Analisi istologica del potenziale osteogenico del fosfato di calcio bifasico

Lo studio è stato progettato come uno studio clinico randomizzato e controllato. Per partecipare allo studio, i pazienti devono avere almeno un dente predisposto all'estrazione e inserire un impianto dentale dopo il completamento del periodo di guarigione. Le indicazioni per l’estrazione del dente sono: processo periapicale cronico, malattia parodontale cronica o frattura dell’osso verticale. I criteri di inclusione sono: età compresa tra 18 e 60 anni, salute fisica e mentale intatta, il paziente deve comprendere il protocollo dello studio, il paziente deve firmare un consenso informato. I pazienti verranno esclusi dallo studio se presentavano almeno una delle controindicazioni assolute alla terapia implantoprotesica descritte da Wang e Hwang. Altri criteri di esclusione includevano le seguenti malattie sistemiche: diabete non controllato, osteoporosi e osteopenia e carenza di vitamina D, terapia con bifosfonati, terapia con glucocorticoidi, ipotiroidismo, malattie cardiovascolari non controllate (ipertensione, malattia coronarica, insufficienza cardiaca congestizia) e i seguenti fattori locali: uso di prodotti del tabacco (fino a 10 sigarette al giorno) e scarsa igiene orale. Le donne in gravidanza e in allattamento non saranno incluse nello studio.

Oltre ai criteri di salute generali sopra menzionati, il paziente deve soddisfare almeno un criterio intraorale, vale a dire la presenza di un difetto osseo buccale come fenestrazione o deiscenza. I pazienti che soddisfano i criteri di inclusione e sono disposti a partecipare vengono assegnati in modo casuale tramite un'interfaccia web (https://www.randomizer.org/).

Partecipanti e materiali I partecipanti verranno reclutati dall'ufficio di chirurgia orale. Nello studio saranno inclusi un totale di 36 pazienti sani. Nell'analizzare la validità del test, è stato utilizzato l'approccio dell'equivalenza dei metodi testati e della non inferiorità del metodo testato rispetto al metodo esistente. Con un livello di significatività α di 0,05, una potenza del test dell'80%, una deviazione standard attesa del risultato previsto di 10 e un limite di equivalenza di d = 10, è stato necessario includere nello studio almeno 36 soggetti, 18 soggetti per gruppo.

Un totale di 18 pazienti nel gruppo di prova riceveranno I-BCP (Maxresorb® inject, Botiss GmbH, Berlino, Germania). Questo biomateriale è un materiale sostitutivo osseo alloplastico sotto forma di pasta che viene inserita nel difetto con una siringa di plastica. Il materiale è costituito da un gel acquoso contenente granuli di fosfato di calcio bifasico nella composizione di 60% HA e 40% β-TCP (dimensione delle particelle compresa tra 15-50 nm). I pazienti del gruppo di controllo riceveranno BX (cerabone®, Botiss GmbH, Berlino, Germania). Il materiale è completamente inorganico ed è composto al 100% da HA. Per questo studio, il materiale verrà utilizzato in forma granulare (la dimensione dei granuli è compresa tra 0,5 e 1 mm), miscelato con soluzione fisiologica prima del posizionamento nel difetto.

Prima fase chirurgica e periodo di guarigione Prima dell'intervento, al paziente verrà somministrata una soluzione di clorexidina al 3% per sciacquare la cavità orale per un minuto. Verrà quindi somministrata l'anestesia locale (2% Lidocaina®, Belupo, Koprivnica, Croazia) e il campo chirurgico sarà coperto con teli sterili. Nel sito di estrazione verrà sollevato un lembo mucoperiostale a tutto spessore. Per eseguire l’estrazione del dente in modo atraumatico, le radici dei denti multiradici verranno separate con un trapano prima dell’estrazione. L'estrazione verrà eseguita con strumenti atraumatici, con il minor trauma possibile all'alveolo. L'alveolo viene quindi attentamente esaminato e curettato per rimuovere le granulazioni e stimolare un nuovo sanguinamento negli alveoli. L'alveolo verrà riempito fino al bordo con I-BCP nel gruppo test e BX nel gruppo di controllo. Alla fine, il biomateriale dell'innesto osseo viene ricoperto con una membrana di collagene nativo riassorbibile ottenuta da pericardio suino (membrana Jason®, Botiss GmbH, Berlino, Germania) in entrambi i gruppi. Il lembo mucoperiosteo verrà quindi aggiustato e chiuso in modo che la membrana di collagene sia completamente ricoperta da tessuto molle (monofilamento 5.0). Al paziente verrà quindi prescritto un analgesico (400 mg di ibuprofene) e gli verrà chiesto di assumere antibiotici (amoxicillina con acido clavulanico o clindamicina) per i successivi 7 giorni. Il decimo giorno dopo l'intervento, i punti di sutura vengono rimossi.

