A H típusú érképződés szerepe a kritikus méretű csonthiányos betegek indukált membránjában

Az álarcos technikát, amelyet indukált membrántechnikának (IMT) is neveznek, először 1986-ban vezette be a 25 cm-ig terjedő kritikus méretű csontdefektus kezelésére Pr. Alain Charles Masquelet et al. Az IMT egy kétlépcsős sebészeti műtét, amely a közelmúltban egyre népszerűbb megoldást kínál a kritikus méretű csontdefektusok, valamint a törések össze nem illő kezelésére. Alapvetően az IMT első szakasza egy antibiotikumokkal megtöltött polimetil-metakrilát (PMMA) cementtávtartó beültetését tartalmazza a hibahelyre. Ez a távtartó 6-8 hét alatt az őt körülvevő, indukált membránnak nevezett vékony réteg kialakulását és érését idézi elő egy idegen test immunválaszán keresztül. A II. szakaszban a távtartót óvatosan eltávolítják, miközben az indukált membránt a törés helyén tartják, majd autológ csontgraftot hajtanak végre a csontgyógyulás előidézése érdekében. Az IMT számos jótékony hatással rendelkezik, beleértve a viszonylag egyszerű kezelést a vaszkularizált fibuláris graftokhoz képest, és nincs szignifikáns különbség a gyógyulási időben a különböző méretű defektusok között. Megjegyzendő, hogy a többszörös műtétek és a hosszú felépülési idő azok a nehézségek, amelyeket még le kell győzni az IMT-vel kezelt betegeknél. Tekintettel arra, hogy az indukált membránt a sikeres egyesülés elengedhetetlen összetevőjének tekintették, ennek részletesebb és átfogóbb elemzése javítani fogja az IMT folyamatát, hogy enyhítse ezeket a nehézségeket.

A klinikai vizsgálat felépítése követi a Chang Gung Medical Foundation Institutional Review Board leírását, amely az első évben kezdődik, amíg el nem éri a 15 beteget minden csoportban. Röviden, a nyílt törésben szenvedő betegeket véletlenszerűen két csoportra osztjuk, hogy csökkentsük a szelekciós bioszindrómát, amelyek tartalmaznak spacer-t (indukált membránnal) és spacer nélküli csoportokat (indukált membrán nélkül). Egy távtartó nélküli csoportban (az I. stádiumban nincs művelet) a törési helyek közelében lévő, 1 cm2-es lágyszöveteket gyűjtik össze, hogy megfelelő kontrollként használják fel az indukált membránt (1 cm2) a spacer csoportból (I + II. szakasz). ) az IMT II. szakaszának időpontjában. A szöveteket három részre boncolják a proteomika, metabolomika és paraffinizált rész céljából, és mínusz 80 fokon tárolják a kísérletek előtt. A szakasz elengedhetetlen ebben a projektben a H típusú érképződés és a csontgyógyulás képességének jellemzésére. Ebből a célból immunhisztokémiát (IHC) vagy immunfluoreszcenciát (IF) végeznek a proteomikai eredményekből azonosított fehérjék mérésére mind a lágy szövetekben, mind az indukált membránban. A 31-es differenciálódási klasztert (CD31) és az endomucint (Emcn) tartalmazó jellemzett markereket a H típusú erek kimutatására használjuk. Kolorimetriás módszerek, köztük a Masson-féle trikróm, az Alcián-kék, az Alizarin-vörös S, a H&E és a Safranin O-Fast zöld, szintén elvégezhetők az indukált membrán szövettani betekintésének feltárására. A multi-omikák során szöveteket használnak fel új célpontok feltárására, amelyeket azután a vaszkuláris endoteliális növekedési faktor (VEGF) és az osteocalcin szintjével hasonlítanak össze. Továbbá Western-blot-vizsgálatot és valós idejű reverz transzkriptáz-polimeráz láncreakciót (RT-PCR) végeznek az azonosított metabolitok downstream szabályozásának validálására.

A vénás vért (3 ml heparint tartalmazó vacutainerben) mindkét csoporttól a Taoyuan, Taoyuan, Chang Gung Memorial Hospital Ortopédiai Sebészeti Osztályán veszik. A protokoll egy olyan jelentésen alapult, amely a VEGF-et az unió lehetséges biomarkereként azonosította az IMT-ben. Levétel után a vért centrifugáljuk (1000 RPM, 10 perc szobahőmérsékleten) 30 percig, és mínusz 80 fokon tároljuk az elemzésig. Az indukált membrán összegyűjtésének időpontjáról vérmintákat készítenek elő multi-omika analízishez, hogy azonosítsák a H típusú ér vagy az indukált membrán szisztémás markereit, és a VEGF-et és az oszteokalcint használják a csonttömeg szérumindikátoraként. Minden időpontból származó vérmintákat használnak a H típusú erek és a csontgyógyulás új biomarkerének azonosítására. Ami a metabolitcélokat illeti, célzott metabolomikai módszereket alkalmaznak azok vérben történő ellenőrzésére. Az I. stádiumú vérminták vételének időpontja a műtét napja, a műtét másnapja, valamint a műtét utáni 1, 2 és 4 hét. Ami a II. szakaszt illeti, az időpontok a műtét napja, a műtét következő napja, valamint a műtét utáni 1, 2, 12 és 14 hét.