Histologisk analyse af osteogent potentiale af bifasisk calciumphosphat

Studiet var designet som et randomiseret kontrolleret klinisk forsøg. For at deltage i undersøgelsen skal patienterne have mindst én tand disponeret for ekstraktion og at få anbragt et tandimplantat efter afslutningen af ​​helingsperioden. Indikationerne for tandudtrækning er: kronisk periapikal proces, kronisk periodontal sygdom eller fraktur af den vertikale knogle. Inklusionskriterierne er: alder mellem 18 og 60 år, intakt fysisk og mental sundhed, patienten skal forstå undersøgelsesprotokollen, patienten skal underskrive et informeret samtykke. Patienter vil blive udelukket fra undersøgelsen, hvis de havde mindst én af de absolutte kontraindikationer til implantatproteseterapi beskrevet af Wang og Hwang. Andre eksklusionskriterier omfattede følgende systemiske sygdomme: ukontrolleret diabetes, osteoporose og osteopeni og D-vitaminmangel, bisphosphonatbehandling, glukokortikoidbehandling, hypothyroidisme, ukontrolleret hjerte-kar-sygdom (hypertension, koronararteriesygdom, kongestiv hjertesvigt) og følgende lokale faktorer: brug af tobaksvarer (op til 10 cigaretter om dagen) og dårlig mundhygiejne. Gravide og ammende kvinder vil ikke inkluderes i undersøgelsen.

Ud over de generelle sundhedskriterier nævnt ovenfor skal patienten opfylde mindst ét ​​intraoralt kriterium, nemlig tilstedeværelsen af ​​en bukkal knogledefekt såsom fenestration eller dehiscens. Patienter, der opfyldte inklusionskriterierne og var villige til at deltage, tildeles tilfældigt via en webgrænseflade (https://www.randomizer.org/).

Deltagere og materialer Deltagerne vil blive rekrutteret fra mundkirurgikontoret. I alt 36 raske patienter vil blive inkluderet i undersøgelsen. Ved analyse af testens validitet blev tilgangen til ækvivalens af de testede metoder og noninferiority af den testede metode sammenlignet med den eksisterende metode anvendt. Med et signifikansniveau α på 0,05, en teststyrke på 80 %, en forventet standardafvigelse af det forudsagte resultat på 10 og en ækvivalensgrænse på d = 10, var det nødvendigt at inkludere mindst 36 forsøgspersoner i undersøgelsen, 18 forsøgspersoner per gruppe.

I alt 18 patienter i testgruppen vil modtage I-BCP (Maxresorb® inject, Botiss GmbH, Berlin, Tyskland). Dette biomateriale er et alloplastisk knogleerstatningsmateriale i form af en pasta, der anbringes i defekten med en plastiksprøjte. Materialet består af en vandig gel indeholdende granulat af bifasisk calciumphosphat i sammensætningen af ​​60 % HA og 40 % β-TCP (partikelstørrelse mellem 15-50 nm). Patienter i kontrolgruppen vil modtage BX (cerabone®, Botiss GmbH, Berlin, Tyskland). Materialet er helt uorganisk og består af 100% HA. Til denne undersøgelse vil materialet blive brugt i granulær form (størrelsen af ​​granulatet er mellem 0,5 og 1 mm), blandet med fysiologisk opløsning før anbringelse i defekten.

Første kirurgiske fase og helingsperiode Før proceduren vil patienten få en 3% klorhexidinopløsning for at skylle mundhulen i et minut. Lokalbedøvelse (2% Lidocaine®, Belupo, Koprivnica, Kroatien) vil derefter blive administreret, og det kirurgiske område vil blive dækket med sterile afdækninger. En mucoperiosteal flap i fuld tykkelse vil blive forhøjet ved ekstraktionsstedet. For at udføre tandudtrækningen atraumatisk, vil rødderne af de multirodede tænder blive adskilt med et bor før ekstraktion. Ekstraktionen vil blive udført med atraumatiske instrumenter, med så lidt traume i alveolen som muligt. Alveolen undersøges derefter omhyggeligt og curettes for at fjerne granuleringer og stimulere frisk blødning i alveolerne. Alveolen vil blive fyldt til kanten med I-BCP i testgruppen og BX i kontrolgruppen. Til sidst er knogletransplantationsbiomateriale dækket med en resorberbar naturlig kollagenmembran opnået fra porcint hjertesækken (Jason®-membran, Botiss GmbH, Berlin, Tyskland) i begge grupper. Den mucoperiosteale flap vil derefter blive justeret og lukket, så kollagenmembranen var fuldstændig dækket af blødt væv (5,0 monofilament). Patienten vil derefter få ordineret et smertestillende middel (400 mg ibuprofen) og instrueret i at tage antibiotika (amoxicillin med clavulansyre eller clindamycin) i de næste 7 dage. På den 10. dag efter operationen fjernes suturerne.

