Strongyloidiaasin arviointi Ecuadorissa: kenttälaboratorion tarkkuustutkimus (ESTRELLA)

Tavoite ja tavoitteet Tämän projektin tavoitteena on tarjota perustietoa S. stercoralis -tartunnan arvioinnissa käytettävien diagnostisten menetelmien toimivuudesta ja soveltuvuudesta tiedottaakseen tulevasta WHO:n maailmanlaajuisesta strongyloidiasis-torjuntaohjelmasta, joka toteutetaan osana WHO 2030 -taudintorjuntaa. tavoitteita.

Erityistavoitteet ovat:

1. Arvioida valittujen tällä hetkellä S. stercoralis -bakteerin diagnosointiin käytettävissä olevien diagnostisten menetelmien tarkkuus;
2. Arvioida kunkin testin ja siihen liittyvän näytteenottomenetelmän hyväksyttävyyttä kohdejoukossa;
3. Arvioida jokaisen määrityksen toteutettavuutta kenttäpohjaisena diagnoosina sekä seuranta- ja arviointityökaluna endeemisillä alueilla

Menetelmät Poikkileikkaustutkimus alueella, jolla on suuri strongyloidiaasin esiintyvyys, perustuen aiemmin kerättyihin alustaviin tietoihin. Tutkimus tulee olemaan koululähtöistä.

Tutkimusalue ja osallistujat Tutkimus suoritetaan Ecuadorissa, San Lorenzossa, Esmeraldasin maakunnassa. Hallinnollisesti San Lorenzo on jaettu 12 maaseutuseurakuntaan (Alto Tambo, Ancón de Sardinas (Palma Real), Calderón, Carondelet, 5 de junio, Concepción, Mataje, San Javier de Cachavíì, Santa Rita, Tambillo, Tululbíì- Ricaurte, Urbina) , joista kahteen pääsee vain meritse (Tambillo, joka on saari, ja Ancon de Sardinas tai Palma Real sijaitsee meren rannalla).

San Lorenzon terveysalueen pääkonttori sijaitsee pääkaupungissa, jossa on sairaala, jossa on 75 vuodepaikkaa ja 4 peruserikoisuutta (lääketiede, lastentauti, gyneko-sünnitys ja kirurgia) sekä 24h-terveyskeskus poliklinikkakäyntejä, laboratoriotutkimuksia ja rokotuksia varten. , pieni leikkaus ja apu mutkattomassa synnytyksessä. Lisäksi useilla paikkakunnilla on 12 terveyskeskusta, jotka kaikki on uusittu ja varustettu sähköllä. Jokaisessa terveyskeskuksessa on lääkäri, sairaanhoitaja, hammaslääkäri, kätilö ja ensiasteen terveydenhuollon työntekijä. Terveydenhuolto on ilmaista, lääkkeet mukaan lukien. Tarvikkeet kuitenkin usein puuttuvat. Yhteisön epidemiologian toimintaa ja perusterveydenhuollon koulutusta on koordinoinut jo vuosia Cecometin tiimi (Esmeraldas Center for Community Epidemiology and Tropical Medicine). Jokainen terveyskeskus kattaa vaihtelevan määrän kyliä, joihin terveystiimi vierailee 2/3 kuukauden välein. Jälkimmäinen harjoittaa ennaltaehkäisevää toimintaa, seuraa kroonisia potilaita ja tiettyjä riskiryhmiä. Jotkut eri etnisiin ryhmiin kuuluvat terveydenedistäjät ovat työskennelleet alueella vuosia vapaaehtoisina toimien yhteisön terveysvalvojina ja koordinaattoreina tiimien ja yhteisöjen välillä.

Joka kuukausi promoottorit ja tiimit osallistuvat Cecometin koordinoimaan kokoukseen, jonka tavoitteena on seurata toimintaa, keskustella kliinisistä tapauksista ja raportoida kuolemista. Osallistujia pyydetään keskustelemaan mahdollisista toimenpiteistä sairastuvuuden ja kuolleisuuden ehkäisemiseksi sekä suunnittelemaan seuraavan kuukauden kylävierailuja. Vallitseva patologia heijastaa monissa eteläisen pallonpuoliskon maissa meneillään olevaa epidemiologista muutosta: tartunta-/loistautien, kuten malarian, Chagasin taudin, denguekuumeen, chikungunyan, tuberkuloosin ja leishmaniaasin, jatkumisen lisäksi kroonista rappeuttavaa patologiaa, erityisesti verenpainetautia ja diabetesta, on esiintynyt. tällä hetkellä huomattava epidemiologinen merkitys. Peruspalvelujen (turvallinen vesi ja sanitaatio) niukkuuden tai puuttumisen vuoksi suolistoloiset ovat edelleen suuri ongelma lapsille.