Seguirà un periodo di 6 mesi di rigenerazione del difetto osseo. Sulla base dell'esame radiografico verrà eseguita la selezione e il posizionamento dell'impianto appropriato.

Seconda fase chirurgica Sei mesi dopo l'estrazione, i pazienti si recano in studio per il posizionamento di un impianto dentale (Ankylos®, Dentsply Sirona, Charlotte, USA) nell'area aumentata. La preparazione del paziente (risciacquo del cavo orale con soluzione antisettica, anestesia locale, copertura sterile dell'area di lavoro) è la stessa del primo intervento chirurgico. Successivamente, viene sollevato un lembo a tutto spessore e viene eseguita una biopsia dell'area aumentata per l'analisi istologica utilizzando una fresa trapanatrice (diametro interno 2,5 mm; Ustomed® intrumente, Tuttlingen, Germania). È importante sottolineare che il diametro interno della fresa trephine è inferiore a quello della fresa finale utilizzata per preparare il letto implantare per evitare inutili asportazioni dell'osso del paziente. Inoltre, ogni biopsia verrà prelevata dalla parte centrale dell'area aumentata per ridurre la possibilità di una biopsia errata (ad esempio, biopsia solo dell'osso nativo che non è stato aumentato con biomateriale).

Analisi istologica La fresa trephine verrà posta in un tubo di plastica sigillato ermeticamente contenente una soluzione di formaldeide al 4% e inviata al laboratorio di istologia per ulteriori analisi. Il tessuto verrà fissato in una soluzione di formaldeide al 4% per due settimane. Successivamente, le biopsie verranno conservate in acido etilendiamminotetraacetico (EDTA) al 25% (Decalcifier soft®, Solvagreen®, Karlsruhe, Austria), che viene utilizzato per la decalcificazione delicata dell'osso. Dopo la decalcificazione, il tessuto sarà sottoposto ad un protocollo standard in un processatore di tessuti (MTP, SLEE medical GmbH, Magonza, Germania). Successivamente si procederà alla formazione di blocchi di paraffina (MPS/P, SLEE medical GmbH, Magonza, Germania). Da ciascuna biopsia verranno preparate sei sezioni consecutive di 5 μm di spessore utilizzando un microtomo rotante (CUT 4062, SLEE medical GmbH, Magonza, Germania). I campioni verranno poi colorati con la colorazione tricromica di Masson e la colorazione pentacromica di Movat. La microscopia dei preparati verrà eseguita utilizzando un microscopio ottico (Leica DMRB, Leica Microsystems GmbH, Wetzlar, Germania) in combinazione con una videocamera (Axio Imager M2, Zeiss, Oberkochen, Germania). L'analisi patoistologica valuterà la risposta dei tessuti al biomateriale impiantato, ovvero la presenza di fibroblasti, vasi sanguigni, neutrofili, monociti/macrofagi e cellule giganti multinucleate (MGC).

L'elaborazione istomorfometrica dei campioni verrà eseguita utilizzando il software gratuito ImageJ (https://imagej.nih.gov/ij/download.html). Sui campioni verranno marcate la superficie del nuovo osso, la superficie del biomateriale e la superficie dei tessuti molli. Verrà quindi misurata la superficie del campione e, in base ai dati ottenuti, verrà calcolata la percentuale di nuovo osso formato, la percentuale di biomateriale rimanente e la percentuale di tessuto molle.

Analisi statistica Le variabili categoriali saranno riportate con frequenze assolute e relative. Le differenze tra le variabili categoriali sono state testate con il test di Fisher-Freeman-Halton.

La normalità della distribuzione sarà valutata con il test di Shapiro-Wilk. I dati continui saranno descritti dalla media aritmetica e dalla deviazione standard. Le differenze nelle variabili continue saranno testate con il test U di Mann-Whitney (con differenza corrispondente e intervallo di confidenza della differenza al 95%).

Tutti i valori P saranno bilaterali. Il livello di significatività è stato fissato ad alfa = 0,05. Software IBM SPSS Statistical, versione 27.0.1, verranno utilizzati per l'analisi.