に適応した教育リーフレットと視聴覚メディアが使用されます。

介入の日程は、コミュニティ、地方自治体、および学校の​​管理者と合意して計画されます。 研究の実施前に、子供の両親/保護者からのインフォームドコンセントが求められます。

研究当日、各参加者は、検査手順のために糞便と血液（指刺しから）のサンプルを提供するように招待され、（PCとして）イベルメクチン200 mcg / Kgの単回投与およびアルベンダゾール400 mgの単回投与で治療されます。国際規格および現地のプロトコルに準拠しています。 症例報告フォーム (CRF) は、関連する症状および衛生レベルに関するその他の関連する特性に関する情報を収集するために使用されます。 各 CRF には、匿名化された ID コードが付けられます。これにより、CRF が各参加者から提供されたサンプルにリンクされます。

糞便サンプルは、Ritchie のホルモール エーテル法 (STH の場合)、Baermann 法 (S. stercoralis に固有)、および S. stercoralis のリアルタイム ポリメラーゼ連鎖反応 (PCR) でテストされます。 後者のテストでは、糞便の一部をキト中央大学の研究室に輸送するためにエタノールで保存します。 血液サンプルは指で刺すことによって得られ、2 つの ELISA アッセイ (粗抗原に基づくものと組換え抗原に基づくもの) および迅速試験紙試験 (RDT) によるその後の分析のためにろ紙に収集されます。

すべてのテストは、サンプルが収集された同じ国で実施されます。これは、制御プログラムで使用されるテストで必要とされるものに準拠しています。

診断テスト

• 糞便検査 WHO による「腸内寄生虫症の診断のための補助ベンチ」に記載されている手順に従って、ベアマン法が実施されます。

PCR は、Verweji の方法に基づくリアルタイム アッセイです。 簡単に説明すると、DNA 抽出の場合、約 200 mg の糞便を 2% ポリビニルポリピロリドン (Sigma-Aldrich) を含むリン酸緩衝生理食塩水 200 μL に懸濁し、抽出まで -20 ° C で一晩凍結します。 解凍および煮沸後、サンプルを自動抽出装置 (Magnapure LC.2、Roche) で処理します。 リアルタイムアッセイは、前述のように実行されます。 増幅ターゲットは、S. stercoralis の小サブユニット rRNA 遺伝子配列です。 適切な正と負のコントロールは、すべての実験に含まれています。 PCR 阻害剤および増幅品質のコントロールとして、PhHV-1 コントロール DNA は、マルチプレックス PCR の S. stercoralis と同じ反応で適切なプライマー/プローブ ミックスを使用して増幅されます。 反応、検出、およびデータ分析は、CFX96検出システム(Bio-Rad Laboratories)を使用して実行されます。 以前のレトロスペクティブ研究では、この方法は 56.8% (95%CI 41.0-71.6) の感度を示しました [10]。

血清学的検査

• InBios Strongy Detect TM IgG ELISA は、血清中の線虫組換え抗原 NIE および SsIR に対する特異的な IgG 抗体を検出します。 以前のキットには NIE 抗原のみが含まれていましたが、SsIR の追加は、酵素的に増幅されたサンドイッチ型イムノアッセイで構成されるテストのパフォーマンスを向上させることを目的としています。 陽性および陰性対照サンプルがキットに含まれています。 テストは、製造元の指示に従って実行および解釈されます。
• Bordier ELISA は、糞線虫の幼虫の体細胞抗原を使用して糞線虫 IgG 抗体を検出します。 以前のレトロスペクティブ研究では、感度と特異度が 90.8% (95%CI 85.8-95.7) であると推定されました。 および 94.0% (95%CI 91.2-96.9)[12]、 それぞれ。 テストは、製造元の指示に従って実行されます。 ただし、カットオフは実行ごとに異なるため、正規化された光学密度 (OD) 比を使用して、異なるセッションで得られた結果を比較します。 比 ≥1 は肯定的な結果を定義します。 このテストは広く利用可能であり、ヨーロッパ全体で定期的なスクリーニングおよび診断活動に展開されています。
• RDT は、マレーシアのサインズ マレーシア大学の分子医学研究所 (INFORMM) によって実施される迅速なディップスティック テストです。 以前の研究では、それぞれ 91.3% と 100% の感度と特異性が報告されました。 テスト結果は、指定されたウェルにサンプルを添加してから 15 分後に着色テスト バンドが出現するかどうかに基づいて、定性的です。 テスト結果の 2 本の赤色の線 (テスト ラインとコントロール ライン) の存在は陽性と解釈されますが、1 本の赤い線 (コントロール ライン) のみを示すディップスティックは陰性と解釈されます。

サンプルサイズ

サンプルサイズの計算では、評価される診断テストの感度と特異性は次のように考慮されました。

TEST 感度 特異度 Baerman 0.5 0.98 ELISA Bordier 0.9 0.93

ELISA NIE 0.7 0.91

PCR 0.6 0.95

RDT 0.9 1.0

640 人のサンプル サイズは、95% の信頼度、10% の精度、および 15% の推定有病率で計算されました。

エンドポイントと予見分析:

人口統計学的および臨床データは、記述統計、変動性および精度の尺度、およびプロットを使用して要約されます。 統計的検定は、変数のタイプ、検定の仮定、およびサンプル次元に基づいて使用されます。 すべてのパラメーターは、95% の信頼区間で報告されます。

1. A) 血清学的アッセイおよび迅速検査の感度および特異性は、最初に、研究目的に対して実質的に 100% 特異的であると見なされる Baermann および PCR の結果に対して計算されます。 したがって、各テストの精度は、Baermann および/または PCR に対するすべての陽性 (感度) および陰性 (特異性) サンプルに対する陽性結果の割合として計算されます。 不確実性は、95% 信頼区間によって定量化されます。

   B) Baerman および PCR は他の検査よりも感度が低い可能性があるため、他の検査の (低すぎる) 特異性、感度、特異性、陰性適中率 (NPV) および陽性適中率 (PPV) の誤評価につながる可能性があることを考慮すると、すべてのテストのうち、複合参照標準に対しても計算されます[16]。 これは、すべてのテストの結果の組み合わせに基づいています。具体的には、線虫症の症例は、陽性のPCRおよび/またはベールマンおよび/または陽性の血清学的検査とRDTまたは2つの陽性の血清学的検査の参加者として識別されます。 さらに、潜在クラス分析 (LCA) では、被験者を病気にかかっているかどうかを分類するために、確率モデルが適合されます。

2. 活動の受容性は、次のように評価されます。 b) 同意した各参加者による必要な糞便/血液サンプルの実際の提供。
3. 各技術の実現可能性が評価されます。結果が得られない場合、その理由（例えば、物質移動の問題/防腐剤/その他の技術的理由）が収集されます