二相リン酸カルシウムの骨形成能の組織学的分析

この研究はランダム化対照臨床試験として設計されました。 研究に参加するには、患者は抜歯しやすい歯を少なくとも1本持っており、治癒期間の完了後に歯科インプラントを埋入する必要がある。 抜歯の適応となるのは、慢性根尖突起、慢性歯周病、または縦骨の骨折です。 参加基準は、18歳から60歳までの年齢、身体的および精神的健康に問題がないこと、患者が研究プロトコールを理解していること、患者がインフォームドコンセントに署名していることである。 Wang と Hwang が説明したインプラント補綴療法に対する絶対的禁忌の少なくとも 1 つを有する患者は、研究から除外されます。 他の除外基準には、以下の全身疾患が含まれます：コントロール不良の糖尿病、骨粗鬆症および骨減少症、ビタミンD欠乏症、ビスホスホネート療法、グルココルチコイド療法、甲状腺機能低下症、コントロール不良の心血管疾患（高血圧、冠状動脈疾患、うっ血性心不全）、および以下の局所的要因。タバコ製品の使用（1日あたり最大10本まで）と口腔衛生不良。 妊娠中および授乳中の女性は研究に含まれません。

上述の一般的な健康基準に加えて、患者は少なくとも 1 つの口腔内基準、つまり開窓や裂開などの頬骨欠損の存在を満たさなければなりません。 参加基準を満たし、参加する意思のある患者は、Web インターフェイス (https://www.randomizer.org/) を介してランダムに割り当てられます。

参加者と資料 参加者は口腔外科から募集します。 合計36人の健康な患者が研究に含まれる。 テストの妥当性を分析する際には、テストされた手法の同等性と既存の手法と比較したテストされた手法の非劣性というアプローチが使用されました。 有意水準 α が 0.05、検定力が 80%、予測結果の期待標準偏差が 10、同等限界 d = 10 の場合、研究には少なくとも 36 人の被験者、18 人の被験者を含める必要がありました。グループごとに。

試験グループの合計 18 人の患者に I-BCP (Maxresorb® 注射剤、Botiss GmbH、ベルリン、ドイツ) が投与されます。 この生体材料はペースト状の異種可塑性骨代替材料であり、プラスチックの注射器を使って欠損部に注入されます。 この材料は、60% HA と 40% β-TCP の組成の二相リン酸カルシウムの顆粒を含む水性ゲルで構成されています (粒子サイズは 15 ～ 50 nm)。 対照群の患者にはBX（cerabone®、Botiss GmbH、ベルリン、ドイツ）が投与されます。 この材料は完全に無機であり、100% HA で構成されています。 この研究では、材料は顆粒状（顆粒のサイズは 0.5 ～ 1 mm）で使用され、欠損部に配置する前に生理学的溶液と混合されます。

最初の外科段階と治癒期間 処置の前に、患者には 3% クロルヘキシジン溶液が投与され、口腔内を 1 分間洗浄されます。 その後、局所麻酔 (2% リドカイン®、クロアチア、コプリヴニツァ、ベルポ) が投与され、手術野が滅菌ドレープで覆われます。 全層の粘膜骨膜弁が摘出部位で持ち上げられます。 非侵襲的に抜歯を行うため、抜歯前に多根歯の根をドリルで分離します。 摘出は、肺胞への外傷をできるだけ少なくする非外傷性器具を使用して実行されます。 次に、肺胞を注意深く検査し、掻爬して肉芽を除去し、肺胞内の新たな出血を促進します。 肺胞は、テストグループでは I-BCP で端まで満たされ、コントロールグループでは BX で満たされます。 最終的に、骨移植生体材料は、両方のグループのブタ心膜から得られた吸収性天然コラーゲン膜 (Jason® 膜、Botiss GmbH、ドイツ、ベルリン) で覆われます。 次に、コラーゲン膜が軟組織 (5.0 モノフィラメント) で完全に覆われるように、粘膜骨膜弁を調整して閉じます。 その後、患者は鎮痛剤 (イブプロフェン 400 mg) を処方され、抗生物質 (アモキシシリンとクラブラン酸またはクリンダマイシン) を次の 7 日間服用するよう指示されます。 手術後10日目に抜糸を行います。

