Гистологический анализ остеогенного потенциала двухфазного фосфата кальция

Исследование было спроектировано как рандомизированное контролируемое клиническое исследование. Для участия в исследовании пациентам необходимо иметь хотя бы один зуб, предрасположенный к удалению, и установить дентальный имплантат после завершения периода заживления. Показаниями к удалению зуба являются: хронический периапикальный процесс, хронический пародонтит или перелом вертикальной кости. Критерии включения: возраст от 18 до 60 лет, неповрежденное физическое и психическое здоровье, пациент должен понимать протокол исследования, пациент должен подписать информированное согласие. Пациенты будут исключены из исследования, если у них было хотя бы одно из абсолютных противопоказаний к имплантационной ортопедической терапии, описанных Вангом и Хвангом. Другие критерии исключения включали следующие системные заболевания: неконтролируемый диабет, остеопороз и остеопения, дефицит витамина D, терапия бисфосфонатами, терапия глюкокортикоидами, гипотиреоз, неконтролируемые сердечно-сосудистые заболевания (гипертония, ишемическая болезнь сердца, застойная сердечная недостаточность) и следующие местные факторы: употребление табачных изделий (до 10 сигарет в день) и плохая гигиена полости рта. Беременные и кормящие женщины не будут включены в исследование.

В дополнение к общим критериям здоровья, упомянутым выше, пациент должен соответствовать по крайней мере одному внутриротовому критерию, а именно наличию дефекта щечной кости, такого как фенестрация или расхождение. Пациенты, соответствующие критериям включения и желающие участвовать, распределяются случайным образом через веб-интерфейс (https://www.randomizer.org/).

Участники и материалы Участники будут набраны из кабинета челюстно-лицевой хирургии. Всего в исследование будут включены 36 здоровых пациентов. При анализе валидности теста использовался подход эквивалентности тестируемых методов и не меньшей эффективности тестируемого метода по сравнению с существующим методом. При уровне значимости α 0,05, мощности теста 80%, ожидаемом стандартном отклонении прогнозируемого результата 10 и пределе эквивалентности d = 10 необходимо было включить в исследование не менее 36 испытуемых, 18 испытуемых. за группу.

Всего 18 пациентов в тестовой группе будут получать I-BCP (инъекция Maxresorb®, Botiss GmbH, Берлин, Германия). Этот биоматериал представляет собой аллопластический костнозамещающий материал в виде пасты, которую вводят в дефект пластиковым шприцем. Материал состоит из водного геля, содержащего гранулы двухфазного фосфата кальция в составе 60% ГК и 40% β-ТКФ (размер частиц 15-50 нм). Пациенты контрольной группы будут получать BX (церабон®, Botiss GmbH, Берлин, Германия). Материал полностью неорганический и состоит на 100% из ГК. Для данного исследования материал будет использоваться в гранулированной форме (размер гранул от 0,5 до 1 мм), смешанный с физиологическим раствором перед помещением в дефект.

Первый этап хирургического вмешательства и период заживления. Перед процедурой пациенту вводят 3% раствор хлоргексидина для полоскания полости рта в течение одной минуты. Затем будет проведена местная анестезия (2% Лидокаин®, Белупо, Копривница, Хорватия), и операционное поле будет закрыто стерильными простынями. В месте удаления приподнимается полнослойный слизисто-надкостничный лоскут. Чтобы удаление зуба было атравматичным, перед удалением корни многокорневых зубов отделяют бормашиной. Удаление будет проводиться атравматичными инструментами с минимальной травмой альвеолы. Затем альвеолы ​​тщательно осматривают и выскабливают, чтобы удалить грануляции и стимулировать свежее кровотечение в альвеолах. Альвеола будет заполнена до края I-BCP в тестовой группе и BX в контрольной группе. В конце биоматериал для костной пластики покрывали резорбируемой нативной коллагеновой мембраной, полученной из перикарда свиньи (мембрана Jason®, Botiss GmbH, Берлин, Германия) в обеих группах. Затем слизисто-надкостничный лоскут корректируют и закрывают так, чтобы коллагеновая мембрана была полностью покрыта мягкой тканью (монофиламент 5,0). Затем пациенту назначат анальгетик (400 мг ибупрофена) и проинструктируют принимать антибиотики (амоксициллин с клавулановой кислотой или клиндамицин) в течение следующих 7 дней. На 10-е сутки после операции швы снимают.

