Análise Histológica do Potencial Osteogênico do Fosfato de Cálcio Bifásico

O estudo foi desenhado como um ensaio clínico randomizado controlado. Para participar do estudo, os pacientes precisam ter pelo menos um dente predisposto à extração e ter um implante dentário colocado após o término do período de cicatrização. As indicações para extração dentária são: processo periapical crônico, doença periodontal crônica ou fratura do osso vertical. Os critérios de inclusão são: idade entre 18 e 60 anos, saúde física e mental intacta, o paciente deve compreender o protocolo do estudo, o paciente deve assinar o termo de consentimento livre e esclarecido. Os pacientes serão excluídos do estudo se tivessem pelo menos uma das contra-indicações absolutas para implantar terapia protética descrita por Wang e Hwang. Outros critérios de exclusão incluíram as seguintes doenças sistêmicas: diabetes não controlada, osteoporose e osteopenia e deficiência de vitamina D, terapia com bifosfonatos, terapia com glicocorticóides, hipotireoidismo, doença cardiovascular não controlada (hipertensão, doença arterial coronariana, insuficiência cardíaca congestiva) e os seguintes fatores locais: uso de produtos de tabaco (até 10 cigarros por dia) e má higiene bucal. Mulheres grávidas e lactantes não serão incluídas no estudo.

Além dos critérios gerais de saúde acima mencionados, o paciente deve cumprir pelo menos um critério intraoral, nomeadamente a presença de um defeito ósseo bucal como fenestração ou deiscência. Os pacientes que atenderam aos critérios de inclusão e desejaram participar são designados aleatoriamente por meio de uma interface web (https://www.randomizer.org/).

Participantes e materiais Os participantes serão recrutados no consultório de cirurgia oral. Um total de 36 pacientes saudáveis ​​serão incluídos no estudo. Na análise da validade do teste, foi utilizada a abordagem de equivalência dos métodos testados e não inferioridade do método testado em comparação com o método existente. Com nível de significância α de 0,05, poder de teste de 80%, desvio padrão esperado do resultado previsto de 10 e limite de equivalência d = 10, foi necessário incluir pelo menos 36 sujeitos no estudo, sendo 18 sujeitos por grupo.

Um total de 18 pacientes no grupo de teste receberão I-BCP (Maxresorb® inject, Botiss GmbH, Berlim, Alemanha). Este biomaterial é um substituto ósseo aloplástico na forma de uma pasta que é colocada no defeito com uma seringa plástica. O material consiste em um gel aquoso contendo grânulos de fosfato de cálcio bifásico na composição de 60% de HA e 40% de β-TCP (tamanho de partícula entre 15-50 nm). Os pacientes do grupo controle receberão BX (cerabone®, Botiss GmbH, Berlim, Alemanha). O material é totalmente inorgânico e consiste 100% em HA. Para este estudo, o material será utilizado na forma granular (o tamanho dos grânulos está entre 0,5 e 1 mm), misturado com solução fisiológica antes da colocação no defeito.

Primeira fase cirúrgica e período de cicatrização Antes do procedimento, o paciente receberá solução de clorexidina 3% para enxaguar a cavidade oral por um minuto. Anestesia local (Lidocaína® 2%, Belupo, Koprivnica, Croácia) será então administrada e o campo cirúrgico será coberto com campos estéreis. Um retalho mucoperiosteal de espessura total será elevado no local da extração. Para realizar a extração dentária de forma atraumática, as raízes dos dentes multirradiculares serão separadas com uma broca antes da extração. A extração será realizada com instrumentos atraumáticos, com o menor trauma possível ao alvéolo. O alvéolo é então cuidadosamente examinado e curetado para remover granulações e estimular sangramento recente nos alvéolos. O alvéolo será preenchido até a borda com I-BCP no grupo teste e BX no grupo controle. Ao final, o biomaterial de enxerto ósseo é coberto por uma membrana de colágeno nativo reabsorvível obtida de pericárdio suíno (membrana Jason®, Botiss GmbH, Berlim, Alemanha) em ambos os grupos. O retalho mucoperiosteal será então ajustado e fechado de forma que a membrana de colágeno fique completamente recoberta por tecido mole (monofilamento 5.0). O paciente receberá então prescrição de analgésico (400 mg de ibuprofeno) e orientação para tomar antibióticos (amoxicilina com ácido clavulânico ou clindamicina) pelos próximos 7 dias. No 10º dia após a cirurgia, as suturas são retiradas.

