Análisis histológico del potencial osteogénico del fosfato de calcio bifásico

El estudio fue diseñado como un ensayo clínico controlado aleatorio. Para participar en el estudio, los pacientes deben tener al menos un diente predispuesto a la extracción y que se les coloque un implante dental una vez finalizado el período de curación. Las indicaciones para la extracción dental son: proceso periapical crónico, enfermedad periodontal crónica o fractura del hueso vertical. Los criterios de inclusión son: edad entre 18 y 60 años, salud física y mental intacta, el paciente debe comprender el protocolo del estudio, el paciente debe firmar un consentimiento informado. Los pacientes serán excluidos del estudio si tenían al menos una de las contraindicaciones absolutas para implantar terapia protésica descritas por Wang y Hwang. Otros criterios de exclusión incluyeron las siguientes enfermedades sistémicas: diabetes no controlada, osteoporosis y osteopenia, y deficiencia de vitamina D, terapia con bifosfonatos, terapia con glucocorticoides, hipotiroidismo, enfermedades cardiovasculares no controladas (hipertensión, enfermedad de las arterias coronarias, insuficiencia cardíaca congestiva) y los siguientes factores locales: uso de productos de tabaco (hasta 10 cigarrillos por día) y mala higiene bucal. Las mujeres embarazadas y lactantes no se incluirán en el estudio.

Además de los criterios de salud generales mencionados anteriormente, el paciente debe cumplir al menos un criterio intraoral, a saber, la presencia de un defecto óseo bucal como fenestración o dehiscencia. Los pacientes que cumplieron con los criterios de inclusión y estaban dispuestos a participar se asignan aleatoriamente a través de una interfaz web (https://www.randomizer.org/).

Participantes y materiales Los participantes serán reclutados en el consultorio de cirugía oral. Se incluirán en el estudio un total de 36 pacientes sanos. Al analizar la validez de la prueba, se utilizó el enfoque de equivalencia de los métodos probados y no inferioridad del método probado en comparación con el método existente. Con un nivel de significancia α de 0,05, una potencia de prueba del 80%, una desviación estándar esperada del resultado previsto de 10 y un límite de equivalencia de d = 10, fue necesario incluir al menos 36 sujetos en el estudio, 18 sujetos por grupo.

Un total de 18 pacientes del grupo de prueba recibirán I-BCP (Maxresorb® inject, Botiss GmbH, Berlín, Alemania). Este biomaterial es un material sustituto óseo aloplástico en forma de pasta que se coloca en el defecto con una jeringa de plástico. El material consiste en un gel acuoso que contiene gránulos de fosfato cálcico bifásico en una composición de 60% HA y 40% β-TCP (tamaño de partícula entre 15-50 nm). Los pacientes del grupo de control recibirán BX (cerabone®, Botiss GmbH, Berlín, Alemania). El material es completamente inorgánico y está compuesto 100% de HA. Para este estudio, el material se utilizará en forma granular (el tamaño de los gránulos está entre 0,5 y 1 mm), mezclado con solución fisiológica antes de su colocación en el defecto.

Primera fase quirúrgica y período de cicatrización Antes del procedimiento, se administrará al paciente una solución de clorhexidina al 3% para enjuagar la cavidad bucal durante un minuto. Luego se administrará anestesia local (Lidocaine® al 2%, Belupo, Koprivnica, Croacia) y se cubrirá el campo quirúrgico con paños esterilizados. Se elevará un colgajo mucoperióstico de espesor total en el sitio de extracción. Para realizar la extracción dental de forma atraumática, se separarán las raíces de los dientes multirradiculares con un taladro antes de la extracción. La extracción se realizará con instrumentos atraumáticos, con el menor traumatismo posible en el alvéolo. Luego se examina cuidadosamente el alvéolo y se curetea para eliminar las granulaciones y estimular un nuevo sangrado en los alvéolos. El alvéolo se llenará hasta el borde con I-BCP en el grupo de prueba y BX en el grupo de control. Al final, el biomaterial de injerto óseo se cubre con una membrana de colágeno nativo reabsorbible obtenida de pericardio porcino (membrana Jason®, Botiss GmbH, Berlín, Alemania) en ambos grupos. Luego, se ajustará y cerrará el colgajo mucoperióstico de modo que la membrana de colágeno quede completamente cubierta con tejido blando (monofilamento 5.0). Luego se le recetará al paciente un analgésico (400 mg de ibuprofeno) y se le indicará que tome antibióticos (amoxicilina con ácido clavulánico o clindamicina) durante los próximos 7 días. Al décimo día después de la cirugía, se retiran las suturas.

