Tyypin H verisuonen muodostumisen rooli indusoidussa kalvossa potilailla, joilla on kriittisen kokoinen luuvaurio

Masquelet-tekniikan, jota kutsutaan myös indusoiduksi kalvotekniikaksi (IMT), otettiin ensimmäisen kerran käyttöön kriittisen kokoisen, jopa 25 cm:n luuvaurion hoitoon vuonna 1986 Pr. Alain Charles Masquelet et ai. IMT on kaksivaiheinen kirurginen leikkaus, joka tarjoaa viime aikoina entistä suositumman vaihtoehdon kriittisen kokoisten luuvaurioiden ja murtumien yhteenliittymien hoidossa. Pohjimmiltaan IMT:n ensimmäinen vaihe käsittää polymetyylimetakrylaatti (PMMA) -sementtivälikkeen, joka on ladattu antibiooteilla, implantoinnin vikakohtaan. Tämä välike saa aikaan 6–8 viikon aikana sen ympärillä olevan ohuen kerroksen, jota kutsutaan indusoiduksi kalvoksi, muodostumisen ja kypsymisen vieraan kehon immuunivasteen kautta. Vaiheessa II välike poistetaan varovasti samalla kun indusoitu kalvo pidetään murtumakohdassa, minkä jälkeen suoritetaan autologinen luusiirrännäinen luun paranemisen provosoimiseksi. IMT:llä on useita hyödyllisiä vaikutuksia, mukaan lukien suhteellisen yksinkertainen hoito verrattuna vaskularisoituihin fibulaarisiin siirteisiin, eikä merkittävää eroa paranemisajassa eri kokoisten defektien välillä. On huomattava, että useat leikkaukset ja pitkä toipumisaika ovat vaikeudet, jotka on vielä voitettava IMT-hoitoa saavilla potilailla. Ottaen huomioon, että indusoitua kalvoa on pidetty välttämättömänä komponenttina onnistuneelle liittämiselle, sen yksityiskohtaisempi ja kattavampi analyysi parantaa IMT-prosessia näiden vaikeuksien lievittämiseksi.

Kliinisen tutkimuksen suunnittelussa noudatetaan Chang Gung Medical Foundationin Institutional Review Boardin kuvausta, joka aloitetaan ensimmäisenä vuonna, kunnes kuhunkin ryhmään saadaan 15 potilasta. Lyhyesti sanottuna potilaat, joilla on avoin murtuma, jaetaan satunnaisesti kahteen ryhmään valintabioosien vähentämiseksi, jotka sisältävät välikappaleen (indusoidun kalvon kanssa) ja ilman välikeryhmiä (ilman indusoitua kalvoa). Ryhmässä, jossa ei ole välikappaletta (Ei vaiheen I leikkausta), murtumakohtien lähellä olevat pehmytkudokset, joiden koko on 1 cm2, kerätään käytettäväksi sopivana kontrollina indusoidulle kalvolle (1 cm2) välikeryhmästä (vaihe I + II). ) IMT:n vaiheen II ajankohtana. Kudokset leikataan kolmeen osaan proteomiikkaa, metabolomiikkaa ja paraffinoitua osaa varten, säilytetään miinus 80 asteessa ennen kokeita. Osio on välttämätön tässä projektissa H-tyypin verisuonten muodostumisen ja luun paranemiskyvyn karakterisoimiseksi. Tätä tarkoitusta varten suoritetaan immunohistokemia (IHC) tai immunofluoresenssi (IF) identifioitujen proteiinien mittaamiseksi proteomiikan tuloksista sekä pehmytkudoksissa että indusoidussa kalvossa. Luonnehdittuja markkereita, jotka käsittävät erilaistumisklusterin 31 (CD31) ja endomusiinin (Emcn), käytetään tyypin H verisuonten havaitsemiseen. Kolorimetrisiä menetelmiä, mukaan lukien Massonin trikromi, Alcian sininen, Alizarin red S, H&E ja Safranin O-Fast green, voidaan myös suorittaa histologisten näkemysten paljastamiseksi indusoidusta kalvosta. Multi-omiikassa kudoksia käytetään paljastamaan uusia kohteita, joita sitten verrataan verisuonten endoteelikasvutekijän (VEGF) ja osteokalsiinin tasoihin. Lisäksi suoritetaan Western blot -analyysi ja reaaliaikainen käänteiskopioijapolymeraasiketjureaktio (RT-PCR) tunnistettujen metaboliittien alavirran säätelyn validoimiseksi.

Laskimoveri (3 ml hepariinia sisältävissä vacutainersissa) kerätään molemmilta ryhmiltä ortopedisen kirurgian osastolta, Chang Gung Memorial Hospital, Taoyuan, Taiwan. Protokolla perustui raporttiin, jossa VEGF tunnistettiin liiton mahdolliseksi biomarkkeriksi IMT:ssä. Otuksen jälkeen verta sentrifugoidaan (1000 rpm, 10 min huoneenlämmössä) 30 minuuttia ja säilytetään miinus 80 asteessa analyysiin asti. Verinäytteet indusoidun kalvon keräämishetkestä valmistetaan multi-omiikka-analyysiä varten systeemisten markkerien tunnistamiseksi tyypin H suonelle tai indusoidulle kalvolle, ja VEGF:ää ja osteokalsiinia käytetään luumassan seerumindikaattoreina. Verinäytteitä kaikista ajankohdista käytetään uuden biomarkkerin tunnistamiseen tyypin H verisuonille ja luun paranemiselle. Mitä tulee metaboliittikohteisiin, kohdennettuja metabolomiikan menetelmiä käytetään niiden tarkistamiseen veressä. Vaiheen I verinäytteiden keräämisen aikapisteet ovat leikkauspäivä, seuraava leikkauspäivä ja 1, 2 ja 4 viikkoa leikkauksen jälkeen. Vaiheen II aikapisteet ovat leikkauspäivä, seuraava leikkauspäivä ja 1, 2, 12 ja 14 viikkoa leikkauksen jälkeen.