骨欠損の再生には 6 か月の期間がかかります。 レントゲン検査に基づいて、適切なインプラントの選択と配置が行われます。

第 2 外科段階 抜歯から 6 か月後、患者は増補領域に歯科インプラント (Ankylos®、Dentsply Sirona、シャーロット、米国) を埋入するために来院します。 患者の準備（消毒液による口腔のすすぎ、局所麻酔、作業領域の無菌カバー）は、最初の外科的処置と同じです。 続いて、全層の皮弁を持ち上げ、トレフィン ドリル (内径 2.5 mm、Ustomed® intrumente、Tuttlingen、ドイツ) を使用して組織学的分析のために増大領域の生検を採取します。 患者の骨の不必要な除去を避けるために、トレフィンドリルの内径は、インプラントベッドを準備するために使用される最終ドリルの内径よりも小さいことを強調することが重要です。 さらに、各生検は、不正確な生検（例えば、生体材料で増強されていない天然の骨のみの生検）の可能性を減らすために、増強された領域の中央部分から採取されます。

組織学的分析 トレフィン ドリルは、4% ホルムアルデヒド溶液が入った密閉されたプラスチック チューブに入れられ、さらなる分析のために組織学研究室に送られます。 組織は 4% ホルムアルデヒド溶液で 2 週間固定されます。 その後、生検材料は、骨の穏やかな脱灰に使用される 25% エチレンジアミン四酢酸 (EDTA) (Decalcifier Soft®、Solvagreen®、カールスルーエ、オーストリア) に保存されます。 脱灰後、組織は組織プロセッサー (MTP、SLEE Medical GmbH、マインツ、ドイツ) で標準プロトコルにさらされます。 続いて、パラフィンブロックの形成が行われます (MPS/P、SLEE Medical GmbH、マインツ、ドイツ)。 回転式ミクロトーム（CUT 4062、SLEE Medical GmbH、マインツ、ドイツ）を使用して、各生検材料から厚さ5μmの連続した6つの切片を調製する。 次に、標本はマッソントリクローム染色とモバットペンタクローム染色で染色されます。 標本の顕微鏡検査は、ビデオカメラ（Axio Imager M2、Zeiss、オーバーコッヘン、ドイツ）と組み合わせた光学顕微鏡（Leica DMRB、Leica Microsystems GmbH、Wetzlar、ドイツ）を使用して行われます。 病理組織学的分析は、移植された生体材料に対する組織反応、つまり線維芽細胞、血管、好中球、単球/マクロファージ、および多核巨細胞 (MGC) の存在を評価します。

標本の組織形態計測処理は、無料の ImageJ ソフトウェア (https://imagej.nih.gov/ij/download.html) を使用して実行されます。 新しい骨の表面、生体材料の表面、および軟組織の表面が標本にマークされます。 次に、標本の表面が測定され、得られたデータから、形成された新しい骨の割合、残っている生体材料の割合、および軟組織の割合が計算されます。

統計分析 カテゴリ変数は、絶対頻度と相対頻度でレポートされます。 カテゴリ変数間の差異は、Fisher-Freeman-Halton 検定で検定されました。

分布の正規性は Shapiro-Wilk 検定で検定されます。 連続データは算術平均と標準偏差で表現されます。 連続変数の差は、Mann-Whitney U 検定 (対応する差と差の 95% 信頼区間) で検定されます。

すべての P 値は両側になります。 有意水準は alpha = 0.05 に設定されました。 IBM SPSS 統計ソフトウェア、バージョン 27.0.1、 分析に使用されます。