重大なサイズの骨欠損を有する患者の誘導膜におけるH型血管形成の役割

人工膜法 (IMT) とも呼ばれるマスケット法は、1986 年に Pr. アラン・シャルル・マスケレ 他 IMT は 2 段階の外科手術であり、最近では重大なサイズの骨欠損および骨折癒合不全の治療のためのより一般的なオプションを提供しています。 基本的に、IMT の第 1 段階では、抗生物質を充填したポリメチルメタクリレート (PMMA) セメント スペーサーを欠損部位に移植します。 6 ～ 8 週間の間に、このスペーサーは、異物免疫応答を介して、それを取り囲む誘導膜と呼ばれる薄い層の形成と成熟を誘導します。 ステージ II では、誘導された膜を骨折部位に維持しながらスペーサーを慎重に除去し、その後、骨の治癒を誘発するために自家骨移植を行います。 IMT は、血管化された腓骨移植片と比較して比較的単純な管理を含むいくつかの有益な効果をもたらし、さまざまな欠陥サイズ間で治癒時間に大きな違いはありません。 注目すべきは、複数の手術と長い回復時間は、IMT で治療された患者で克服する必要がある困難です。 誘導膜が結合の成功に不可欠な要素であると考えられてきたという事実を考慮すると、それをより詳細かつ包括的に分析することで、IMT のプロセスを改善し、これらの困難を改善することができます。

臨床研究のデザインは、Chang Gung Medical Foundation Institutional Review Boardの説明に従います。これは、各グループの患者が15人に達するまで、初年度に開始されます。 手短に言えば、開放骨折の患者は、スペーサー（誘導膜あり）とスペーサーグループなし（誘導膜なし）を含む選択バイオスを減らすためにランダムに2つのグループに分けられます。 スペーサーなしのグループ (ステージ I の操作なし) では、サイズが 1 cm2 の骨折部位近くの軟部組織が収集され、スペーサー グループ (ステージ I + II ) IMT のステージ II の時点で。 組織は、プロテオミクス、メタボロミクス、およびパラフィン化セクションの 3 つの部分に解剖され、実験前にマイナス 80 度で保存されます。 このセクションは、タイプ H 血管形成と骨治癒能力を特徴付けるために、このプロジェクトで不可欠です。 この目的のために、免疫組織化学（IHC）または免疫蛍光（IF）を実行して、軟部組織と誘導膜の両方でプロテオミクスの結果から同定されたタンパク質を測定します。 分化クラスター 31 (CD31) およびエンドムチン (Emcn) を含む特徴付けられたマーカーを使用して、H 型血管を検出します。マッソン トリクローム、アルシアン ブルー、アリザリン レッド S、H&E、サフラニン O-ファスト グリーンなどの比色法を実行して、誘導された膜の組織学的洞察を明らかにすることもできます。 マルチオミクスでは、組織を使用して新しい標的を明らかにし、血管内皮増殖因子 (VEGF) およびオステオカルシンのレベルと比較します。 さらに、ウェスタンブロッティングとリアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応 (RT-PCR) を実行して、同定された代謝産物の下流制御を検証します。

静脈血 (ヘパリンを含むバキュテナーで 3ml) は、台湾の桃園にある長庚記念病院の整形外科で両方のグループから採取されます。 このプロトコルは、VEGF が IMT における結合の潜在的なバイオマーカーであると特定したレポートに基づいていました。 採血後、血液を 30 分間遠心分離 (1000 RPM、室温で 10 分間) し、分析までマイナス 80 度で保存します。 誘導膜を採取した時点からの血液サンプルをマルチオミクス分析用に調製し、H型血管または誘導膜の全身マーカーを特定し、VEGFおよびオステオカルシンを骨量の血清指標として使用します。 すべての時点からの血液サンプルを使用して、H 型血管および骨治癒の新規バイオマーカーを特定します。 代謝物の標的に関しては、標的を絞ったメタボロミクス法を使用して、それらを血中で検証します。 ステージ I の血液サンプルを収集するための時点は、手術の日、手術の翌日、および手術後 1、2、および 4 週間になります。 ステージ II については、時点は、手術当日、手術の翌日、および手術後 1、2、12、および 14 週間になります。