에콰도르의 스트롱길로이드증 평가: 현장 실험실 정확도 연구 (ESTRELLA)

목표 및 목표 이 프로젝트의 목적은 WHO 2030 질병 통제의 일환으로 시행될 향후 WHO 글로벌 강충충증 통제 프로그램을 알리기 위해 S. stercoralis 감염 평가를 위한 진단 방법의 성능 및 적용 가능성에 대한 기본 정보를 제공하는 것입니다. 대상.

구체적인 목표는 다음과 같습니다.

1. 현재 S. stercoralis의 진단에 사용할 수 있는 선택된 진단 방법의 정확도를 추정합니다.
2. 대상 모집단에 의한 각 테스트 및 관련 샘플 수집 방법의 수용 가능성을 평가합니다.
3. 현장 기반 진단 및 풍토병 지역의 모니터링 및 평가 도구로 배치하기 위한 각 분석의 타당성을 평가합니다.

방법 이전에 수집된 예비 데이터를 기반으로 한 강 유병증 유병률이 높은 지역의 단면 연구. 연구는 학교 기반 접근법을 가질 것입니다.

연구 지역 및 참가자 연구는 Esmeraldas 지방의 San Lorenzo에 있는 에콰도르에서 수행될 것입니다. 행정적으로 San Lorenzo는 12개의 시골 교구(Alto Tambo, Ancón de Sardinas(Palma Real), Calderón, Carondelet, 5 de junio, Concepción, Mataje, San Javier de Cachavíì, Santa Rita, Tambillo, Tululbíì- Ricaurte, Urbina)로 나뉩니다. , 그 중 두 곳은 바다로만 갈 수 있습니다(섬인 Tambillo와 바다 기슭에 위치한 Ancon de Sardinas 또는 Palma Real).

San Lorenzo 보건 지구는 수도에 본사가 있으며 여기에는 75개의 병상과 4개의 기본 전문 분야(의학, 소아과, 산부인과 및 수술)가 있는 병원과 외래 환자 방문, 실험실 검사, 예방 접종을 위한 24시간 보건 센터가 있습니다. , 경미한 수술 및 복잡하지 않은 출산 지원. 또한 여러 지역에 12개의 의료 센터가 있으며 모두 최근에 개조되고 전기 시설을 갖추고 있습니다. 각 보건소에는 의사, 간호사, 치과의사, 조산사, 1급 의료 종사자로 구성된 팀이 있습니다. 의약품을 포함한 건강 관리는 무료입니다. 그러나 공급품이 부족한 경우가 많습니다. 지역사회 역학 활동 및 기본 건강 관리 교육은 Cecomet 팀(Esmeraldas 지역사회 역학 및 열대 의학 센터)에 의해 수년간 조정되었습니다. 각 보건소는 보건팀에서 2/3개월마다 방문하는 다양한 수의 마을을 담당합니다. 후자는 예방 활동을 수행하고 만성 환자 및 위험에 처한 특정 그룹을 모니터링합니다. 다른 인종 그룹에 속하는 일부 건강 프로모터는 지역 사회 보건 감독자 및 팀과 지역 사회 간의 조정자 역할을 하는 자원 봉사자로 수년 동안 영토에서 일해 왔습니다.

매월 프로모터와 팀은 활동을 모니터링하고 임상 사례를 논의하며 사망 보고를 목적으로 Cecomet이 조정하는 회의에 참여합니다. 참가자들은 이환율과 사망률을 예방하기 위한 가능한 조치를 논의하고 다음 달 마을 방문을 계획하도록 초대됩니다. 우세한 병리학은 남반구의 많은 국가에서 진행 중인 역학적 변화를 반영합니다. 말라리아, 샤가스병, 뎅기열, 치쿤구니아병, 결핵, 리슈만편모충증과 같은 감염성/기생충 질병의 지속성과 함께 만성 퇴행성 병리학, 특히 고혈압 및 당뇨병은 지금 상당한 역학적 중요성. 기본 서비스(안전한 물과 위생)가 부족하거나 존재하지 않는 상황에서 장내 기생충은 계속해서 어린이들에게 중요한 문제입니다.

