Metabolická dostupnost methioninu v tempehových chipsách u žen v reprodukčním věku pomocí metody oxidace indikátorové aminokyseliny (IAAO) (IAAO)

Pro předstudijní hodnocení budou účastníci muset změřit svou tělesnou hmotnost, výšku a klidový energetický výdej (REE) pomocí nepřímé kalorimetrie.

Studijní protokol je 3denní experimentální protokol skládající se ze 2 adaptačních dnů a 1 dne studie oxidace indikátorových aminokyselin (IAAO). Pro každý 3denní experimentální protokol budou účastníkům poskytnuta buď referenční dieta na 3 dny, nebo dieta s tempeh na 3 dny. Pro zahájení dalšího 3denního experimentálního protokolu pro stejného účastníka bude vyžadován minimálně 1týdenní interval, aby bylo zajištěno úplné vymytí stopovače.

Během každého adaptačního období bude každému účastníkovi podáváno 4 stejná jídla denně (snídaně, oběd, večeře a svačina), která splňují 100 % jejich denních energetických a proteinových potřeb (Energetická potřeba = Klidový energetický výdej (REE) × 1,7; Proteinová potřeba = 1,0 g/kg/den × tělesná hmotnost). Poskytovaná jídla budou zahrnovat bezproteinovou formuli (povinnou), bezproteinové máslové sušenky (povinné), směs krystalických aminokyselin nebo kombinaci směsi krystalických aminokyselin s tempeh chipsy. Účastníci by měli jídla zkonzumovat do 15 minut. Bude také poskytován denní multivitaminový doplněk a 500 mg doplněk cholinu. Kromě čisté vody je během adaptačních dnů povolen pouze jeden šálek čaje nebo kávy bez cukru nebo smetany.

Během studie IAAO, po nočním půstu 12 hodin, se účastníci zúčastní metabolické laboratoře na Kolej Tun Syed Nasir (KTSN) po dobu 8 hodin. Bude poskytnuto celkem 9 izonitrogenních a izokalorických hodinových jídel, přičemž každé jídlo přispívá 1/10 celkové energetické potřeby (REE × 1,5) a proteinové potřeby (1,0 g/kg/den). Jídla se budou skládat z bezproteinové formule (povinné), bezproteinových máslových sušenek (povinných) a buď směsi krystalických aminokyselin, nebo kombinace směsi krystalických aminokyselin s tempeh chipsy. Každé jídlo by mělo být zkonzumováno do 15 minut. Celková poskytovaná jídla splní 90 % energetických a proteinových potřeb účastníků. Během experimentálního dne bude také poskytován denní multivitaminový doplněk a 500 mg cholinu.

Během prvního až čtvrtého jídla budou účastníci muset pouze zkonzumovat poskytovaná jídla. Od pátého jídla budou účastníci dostávat konstantní perorální inkorporaci izotopu. Fenylalanin, esenciální aminokyselina, jejíž konečný metabolismus produkuje oxid uhličitý, bude použit jako stopovač pro měření oxidace. Kromě toho bude NaH13CO3 (¹³C-sodný hydrogenuhličitan) podán jako primární dávka, aby umožnil 13CO2 (oxid uhličitý značený uhlíkem-13) v dechu dosáhnout plató během 2-3 hodin. Dávka 0,176 mg/kg NaH13CO3 a 0,66 mg/kg L-[1-13C]fenylalaninu bude podána jako primární izotop během pátého jídla. Od pátého jídla až do posledního jídla bude kontinuálně poskytován 1,2 mg/kg L-[1-13C]fenylalaninu. Množství fenylalaninu poskytnutého jako stopovač (kromě primárního izotopu) bude odečteno od dietního příjmu, aby byl zachován celkový příjem fenylalaninu 30 mg/kg/den. Bude také poskytnuto celkem 40 mg/kg/den (160 % celkové potřeby aromatických aminokyselin) tyrosinu, aby bylo zajištěno, že žádný značený fenylalanin není hydroxylován pro splnění potřeby tyrosinu. Po pátém jídle bude rychlost produkce vydechovaného oxidu uhličitého (VCO2) měřena pomocí nepřímé kalorimetrie po dobu 15 minut.

Pro odběr dechových vzorků budou vzorky odebírány každých 15 minut před zahájením protokolu se stopovačem (tj. před pátým jídlem) a každých 15 minut po dosažení izotopového ustáleného stavu (přibližně 2,5 hodiny po podání izotopu) až do konce studie. Další dechové vzorky budou odebrány 30 minut po skončení studie. Každý dechový vzorek bude odebrán ve třech replikách pomocí 10 ml zkumavek bez silikonového povlaku. Obohacení 13CO2 v dechu bude analyzováno pomocí hmotnostního spektrometru s kontinuálním tokem izotopového poměru a vyjádřeno jako atomové procento nad bazální úrovní (APE). Bude vypočítán podíl 13CO2 (F13CO2) z oxidace L-[1-13C]fenylalaninu vzhledem k podanému množství.

Pomocí lineárního regresního modelu se smíšenými efekty budou generovány referenční a testovací sklony odezvy IAAO z měření F13CO2 a jejich odpovídajících příjmů methioninu, se společným počátkem odezvy F13CO2 při základním příjmu methioninu. Metabolická dostupnost (MA) methioninu v testovacím proteinu bude stanovena metodou poměru sklonů pomocí následující rovnice:

MA (%) = (Testovací protein / Referenční protein) × 100.