Seguir-se-á um período de 6 meses de regeneração do defeito ósseo. Com base no exame radiográfico será realizada a seleção e posicionamento do implante adequado.

Segunda fase cirúrgica Seis meses após a extração, os pacientes chegam ao consultório para colocação de implante dentário (Ankylos®, Dentsply Sirona, Charlotte, EUA) na área aumentada. O preparo do paciente (lavagem da cavidade oral com solução antisséptica, anestesia local, cobertura estéril da área de trabalho) é o mesmo do primeiro procedimento cirúrgico. Posteriormente, um retalho de espessura total é elevado e uma biópsia da área aumentada é realizada para análise histológica com broca trefina (2,5 mm de diâmetro interno; Ustomed® intrumente, Tuttlingen, Alemanha). É importante ressaltar que o diâmetro interno da broca trefina é menor que o da broca final utilizada para preparar o leito do implante para evitar remoção desnecessária do osso do paciente. Além disso, cada biópsia será retirada da parte central da área aumentada para reduzir a possibilidade de uma biópsia incorreta (por exemplo, biópsia apenas do osso nativo que não foi aumentado com biomaterial).

Análise histológica A broca trefina será colocada em um tubo plástico hermeticamente fechado contendo solução de formaldeído a 4% e enviada ao laboratório de histologia para posterior análise. O tecido será fixado em solução de formaldeído a 4% por duas semanas. Posteriormente, as biópsias serão armazenadas em ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) 25% (Decalcifier soft®, Solvagreen®, Karlsruhe, Áustria), que é usado para descalcificação suave do osso. Após a descalcificação, o tecido será submetido a um protocolo padrão em processador de tecidos (MTP, SLEE medical GmbH, Mainz, Alemanha). Isto será seguido pela formação de blocos de parafina (MPS/P, SLEE medical GmbH, Mainz, Alemanha). Seis seções consecutivas de 5 μm de espessura serão preparadas a partir de cada biópsia usando um micrótomo rotativo (CUT 4062, SLEE medical GmbH, Mainz, Alemanha). As amostras serão então coradas com tricrômico de Masson e pentacromo de Movat. A microscopia das preparações será realizada utilizando microscópio de luz (Leica DMRB, Leica Microsystems GmbH, Wetzlar, Alemanha) em conjunto com uma câmera de vídeo (Axio Imager M2, Zeiss, Oberkochen, Alemanha). A análise histopatológica avaliará a resposta tecidual ao biomaterial implantado, ou seja, a presença de fibroblastos, vasos sanguíneos, neutrófilos, monócitos/macrófagos e células gigantes multinucleadas (MGC).

O processamento histomorfométrico dos espécimes será realizado utilizando o software gratuito ImageJ (https://imagej.nih.gov/ij/download.html). A superfície do novo osso, a superfície do biomaterial e a superfície do tecido mole serão marcadas nas amostras. A superfície da amostra será então medida e será calculado a partir dos dados obtidos: porcentagem de osso novo formado, porcentagem de biomaterial remanescente e porcentagem de tecido mole.

Análise estatística As variáveis ​​​​categóricas serão relatadas com frequências absolutas e relativas. As diferenças entre variáveis ​​categóricas foram testadas com o teste de Fisher-Freeman-Halton.

A normalidade da distribuição será testada com o teste de Shapiro-Wilk. Os dados contínuos serão descritos pela média aritmética e desvio padrão. As diferenças nas variáveis ​​contínuas serão testadas com o teste U de Mann-Whitney (com diferença correspondente e intervalo de confiança de 95% de diferença).

Todos os valores de P serão bilaterais. O nível de significância foi estabelecido em alfa = 0,05. Software estatístico IBM SPSS, versão 27.0.1, será usado para a análise.