이 연구는 산 로렌조의 12개 시골 본당 중 5개, 주로 아프리카인이 거주하는 7개 마을(칼데론, 카론델레, 리카우르테, S.리타, S.프란시스코 델 보고타, 라 보카, 탐비요)의 초등학교에서 진행됩니다. 자손.

연구 절차 각 커뮤니티에서 정보 및 교육 회의가 개최되어 인구에게 강유양증, 연구 목표 및 샘플 수집 방법에 대해 알립니다. 이와 관련하여 교육용 전단지와 현지 인구 문화에 적합한 시청각 매체가 사용될 것입니다.

개입 날짜는 지역 사회, 지역 당국 및 학교 관리자와 합의하여 계획됩니다. 연구를 시행하기 전에 아동의 부모/보호자의 정보에 입각한 동의를 구할 것입니다.

연구 당일, 각 참가자는 테스트 절차를 위해 대변 및 혈액(손가락 찌르기) 샘플을 제공하도록 초대되며, ivermectin 200mcg/Kg 단일 용량 및 albendazole 400mg 단일 용량으로 치료(PC로)됩니다. 국제 표준 및 현지 프로토콜을 준수합니다. 사례 보고서 양식(CRF)은 위생 수준과 관련된 관련 증상 및 기타 관련 특성에 대한 정보를 수집하는 데 사용됩니다. 각 CRF에는 익명화된 ID 코드가 표시되어 각 참가자가 제공한 샘플에 CRF를 연결합니다.

대변 ​​샘플은 Ritchie의 포르몰-에테르 기술(STH용), Baermann 방법(S. stercoralis용) 및 S. stercoralis용 실시간 중합효소 연쇄 반응(PCR)으로 테스트됩니다. 후자의 테스트를 위해 대변의 일부는 키토 중앙 대학의 실험실로 운반하기 위해 에탄올에 보존됩니다. 혈액 샘플은 손가락을 찔러 채취하고 2개의 ELISA 분석(조 항원 기반 및 재조합 항원 기반) 및 급속 딥스틱 테스트(RDT)로 후속 분석을 위해 여과지에 수집합니다.

모든 테스트는 제어 프로그램에서 사용되는 테스트에서 요구하는 사항을 준수하여 샘플이 수집된 동일한 국가에서 수행됩니다.

진단 테스트

• 대변 검사 Baermann 방법은 WHO에서 "장내 기생충 진단을 위한 벤치 보조 도구"에 설명된 절차에 따라 수행됩니다.

PCR은 Verweji의 방법을 기반으로 한 실시간 분석입니다. 간단히 말해서, DNA 추출을 위해 약 200 mg의 대변을 2% 폴리비닐폴리피롤리돈(Sigma-Aldrich)을 함유하는 인산염 완충 식염수 200 μL에 현탁시키고 추출할 때까지 -20°C에서 밤새 동결합니다. 해동 및 끓인 후 샘플을 자동 추출기(Magnapure LC.2, Roche)로 실행합니다. 실시간 분석은 앞에서 설명한 대로 수행됩니다. 증폭 표적은 S. stercoralis에 대한 small-subunit rRNA 유전자 서열입니다. 적절한 양성 및 음성 대조군이 모든 실험에 포함됩니다. PCR 억제제 및 증폭 품질에 대한 컨트롤로서 PhHV-1 컨트롤 DNA는 다중 PCR에서 S. stercoralis와 동일한 반응에서 적절한 프라이머/프로브 믹스로 증폭됩니다. 반응, 검출 및 데이터 분석은 CFX96 검출 시스템(Bio-Rad Laboratories)으로 수행됩니다. 이전의 후향적 연구에서 이 방법은 56.8%(95%CI 41.0-71.6)[10]의 민감도를 보여주었습니다.

