インジケーターアミノ酸酸化法（IAAO）を用いた生殖年齢女性におけるテンペチップスのメチオニン代謝利用性 (IAAO)

事前研究評価では、参加者は間接熱量測定法を用いて体重、身長、安静時代謝量（REE）を測定する必要があります。

研究プロトコルは、2日間の適応期間と1日間の指標アミノ酸酸化（IAAO）研究日からなる3日間の実験プロトコルです。各3日間の実験プロトコルでは、参加者には3日間の参照食または3日間のテンペ食が提供されます。同じ参加者が別の3日間の実験プロトコルを開始するには、トレーサーの完全な洗い出しを確保するため、少なくとも1週間の間隔が必要です。

各適応期間中、すべての参加者には1日4回の均等な食事（朝食、昼食、夕食、スナック）が提供され、1日のエネルギーとタンパク質必要量の100％を満たします（エネルギー必要量＝安静時代謝量（REE）×1.7；タンパク質必要量＝1.0 g/kg/日×体重）。提供される食事には、タンパク質フリーのフォーミュラ（必須）、タンパク質フリーのバタースコッチクッキー（必須）、結晶アミノ酸混合物、または結晶アミノ酸混合物とテンペチップスの組み合わせが含まれます。食事は参加者が15分以内に完了する必要があります。毎日のマルチビタミンサプリメントと500 mgのコリンサプリメントも提供されます。適応日には、無糖・無クリームの紅茶またはコーヒー1杯のみが許可され、それに加えて水も摂取できます。

IAAO研究期間中、12時間の一晩の絶食後、参加者はKolej Tun Syed Nasir（KTSN）の代謝実験室に8時間滞在します。合計9回の等窒素・等カロリーの時間ごとの食事が提供され、各食事は総エネルギー必要量（REE×1.5）とタンパク質必要量（1.0 g/kg/日）の1/10を占めます。食事はタンパク質フリーのフォーミュラ（必須）、タンパク質フリーのバタースコッチクッキー（必須）、および結晶アミノ酸混合物または結晶アミノ酸混合物とテンペチップスの組み合わせで構成されます。各食事は15分以内に摂取する必要があります。提供される総食事量は、参加者のエネルギーとタンパク質必要量の90％を満たします。実験日には、毎日のマルチビタミンサプリメントと500 mgのコリンも提供されます。

1回目から4回目の食事中、参加者は提供された食事のみを摂取する必要があります。5回目の食事から、参加者は一定の経口同位体投与を受けます。最終代謝物が二酸化炭素となる必須アミノ酸であるフェニルアラニンが、酸化を測定するためのトレーサーとして使用されます。さらに、NaH13CO3（¹³C-炭酸水素ナトリウム）がプライミング投与として投与され、呼気中の13CO2（炭素13標識CO₂）が2〜3時間以内にプラトーに達するようにします。5回目の食事時に、0.176 mg/kgのNaH13CO3と0.66 mg/kgのL-[1-13C]フェニルアラニンがプライミング同位体として投与されます。5回目の食事から最後の食事まで、1.2 mg/kgのL-[1-13C]フェニルアラニンが連続的に提供されます。トレーサーとして提供されるフェニルアラニンの量（プライミング同位体を除く）は、総フェニルアラニン摂取量を30 mg/kg/日に維持するために食事提供量から差し引かれます。また、標識フェニルアラニンがチロシン必要量を満たすために水酸化されないようにするため、合計40 mg/kg/日（総芳香族アミノ酸必要量の160％）のチロシンも提供されます。5回目の食事後、呼気二酸化炭素産生率（VCO2）が間接熱量測定法を用いて15分間測定されます。

呼気サンプルの収集では、トレーサープロトコルが開始される前（すなわち、5回目の食事前）に15分ごとにサンプルを収集し、同位体定常状態に達した後（同位体投与後約2.5時間）から研究終了まで15分ごとに収集します。追加の呼気サンプルは研究終了後30分に収集されます。各呼気サンプルは、10 mLの非シリコーンコートチューブを用いて三重に収集されます。呼気中の13CO2の濃縮度は、連続流同位体比質量分析計を用いて分析され、ベースラインを超える原子パーセント超過（APE）として表されます。投与量に対するL-[1-13C]フェニルアラニン酸化からの13CO2の割合（F13CO2）が計算されます。

線形混合効果回帰モデルを使用して、参照および試験IAAO応答勾配がF13CO2測定値と対応するメチオニン摂取量から生成され、F13CO2応答の共通原点は基本メチオニン摂取量に設定されます。試験タンパク質中のメチオニンの代謝利用能（MA）は、以下の式を用いた勾配比法によって決定されます：

MA（％）＝（試験タンパク質／参照タンパク質）×100。