Disponibilidad Metabólica de la Metionina en Chips de Tempeh entre Mujeres en Edad Reproductiva Utilizando el Método de Oxidación de Aminoácidos Indicadores (IAAO) (IAAO)

Para la evaluación previa al estudio, se requerirá que los participantes midan su peso corporal, altura y gasto energético en reposo (GER) mediante calorimetría indirecta.

El protocolo del estudio es un protocolo experimental de 3 días que consta de 2 días de adaptación y 1 día de estudio de oxidación de aminoácidos indicadores (OAAI). Para cada protocolo experimental de 3 días, se proporcionará a los participantes una dieta de referencia durante 3 días o una dieta de tempeh durante 3 días. Para comenzar otro protocolo experimental de 3 días para el mismo participante, se requerirá un intervalo de al menos 1 semana para garantizar la eliminación completa del trazador.

Durante cada período de adaptación, cada participante recibirá 4 comidas iguales al día (desayuno, almuerzo, cena y merienda) que cubran el 100% de sus requerimientos diarios de energía y proteína (Requerimiento energético = Gasto Energético en Reposo (GER) × 1,7; Requerimiento de proteína = 1,0 g/kg/día × peso corporal). Las comidas proporcionadas incluirán una fórmula sin proteína (obligatoria), galletas de caramelo sin proteína (obligatorias), una mezcla de aminoácidos cristalinos o una combinación de la mezcla de aminoácidos cristalinos con chips de tempeh. Los participantes deben terminar las comidas en 15 minutos. También se proporcionará un suplemento multivitamínico diario y un suplemento de colina de 500 mg. Además de agua natural, solo se permite una taza de té o café sin azúcar ni crema durante los días de adaptación.

Durante el período de estudio de OAAI, después de un ayuno nocturno de 12 horas, los participantes acudirán al laboratorio metabólico de Kolej Tun Syed Nasir (KTSN) durante 8 horas. Se proporcionarán un total de 9 comidas isonitrogenadas e isocalóricas cada hora, con cada comida aportando 1/10 del requerimiento energético total (GER × 1,5) y del requerimiento de proteína (1,0 g/kg/día). Las comidas consistirán en una fórmula sin proteína (obligatoria), galletas de caramelo sin proteína (obligatorias) y una mezcla de aminoácidos cristalinos o una combinación de la mezcla de aminoácidos cristalinos con chips de tempeh. Cada comida debe consumirse en 15 minutos. Las comidas totales proporcionadas cubrirán el 90% de los requerimientos de energía y proteína de los participantes. Durante el día experimental, también se proporcionará un suplemento multivitamínico diario y 500 mg de colina.

Durante la primera a la cuarta comida, los participantes solo deberán consumir las comidas proporcionadas. A partir de la quinta comida, los participantes recibirán una incorporación constante de isótopos orales. La fenilalanina, un aminoácido indispensable cuyo metabolismo final produce dióxido de carbono, se utilizará como trazador para medir la oxidación. Además, se administrará NaH¹³CO₃ (bicarbonato de sodio marcado con ¹³C) como dosis de carga para permitir que el ¹³CO₂ (CO₂ marcado con carbono-13) en el aliento alcance una meseta en 2-3 horas. Se administrará una dosis de 0,176 mg/kg de NaH¹³CO₃ y 0,66 mg/kg de L-[1-¹³C]fenilalanina como isótopo de carga durante la quinta comida. Desde la quinta comida hasta la última comida, se proporcionará continuamente 1,2 mg/kg de L-[1-¹³C]fenilalanina. La cantidad de fenilalanina proporcionada como trazador (excluyendo el isótopo de carga) se restará del aporte dietético para mantener una ingesta total de fenilalanina de 30 mg/kg/día. También se proporcionará un total de 40 mg/kg/día (160% del requerimiento total de aminoácidos aromáticos) de tirosina para garantizar que ninguna fenilalanina marcada se hidroxile para cubrir el requerimiento de tirosina. Después de la quinta comida, la tasa de producción de dióxido de carbono exhalado (VCO₂) se medirá mediante calorimetría indirecta durante 15 minutos.

Para la recolección de muestras de aliento, las muestras se recogerán cada 15 minutos antes de que se inicie el protocolo del trazador (es decir, antes de la quinta comida) y cada 15 minutos después de que se alcance el estado estacionario isotópico (aproximadamente 2,5 horas después de la administración del isótopo) hasta el final del estudio. Se recogerán muestras de aliento adicionales 30 minutos después del final del estudio. Cada muestra de aliento se recogerá por triplicado utilizando tubos de 10 mL sin recubrimiento de silicona. El enriquecimiento de ¹³CO₂ en el aliento se analizará utilizando un espectrómetro de masas de relación isotópica de flujo continuo y se expresará como porcentaje atómico en exceso (PAE) sobre la línea base. Se calculará la fracción de ¹³CO₂ (F¹³CO₂) de la oxidación de L-[1-¹³C]fenilalanina en relación con la cantidad administrada.

Utilizando un modelo de regresión de efectos mixtos lineales, se generarán las pendientes de respuesta de OAAI de referencia y prueba a partir de las mediciones de F¹³CO₂ y sus ingestas de metionina correspondientes, con un origen común de la respuesta de F¹³CO₂ en la ingesta base de metionina. La disponibilidad metabólica (DM) de la metionina en la proteína de prueba se determinará mediante el método de relación de pendientes utilizando la siguiente ecuación:

DM (%) = (Proteína de prueba / Proteína de referencia) × 100.