혈청학적 검사

• InBios Strongy Detect TM IgG ELISA는 혈청에서 Strongyloides 재조합 항원 NIE 및 SsIR에 대한 특정 IgG 항체를 검출합니다. 이전 키트에는 NIE 항원만 포함되어 있었는데, SsIR을 추가하면 효소 증폭 샌드위치 방식의 면역분석으로 구성된 검사의 성능을 향상시키는 데 목적이 있습니다. 양성 및 음성 대조군 샘플이 키트에 제공됩니다. 테스트는 제조업체의 지침에 따라 실행되고 해석됩니다.
• Bordier ELISA는 Strongyloides ratti 유충의 체세포 항원을 사용하여 Strongyloides IgG 항체를 검출합니다. 이전의 후향적 연구에서는 민감도와 특이도를 90.8%(95%CI 85.8-95.7)로 추정했습니다. 및 94.0%(95%CI 91.2-96.9)[12], 각기. 테스트는 제조업체의 지침에 따라 수행됩니다. 그러나 실행 간에 컷오프가 다르기 때문에 정규화된 광학 밀도(OD) 비율을 사용하여 다른 세션에서 얻은 결과를 비교합니다. 비율 ≥1은 긍정적인 결과를 정의합니다. 이 테스트는 유럽 전역에서 일상적인 검사 및 진단 활동을 위해 광범위하게 사용 가능하고 배포됩니다.
• RDT는 말레이시아 세인스 대학교(University Sains Malaysia, Malaysia)의 분자 의학 연구소(INFORMM)에서 시행하는 신속한 딥스틱 테스트입니다. 이전 연구에서는 민감도와 특이도가 각각 91.3%와 100%로 보고되었습니다. 테스트 결과는 지정된 웰에 샘플을 추가한 후 15분 후에 유색 테스트 밴드의 유무에 따라 정성적입니다. 테스트 결과 두 개의 빨간색 라인(테스트 및 컨트롤 라인)이 있으면 양성으로 해석되는 반면, 하나의 빨간색 라인(컨트롤 라인)만 표시되는 딥스틱은 음성으로 해석됩니다.

표본의 크기

표본 크기 계산을 위해 평가할 진단 테스트의 민감도와 특이도는 다음과 같이 고려되었습니다.

TEST 민감도 특이도 Baerman 0.5 0.98 ELISA Bordier 0.9 0.93

엘리사 NIE 0.7 0.91

PCR 0.6 0.95

RDT 0.9 1.0

640명의 표본 크기는 95% 신뢰도, 10% 정확도 및 추정 유병률 15%로 계산되었습니다.

종점 및 예상 분석:

인구 통계 및 임상 데이터는 기술 통계, 가변성 및 정밀도 측정 및 플롯을 사용하여 요약됩니다. 통계 테스트는 변수 유형, 테스트 가정 및 샘플 차원에 따라 사용됩니다. 모든 매개변수는 95% 신뢰 구간으로 보고됩니다.

1. A) 혈청학적 분석 및 신속 검사의 민감도 및 특이성은 연구 목적에 거의 100% 특이적인 것으로 간주되는 Baermann 및 PCR의 결과에 대해 먼저 계산됩니다. 따라서 각 테스트의 정확도는 Baermann 및/또는 PCR에 대한 모든 양성(민감도) 및 음성(특이성) 샘플에 대한 양성 결과의 비율로 계산됩니다. 불확실성은 95% 신뢰 구간으로 정량화됩니다.

   나) Baerman과 PCR이 다른 검사보다 민감도가 낮아 다른 검사의 특이도(너무 낮음)를 잘못 평가할 수 있음을 고려하여 민감도, 특이도, 음성 예측도(NPV) 및 양성 예측도(PPV) 의 모든 테스트는 복합 참조 표준[16]에 대해서도 계산됩니다. 이것은 모든 테스트 결과의 조합을 기반으로 합니다. 특히: 강유양증 사례는 양성 PCR AND/OR Baermann AND/OR 양성 혈청학적 검사 + RDT 또는 두 가지 양성 혈청학적 검사를 가진 참가자로 식별됩니다. 또한 LCA(latent class analysis)에서 확률 모델은 피험자를 질병이 있는지 여부를 분류하기 위해 적합합니다.

2. 활동의 수용 가능성은 다음과 같이 평가됩니다. b) 각 동의 참가자가 요구하는 대변/혈액 샘플의 실제 제공.
3. 각 기술의 타당성을 평가할 것입니다. 결과가 없는 경우 사유(예: 물질이동/보존제/기타 기술상의 문제 등) 수집