Последует 6-месячный период регенерации костного дефекта. На основании рентгенологического исследования будет выполнен выбор и установка подходящего имплантата.

Второй этап хирургического вмешательства. Через шесть месяцев после удаления пациенты приходят в кабинет для установки дентального имплантата (Ankylos®, Dentsply Sirona, Шарлотта, США) в увеличенную область. Подготовка больного (полоскание полости рта антисептическим раствором, местное обезболивание, стерильное накрытие рабочей зоны) такая же, как и к первому хирургическому вмешательству. Затем приподнимают полнослойный лоскут и берут биопсию увеличенной области для гистологического анализа с помощью трепановой дрели (внутренний диаметр 2,5 мм; Ustomed® intrumente, Туттлинген, Германия). Важно подчеркнуть, что внутренний диаметр трепанационного сверла меньше, чем у последнего сверла, используемого для подготовки ложа имплантата, чтобы избежать ненужного удаления кости пациента. Кроме того, каждая биопсия будет взята из центральной части аугментированной области, чтобы уменьшить вероятность неправильной биопсии (например, биопсия только нативной кости, не аугментированной биоматериалом).

Гистологический анализ Трепановую дрель помещают в герметично закрытую пластиковую пробирку, содержащую 4% раствор формальдегида, и отправляют в гистологическую лабораторию для дальнейшего анализа. Ткань фиксируют в 4% растворе формальдегида на две недели. Впоследствии биопсии будут храниться в 25% этилендиаминтетрауксусной кислоте (ЭДТА) (Decalcifier soft®, Solvagreen®, Карлсруэ, Австрия), которая используется для щадящей декальцинации кости. После декальцинации ткань будет подвергнута стандартному протоколу в процессоре тканей (MTP, SLEE Medical GmbH, Майнц, Германия). За этим последует образование парафиновых блоков (MPS/P, SLEE Medical GmbH, Майнц, Германия). Из каждой биопсии будут приготовлены шесть последовательных срезов толщиной 5 мкм с использованием ротационного микротома (CUT 4062, SLEE Medical GmbH, Майнц, Германия). Затем образцы окрашивают трихромным красителем Массона и пентахромным красителем Мовата. Микроскопию препаратов будут проводить с использованием светового микроскопа (Leica DMRB, Leica Microsystems GmbH, Вецлар, Германия) в сочетании с видеокамерой (Axio Imager M2, Zeiss, Оберкохен, Германия). Патогистологический анализ позволит оценить реакцию ткани на имплантированный биоматериал, т. е. наличие фибробластов, кровеносных сосудов, нейтрофилов, моноцитов/макрофагов и многоядерных гигантских клеток (МГК).

Гистоморфометрическая обработка образцов будет проводиться с использованием бесплатного программного обеспечения ImageJ (https://imagej.nih.gov/ij/download.html). На образцах отмечают поверхность новой кости, поверхность биоматериала и поверхность мягких тканей. Затем будет измерена поверхность образца, и на основе полученных данных будут рассчитаны следующие показатели: процент образовавшейся новой кости, процент оставшегося биоматериала и процент мягких тканей.

Статистический анализ Категориальные переменные будут сообщаться с абсолютной и относительной частотой. Различия между категориальными переменными проверялись с помощью теста Фишера-Фримена-Халтона.

Нормальность распределения будет проверена с помощью теста Шапиро-Уилка. Непрерывные данные будут описываться средним арифметическим и стандартным отклонением. Различия в непрерывных переменных будут проверяться с помощью U-критерия Манна-Уитни (с соответствующей разницей и 95% доверительным интервалом разницы).

Все значения P будут двусторонними. Уровень значимости был установлен на уровне альфа = 0,05. Статистическое программное обеспечение IBM SPSS, версия 27.0.1, будет использоваться для анализа.