Disponibilidade Metabólica da Metionina em Chips de Tempeh Entre Mulheres em Idade Reprodutiva Utilizando o Método de Oxidação de Aminoácidos Indicadores (IAAO) (IAAO)

Para a avaliação pré-estudo, os participantes terão de medir o seu peso corporal, altura e gasto energético em repouso (GER) usando calorimetria indireta.

O protocolo do estudo é um protocolo experimental de 3 dias, consistindo em 2 dias de adaptação e 1 dia de estudo de oxidação do aminoácido indicador (OAAI). Para cada protocolo experimental de 3 dias, os participantes receberão uma dieta de referência durante 3 dias ou uma dieta de tempeh durante 3 dias. Para iniciar outro protocolo experimental de 3 dias para o mesmo participante, será necessário um intervalo de pelo menos 1 semana para garantir a eliminação completa do traçador.

Durante cada período de adaptação, cada participante receberá 4 refeições iguais por dia (pequeno-almoço, almoço, jantar e lanche) que satisfaçam 100% das suas necessidades diárias de energia e proteína (Necessidade energética = Gasto Energético em Repouso (GER) × 1,7; Necessidade proteica = 1,0 g/kg/dia × peso corporal). As refeições fornecidas incluirão uma fórmula isenta de proteína (obrigatória), bolachas de caramelo isentas de proteína (obrigatórias), uma mistura de aminoácidos cristalinos, ou uma combinação da mistura de aminoácidos cristalinos com chips de tempeh. As refeições devem ser terminadas pelos participantes em 15 minutos. Um suplemento multivitamínico diário e um suplemento de colina de 500 mg também serão fornecidos. Além de água simples, apenas uma chávena de chá ou café sem açúcar ou natas é permitida durante os dias de adaptação.

Durante o período de estudo OAAI, após um jejum noturno de 12 horas, os participantes comparecerão no laboratório metabólico do Kolej Tun Syed Nasir (KTSN) durante 8 horas. Serão fornecidas um total de 9 refeições horárias isonitrogenadas e isocalóricas, com cada refeição a contribuir com 1/10 da necessidade energética total (GER × 1,5) e da necessidade proteica (1,0 g/kg/dia). As refeições consistirão numa fórmula isenta de proteína (obrigatória), bolachas de caramelo isentas de proteína (obrigatórias) e numa mistura de aminoácidos cristalinos ou numa combinação da mistura de aminoácidos cristalinos com chips de tempeh. Cada refeição deve ser consumida em 15 minutos. As refeições totais fornecidas satisfarão 90% das necessidades energéticas e proteicas dos participantes. Durante o dia experimental, um suplemento multivitamínico diário e 500 mg de colina também serão fornecidos.

Durante a primeira à quarta refeições, os participantes só terão de consumir as refeições fornecidas. A partir da quinta refeição, os participantes receberão uma incorporação oral constante de isótopo. A fenilalanina, um aminoácido indispensável cujo metabolismo final produz dióxido de carbono, será usada como traçador para medir a oxidação. Além disso, NaH¹³CO₃ (bicarbonato de sódio-¹³C) será administrado como dose de primagem para permitir que o ¹³CO₂ (CO₂ marcado com carbono-13) no ar expirado atinja um plateau dentro de 2-3 horas. Uma dose de 0,176 mg/kg de NaH¹³CO₃ e 0,66 mg/kg de L-[1-¹³C]fenilalanina será dada como isótopo de primagem durante a quinta refeição. Da quinta refeição até à última refeição, 1,2 mg/kg de L-[1-¹³C]fenilalanina serão fornecidos continuamente. A quantidade de fenilalanina fornecida como traçador (excluindo o isótopo de primagem) será subtraída da provisão dietética para manter uma ingestão total de fenilalanina de 30 mg/kg/dia. Um total de 40 mg/kg/dia (160% da necessidade total de aminoácidos aromáticos) de tirosina também será fornecido para garantir que nenhuma fenilalanina marcada é hidroxilada para satisfazer a necessidade de tirosina. Após a quinta refeição, a taxa de produção de dióxido de carbono expirado (VCO₂) será medida usando calorimetria indireta durante 15 minutos.

Para a recolha de amostras de ar expirado, as amostras serão recolhidas a cada 15 minutos antes do início do protocolo do traçador (ou seja, antes da quinta refeição) e a cada 15 minutos após o estado estacionário isotópico ser atingido (aproximadamente 2,5 horas após a administração do isótopo) até ao final do estudo. Amostras adicionais de ar expirado serão recolhidas 30 minutos após o final do estudo. Cada amostra de ar expirado será recolhida em triplicado usando tubos de 10 mL não revestidos com silicone. O enriquecimento de ¹³CO₂ no ar expirado será analisado usando um espectrómetro de massa de razão isotópica de fluxo contínuo e expresso como percentagem atómica em excesso (PAE) sobre a linha de base. A fração de ¹³CO₂ (F¹³CO₂) da oxidação de L-[1-¹³C]fenilalanina em relação à quantidade administrada será calculada.

Usando um modelo de regressão de efeitos mistos lineares, as inclinações de resposta OAAI de referência e teste serão geradas a partir das medições de F¹³CO₂ e das suas ingestões de metionina correspondentes, com uma origem comum da resposta F¹³CO₂ na ingestão base de metionina. A disponibilidade metabólica (DM) da metionina na proteína teste será determinada pelo método da razão das inclinações usando a seguinte equação:

DM (%) = (Proteína teste / Proteína referência) × 100.