Tutkimus suoritetaan 5:ssä San Lorenzon 12 maaseutuseurakunnasta, 7 kylän (Calderon, Carondelet, Ricaurte, S.Rita, S.Francisco del Bogotà, La Boca, Tambillo) alakouluissa, joissa pääasiassa asuu afro- jälkeläisiä.

Tutkimusmenettelyt Jokaisessa yhteisössä järjestetään tiedotus- ja koulutustilaisuuksia, joissa tiedotetaan väestölle strongyloidiaasista, tutkimuksen tavoitteista ja näytteenottomenetelmistä. Tässä yhteydessä käytetään koulutuslehtisiä ja paikalliseen väestökulttuuriin mukautettua audiovisuaalista mediaa.

Interventiopäivämäärät suunnitellaan yhteisymmärryksessä yhteisöjen, paikallisviranomaisten ja koulun johtajien kanssa. Ennen tutkimuksen toteuttamista pyydetään tietoinen suostumus lasten vanhemmilta/huoltajilta.

Tutkimuspäivänä jokaista osallistujaa pyydetään toimittamaan uloste- ja verinäytteitä (sormenpistosta) testaustoimenpiteitä varten, ja häntä hoidetaan (PC:nä) ivermektiinillä 200 mcg/kg kerta-annoksella ja albendatsolia 400 mg kerta-annoksella sen mukaan. kansainvälisten standardien ja paikallisten protokollien mukaisesti. Tapausraporttilomaketta (CRF) käytetään keräämään tietoja asiaankuuluvista oireista ja muista sanitaatiotasoon liittyvistä oleellisista ominaisuuksista. Jokainen CRF merkitään anonymisoidulla ID-koodilla, joka yhdistää CRF:n kunkin osallistujan toimittamiin näytteisiin.

Ulostenäytteet testataan Ritchien formolieetteritekniikalla (STH:lle), Baermannin menetelmällä (spesifisesti S. stercoralis -bakteerille) ja reaaliaikaisella polymeraasiketjureaktiolla (PCR) S. stercoralis -bakteerille. Jälkimmäistä testiä varten osa ulosteesta säilytetään etanolissa kuljetettavaksi Quiton keskusyliopiston laboratorioon. Verinäytteet otetaan sormenpistolla, ja ne kerätään suodatinpapereille myöhempää analyysiä varten kahdella ELISA-määrityksellä (toinen perustuu raaka-antigeeniin ja toinen rekombinanttiantigeeniin) ja nopealla mittatikkutestillä (RDT).

Kaikki testit suoritetaan samassa maassa, jossa näytteet kerätään, sen mukaisesti, mitä valvontaohjelmissa käytettävä testi edellyttää.

Diagnostiset testit

• Ulostetutkimukset Baermann-menetelmä suoritetaan WHO:n kohdassa "Penkkiapuvälineet suolistoparasitoosin diagnosointiin" kuvattujen menettelyjen mukaisesti.

PCR on reaaliaikainen määritys, joka perustuu Verwejin menetelmään. Lyhyesti sanottuna DNA-uuttoa varten noin 200 mg ulostetta suspendoidaan 200 ul:aan fosfaattipuskuroitua suolaliuosta, joka sisältää 2 % polyvinyylipolypyrolidonia (Sigma-Aldrich), ja jäädytetään yön yli -20 °C:ssa uuttamiseen asti. Sulatuksen ja keittämisen jälkeen näytteet ajetaan automaattisella uuttolaitteella (Magnapure LC.2, Roche). Reaaliaikainen määritys suoritetaan edellä kuvatulla tavalla. Monistuskohde on S. stercoralis -bakteerin pienen alayksikön rRNA-geenisekvenssi. Kaikkiin kokeisiin sisällytetään asianmukaiset positiiviset ja negatiiviset kontrollit. PCR-inhibiittoreiden ja monistuksen laadun kontrollina PhHV-1-kontrolli-DNA monistetaan sopivilla alukkeilla/koetinseoksella samassa reaktiossa kuin S. stercoralis multiplex-PCR:ssä. Reaktiot, havaitseminen ja data-analyysi suoritetaan CFX96-ilmaisujärjestelmällä (Bio-Rad Laboratories). Aiemmassa retrospektiivisessä tutkimuksessa menetelmän herkkyys oli 56,8 % (95 % CI 41,0-71,6)[10].

