Metabolisk Tilgængelighed af Methionin i Tempeh Chips Blandt Kvinder i Fødedygtig Alder ved Brug af Indikator Aminosyre Oxidation (IAAO) Metode (IAAO)

Til den forundersøgende vurdering skal deltagerne måle deres kropsvægt, højde og hvileenergiomsætning (REE) ved hjælp af indirekte kalorimetri.

Studieprotokollen er en 3-dages eksperimentel protokol, der består af 2 tilpasningsdage og 1 indikatoraminosyreoxidations (IAAO) studiedag. For hver 3-dages eksperimentel protokol vil deltagerne blive givet enten en referencediæt i 3 dage eller en tempeh-diæt i 3 dage. For at påbegynde en anden 3-dages eksperimentel protokol for den samme deltager, kræves der en interval på mindst 1 uge for at sikre fuldstændig udskillelse af sporstoffet.

Under hver tilpasningsperiode vil hver deltager få 4 lige store måltider om dagen (morgenmad, frokost, aftensmad og snack), der opfylder 100 % af deres daglige energi- og proteinkrav (Energibehov = Hvileenergiomsætning (REE) × 1,7; Proteinkrav = 1,0 g/kg/dag × kropsvægt). Måltiderne vil inkludere en proteinfri formel (påkrævet), proteinfri karamel-kiks (påkrævet), et krystallinsk aminosyreblanding eller en kombination af det krystallinske aminosyreblanding med tempeh-chips. Måltiderne skal afsluttes af deltagerne inden for 15 minutter. Et dagligt multivitanintilskud og et 500 mg cholintilskud vil også blive givet. Ud over almindeligt vand er kun én kop te eller kaffe uden sukker eller fløde tilladt under tilpasningsdagene.

Under IAAO-studieperioden, efter en nattefasten på 12 timer, vil deltagerne deltage på metabolisk laboratorium på Kolej Tun Syed Nasir (KTSN) i 8 timer. I alt vil der blive givet 9 isonitrogene og isokaloriske time-måltider, hvor hvert måltid bidrager med 1/10 af det samlede energibehov (REE × 1,5) og proteinkrav (1,0 g/kg/dag). Måltiderne vil bestå af en proteinfri formel (påkrævet), proteinfri karamel-kiks (påkrævet) og enten et krystallinsk aminosyreblanding eller en kombination af det krystallinske aminosyreblanding med tempeh-chips. Hvert måltid skal indtages inden for 15 minutter. De samlede måltider vil opfylde 90 % af deltagernes energi- og proteinkrav. Under den eksperimentelle dag vil et dagligt multivitanintilskud og 500 mg cholin også blive givet.

Under første til fjerde måltid skal deltagerne kun indtage de givne måltider. Fra femte måltid vil deltagerne modtage en konstant oral isotopindlejring. Phenylalanin, en uundværlig aminosyre, hvis endelige metabolism producerer kuldioxid, vil blive brugt som sporstoffet til at måle oxidation. Derudover vil NaH13CO3 (¹³C-natriumhydrogencarbonat) blive administreret som en primeringsdosis for at lade 13CO2 (kul-13 mærket CO₂) i ånden nå et plateau inden for 2-3 timer. En dosis på 0,176 mg/kg NaH13CO3 og 0,66 mg/kg L-[1-13C]phenylalanin vil blive givet som primeringsisotopen under femte måltid. Fra femte måltid til sidste måltid vil 1,2 mg/kg L-[1-13C]phenylalanin blive givet kontinuerligt. Mængden af phenylalanin givet som sporstoffet (eksklusive primeringsisotopen) vil blive trukket fra den diætetiske forsyning for at opretholde en samlet phenylalaninindtag på 30 mg/kg/dag. I alt vil 40 mg/kg/dag (160 % af det samlede aromatiske aminosyrekrav) af tyrosin også blive givet for at sikre, at intet mærket phenylalanin hydroxyleres for at opfylde tyrosinkravet. Efter femte måltid vil den udåndede kuldioxidproduktionshastighed (VCO2) blive målt ved hjælp af indirekte kalorimetri i 15 minutter.

For åndedrætsprøveindsamling vil prøver blive indsamlet hver 15. minut før sporstofprotokollen påbegyndes (dvs. før femte måltid) og hver 15. minut efter isotopisk ligevægt er nået (ca. 2,5 timer efter isotopadministration) indtil slutningen af studiet. Yderligere åndedrætsprøver vil blive indsamlet 30 minutter efter afslutningen af studiet. Hver åndedrætsprøve vil blive indsamlet i triplikat ved hjælp af 10 mL ikke-siliconbelagte rør. Anrigheden af 13CO2 i ånden vil blive analyseret ved hjælp af et kontinuerflow-isotopforholdsmassespektrometer og udtrykt som atomprocentoverskud (APE) over basislinjen. Fraktionen af 13CO2 (F13CO2) fra L-[1-13C]phenylalanin-oxidation i forhold til den administrerede mængde vil blive beregnet.

Ved hjælp af en lineær mixed-effects regressionsmodel vil reference- og test-IAAO-responshældninger blive genereret fra F13CO2-målinger og deres tilsvarende methioninindtag, med et fælles udgangspunkt for F13CO2-responsen ved basis-methioninindtag. Den metaboliske tilgængelighed (MA) af methionin i testproteinet vil blive bestemt ved hældningsforholdsmetoden ved hjælp af følgende ligning:

MA (%) = (Testprotein / Referenceprotein) × 100.