Seguirá un período de 6 meses de regeneración del defecto óseo. En base al examen radiográfico se realizará la selección y posicionamiento del implante adecuado.

Segunda fase quirúrgica Seis meses después de la extracción, los pacientes acuden a consulta para la colocación de un implante dental (Ankylos®, Dentsply Sirona, Charlotte, EE. UU.) en la zona aumentada. La preparación del paciente (enjuague de la cavidad bucal con una solución antiséptica, anestesia local, cobertura estéril del área de trabajo) es la misma que para el primer procedimiento quirúrgico. Posteriormente, se eleva un colgajo de espesor total y se toma una biopsia del área aumentada para análisis histológico utilizando un taladro trépano (2,5 mm de diámetro interior; Ustomed® intrumente, Tuttlingen, Alemania). Es importante enfatizar que el diámetro interno de la fresa trépana es menor que el de la fresa final utilizada para preparar el lecho del implante para evitar la extracción innecesaria de hueso del paciente. Además, cada biopsia se tomará de la parte central del área aumentada para reducir la posibilidad de una biopsia incorrecta (p. ej., biopsia únicamente del hueso nativo que no se aumentó con biomaterial).

Análisis histológico La fresa de trépano se colocará en un tubo de plástico herméticamente cerrado que contiene una solución de formaldehído al 4% y se enviará al laboratorio de histología para su posterior análisis. El tejido se fijará en una solución de formaldehído al 4% durante dos semanas. Posteriormente, las biopsias se almacenarán en ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) al 25% (Decalcifier soft®, Solvagreen®, Karlsruhe, Austria), que se utiliza para la descalcificación suave del hueso. Después de la descalcificación, el tejido se someterá a un protocolo estándar en un procesador de tejidos (MTP, SLEE medical GmbH, Mainz, Alemania). A continuación se forman bloques de parafina (MPS/P, SLEE medical GmbH, Mainz, Alemania). Se prepararán seis secciones consecutivas de 5 μm de espesor de cada biopsia utilizando un micrótomo rotatorio (CUT 4062, SLEE medical GmbH, Mainz, Alemania). Luego, las muestras se teñirán con tinción tricrómica de Masson y tinción pentacrome Movat. La microscopía de las preparaciones se realizará utilizando un microscopio óptico (Leica DMRB, Leica Microsystems GmbH, Wetzlar, Alemania) junto con una cámara de vídeo (Axio Imager M2, Zeiss, Oberkochen, Alemania). El análisis patohistológico evaluará la respuesta del tejido al biomaterial implantado, es decir, la presencia de fibroblastos, vasos sanguíneos, neutrófilos, monocitos/macrófagos y células gigantes multinucleadas (MGC).

El procesamiento histomorfométrico de las muestras se realizará utilizando el software gratuito ImageJ (https://imagej.nih.gov/ij/download.html). En las muestras se marcarán la superficie del hueso nuevo, la superficie del biomaterial y la superficie del tejido blando. Luego se medirá la superficie de la muestra y a partir de los datos obtenidos se calculará lo siguiente: porcentaje de hueso nuevo formado, porcentaje de biomaterial restante y porcentaje de tejido blando.

Análisis estadístico Las variables categóricas se informarán con frecuencias absolutas y relativas. Las diferencias entre variables categóricas se probaron con la prueba de Fisher-Freeman-Halton.

La normalidad de la distribución se probará con la prueba de Shapiro-Wilk. Los datos continuos se describirán mediante la media aritmética y la desviación estándar. Las diferencias en variables continuas se probarán con la prueba U de Mann-Whitney (con la diferencia correspondiente y el intervalo de confianza de diferencia del 95%).

Todos los valores de P serán bilaterales. El nivel de significancia se fijó en alfa = 0,05. Software estadístico IBM SPSS, versión 27.0.1, se utilizará para el análisis.