Serologiset testit

• InBios Strongy Detect TM IgG ELISA havaitsee spesifiset IgG-vasta-aineet Strongyloides-rekombinanttiantigeeneille NIE ja SsIR seerumista. Aikaisempi pakkaus sisälsi vain NIE-antigeenin, ja SsIR:n lisäämisellä pyritään parantamaan testin suorituskykyä, joka koostuu entsymaattisesti monistetusta sandwich-tyyppisestä immunomäärityksestä. Positiiviset ja negatiiviset kontrollinäytteet toimitetaan pakkauksessa. Testi suoritetaan ja tulkitaan valmistajan ohjeiden mukaisesti.
• Bordier ELISA havaitsee Strongyloides IgG -vasta-aineet käyttämällä Strongyloides rattin toukkien somaattisia antigeenejä. Edellinen retrospektiivinen tutkimus arvioi sen herkkyyden ja spesifisyyden olevan 90,8 % (95 % CI 85,8-95,7) ja 94,0 % (95 % CI 91,2-96,9)[12], vastaavasti. Testi suoritetaan valmistajan ohjeiden mukaisesti. Koska raja-arvo kuitenkin vaihtelee ajon välillä, käytämme normalisoitua optisen tiheyden (OD) suhdetta vertaillaksemme eri istunnoissa saatuja tuloksia. Suhde ≥1 määrittelee positiiviset tulokset. Testi on laajalti saatavilla ja sitä käytetään rutiiniseulonnassa ja diagnostisissa toimissa kaikkialla Euroopassa.
• RDT on nopea mittatikkutesti, jonka on toteuttanut Sains Malesian yliopiston molekyylilääketieteen instituutti (INFORMM). Edellinen tutkimus raportoi herkkyydeksi 91,3 % ja spesifisyydeksi 100 %. Testitulos on kvalitatiivinen, ja se perustuu värillisen testinauhan esiintymiseen/puuttumiseen 15 minuuttia näytteen lisäämisen jälkeen määrättyyn kuoppaan. Testituloksen kahden punaisen viivan (testi- ja kontrolliviiva) esiintyminen tulkitaan positiiviseksi, kun taas mittatikku, jossa on vain yksi punainen viiva (kontrolliviiva), tulkitaan negatiiviseksi.

Otoskoko

Otoskoon laskennassa arvioitavien diagnostisten testien herkkyys ja spesifisyys otettiin huomioon seuraavasti:

TEST-herkkyysspesifisyys Baerman 0,5 0,98 ELISA Bordier 0,9 0,93

ELISA NIE 0,7 0,91

PCR 0,6 0,95

RDT 0,9 1,0

640 yksilön otoskoko laskettiin 95 %:n luotettavuudella, 10 %:n tarkkuudella ja 15 %:n arvioidulla levinneisyydellä.

Päätepisteet ja ennakoitu analyysi:

Demografisista ja kliinisistä tiedoista tehdään yhteenveto käyttämällä kuvaavia tilastoja, vaihtelu- ja tarkkuusmittauksia ja kaavioita. Tilastollisia testejä käytetään muuttujien tyyppien, testioletusten ja otosulottuvuuden perusteella. Kaikki parametrit raportoidaan 95 %:n luottamusvälillä.

1. A) Serologisten määritysten ja pikatestin herkkyys ja spesifisyys lasketaan ensin Baermannin ja PCR:n tuloksista, joiden molempien katsotaan olevan käytännössä 100 % spesifisiä tutkimustarkoitukseen. Näin ollen kunkin testin tarkkuus lasketaan positiivisten tulosten osuutena kaikista positiivisista (herkkyys) ja negatiivisista (spesifisyys) Baermann- ja/tai PCR-näytteistä. Epävarmuus kvantifioidaan 95 %:n luottamusvälillä.

   B) Ottaen huomioon, että Baermanilla ja PCR:llä voi olla alhaisemmat herkkyydet kuin muilla testeillä, mikä voi johtaa muiden testien (liian alhaiseen) spesifisyyden, herkkyyden, spesifisyyden, negatiivisen ennustusarvon (NPV) ja positiivisen ennustusarvon (PPV) virhearviointiin. kaikista testeistä lasketaan myös yhdistetyn vertailustandardin[16] mukaan. Tämä perustuu kaikkien testien tulosten yhdistelmään, erityisesti: strongyloidiaasitapaukset tunnistetaan osallistujiksi, joilla on positiivinen PCR JA/TAI Baermann JA/TAI positiivinen serologinen testi plus RDT TAI kaksi positiivista serologista testiä. Lisäksi latenttiluokka-analyysissä (LCA) sovitetaan todennäköisyysmallit, jotta koehenkilöt voidaan luokitella sairaiksi tai ei-sairaiksi.

2. Toiminnan hyväksyttävyyttä arvioidaan a) osallistumiseen suostuvien määränä koko kohdeväestöstä, jolle tutkimukseen osallistumista tarjotaan; b) vaadittujen uloste-/verinäytteiden tosiasiallinen toimittaminen kunkin suostumuksen antaneen osallistujan toimesta.
3. Kunkin tekniikan toteutettavuus arvioidaan a) laskemalla kaikista kerätyistä sopivista näytteistä niiden näytteiden lukumäärä, joille kunkin tekniikan tulos on saatavilla; kun tulosta ei ole saatavilla, syy (esim. materiaalin siirtoon liittyvät ongelmat/säilöntäaine/muut tekniset syyt) kerätään b) mahdollisten ongelmien selvittäminen laboratorion henkilökunnalle annettavalla kyselylomakkeella