En 6-måneders periode med regenerering af knogledefekten vil følge. Baseret på den røntgenundersøgelse vil valget og placeringen af ​​det passende implantat blive udført.

Anden kirurgiske fase Seks måneder efter ekstraktion kommer patienter til kontoret for at placere et tandimplantat (Ankylos®, Dentsply Sirona, Charlotte, USA) i det forstørrede område. Forberedelsen af ​​patienten (skylning af mundhulen med en antiseptisk opløsning, lokalbedøvelse, steril dækning af arbejdsområdet) er den samme som ved den første kirurgiske procedure. Efterfølgende hæves en klap i fuld tykkelse, og der tages en biopsi af det forstørrede område til histologisk analyse ved hjælp af et trefinbor (2,5 mm indvendig diameter; Ustomed® intrumente, Tuttlingen, Tyskland). Det er vigtigt at understrege, at den indre diameter af trephine-boret er mindre end den af ​​det sidste bor, der blev brugt til at forberede implantatet for at undgå unødvendig fjernelse af patientens knogle. Derudover vil hver biopsi blive taget fra den centrale del af det forstærkede område for at reducere muligheden for en forkert biopsi (f.eks. biopsi af kun den oprindelige knogle, der ikke var forstærket med biomateriale).

Histologisk analyse Trefinboret placeres i et hermetisk lukket plastrør indeholdende en 4% formaldehydopløsning og sendes til histologilaboratoriet for yderligere analyse. Vævet fikseres i 4% formaldehydopløsning i to uger. Efterfølgende vil biopsierne blive opbevaret i 25 % ethylendiamintetraeddikesyre (EDTA) (Decalcifier soft®, Solvagreen®, Karlsruhe, Østrig), som bruges til skånsom afkalkning af knogler. Efter afkalkning vil vævet blive underkastet en standardprotokol i en vævsprocessor (MTP, SLEE medical GmbH, Mainz, Tyskland). Dette vil blive efterfulgt af dannelsen af ​​paraffinblokke (MPS/P, SLEE medical GmbH, Mainz, Tyskland). Seks på hinanden følgende sektioner af 5 μm tykkelse vil blive forberedt fra hver biopsi ved hjælp af en roterende mikrotom (CUT 4062, SLEE medical GmbH, Mainz, Tyskland). Prøverne vil derefter blive farvet med Masson trichrome-farve og Movat pentachrome-farve. Mikroskopi af præparaterne vil blive udført ved hjælp af et lysmikroskop (Leica DMRB, Leica Microsystems GmbH, Wetzlar, Tyskland) i forbindelse med et videokamera (Axio Imager M2, Zeiss, Oberkochen, Tyskland). Patohistologisk analyse vil evaluere vævsreaktionen på det implanterede biomateriale, dvs. tilstedeværelsen af ​​fibroblaster, blodkar, neutrofiler, monocytter/makrofager og multinukleerede kæmpeceller (MGC).

Histomorfometrisk behandling af prøverne vil blive udført ved hjælp af den gratis ImageJ-software (https://imagej.nih.gov/ij/download.html). Overfladen af ​​den nye knogle, overfladen af ​​biomaterialet og overfladen af ​​det bløde væv vil blive markeret på prøverne. Prøvens overflade vil derefter blive målt, og følgende vil blive beregnet ud fra de opnåede data: procentdel af ny dannet knogle, procentdel af resterende biomateriale og procentdel af blødt væv.

Statistisk analyse Kategoriske variable vil blive rapporteret med absolutte og relative frekvenser. Forskelle mellem kategoriske variable blev testet med Fisher-Freeman-Halton-testen.

Normalitet af distribution vil blive testet med Shapiro-Wilk testen. Kontinuerlige data vil blive beskrevet ved det aritmetiske middelværdi og standardafvigelse. Forskelle i kontinuerlige variable vil blive testet med Mann-Whitney U-testen (med tilsvarende forskel og 95 % konfidensinterval for forskel).

Alle P-værdier vil være tosidede. Signifikansniveauet blev sat til alfa = 0,05. IBM SPSS Statistical software, version 27.0.1, vil blive brugt til analysen.