지표 아미노산 산화(IAAO) 방법을 사용한 생식연령 여성에서 템페 칩의 메티오닌 대사 가용성 (IAAO)

사전 연구 평가를 위해 참가자는 체중, 키, 및 안정 시 에너지 소비량(REE)을 간접 열량 측정법을 사용하여 측정해야 합니다.

연구 프로토콜은 2일의 적응 기간과 1일의 표지 아미노산 산화(IAAO) 연구 일로 구성된 3일 실험 프로토콜입니다. 각 3일 실험 프로토콜 동안 참가자는 3일 동안 기준 식단 또는 템페 식단이 제공됩니다. 동일한 참가자에 대해 다른 3일 실험 프로토콜을 시작하려면, 추적자의 완전한 세척을 보장하기 위해 최소 1주일 간격이 필요합니다.

각 적응 기간 동안, 모든 참가자는 하루 에너지 및 단백질 요구량의 100%를 충족하는 4회의 동일한 식사(아침, 점심, 저녁, 간식)가 제공됩니다(에너지 요구량 = 안정 시 에너지 소비량(REE) × 1.7; 단백질 요구량 = 1.0 g/kg/일 × 체중). 제공되는 식사에는 단백질 무함유 포뮬러(필수), 단백질 무함유 버터스카치 쿠키(필수), 결정성 아미노산 혼합물, 또는 결정성 아미노산 혼합물과 템페 칩의 조합이 포함됩니다. 참가자는 식사를 15분 이내에 완료해야 합니다. 일일 종합 비타민 보충제와 500mg 콜린 보충제도 제공됩니다. 또한, 평범한 물 외에 설탕이나 크림 없이 차 또는 커피 한 잔만 적응 기간 동안 허용됩니다.

IAAO 연구 기간 동안, 12시간의 야간 금식 후 참가자는 Kolej Tun Syed Nasir(KTSN)의 대사 실험실에 8시간 동안 참석합니다. 총 9회의 등질소 및 등열량 시간별 식사가 제공되며, 각 식사는 총 에너지 요구량(REE × 1.5)과 단백질 요구량(1.0 g/kg/일)의 1/10을 기여합니다. 식사는 단백질 무함유 포뮬러(필수), 단백질 무함유 버터스카치 쿠키(필수), 및 결정성 아미노산 혼합물 또는 결정성 아미노산 혼합물과 템페 칩의 조합으로 구성됩니다. 각 식사는 15분 이내에 섭취해야 합니다. 제공된 총 식사는 참가자의 에너지 및 단백질 요구량의 90%를 충족시킵니다. 실험 일 동안, 일일 종합 비타민 보충제와 500mg의 콜린도 제공됩니다.

첫 번째부터 네 번째 식사 동안, 참가자는 제공된 식사만 섭취해야 합니다. 다섯 번째 식사부터, 참가자는 지속적인 경구 동위원소 투여를 받습니다. 페닐알라닌, 최종 대사가 이산화탄소를 생성하는 필수 아미노산으로, 산화를 측정하기 위한 추적자로 사용됩니다. 또한, NaH13CO3(¹³C-소디움 바이카보네이트)가 프라이밍 용량으로 투여되어 호기 중 13CO2(탄소-13 표지 CO₂)가 2-3시간 내에 정상 상태에 도달하도록 합니다. 0.176 mg/kg의 NaH13CO3와 0.66 mg/kg의 L-[1-13C]페닐알라닌이 다섯 번째 식사 동안 프라이밍 동위원소로 투여됩니다. 다섯 번째 식사부터 마지막 식사까지, 1.2 mg/kg의 L-[1-13C]페닐알라닌이 지속적으로 제공됩니다. 추적자로 제공된 페닐알라닌 양(프라이밍 동위원소 제외)은 총 페닐알라닌 섭취량을 30 mg/kg/일로 유지하기 위해 식이 제공량에서 차감됩니다. 또한 총 40 mg/kg/일(총 방향족 아미노산 요구량의 160%)의 티로신이 제공되어 표지된 페닐알라닌이 티로신 요구량을 충족시키기 위해 수산화되지 않도록 합니다. 다섯 번째 식사 후, 호기 이산화탄소 생산률(VCO2)이 간접 열량 측정법을 사용하여 15분 동안 측정됩니다.

호기 샘플 수집을 위해, 샘플은 추적자 프로토콜이 시작되기 전(즉, 다섯 번째 식사 전) 15분마다, 및 동위원소 정상 상태에 도달한 후(동위원소 투여 후 약 2.5시간) 연구 종료까지 15분마다 수집됩니다. 추가 호기 샘플은 연구 종료 30분 후에 수집됩니다. 각 호기 샘플은 10mL 비-실리콘 코팅 튜브를 사용하여 3중으로 수집됩니다. 호기 중 13CO2의 농축은 연속 흐름 동위원소 비율 질량 분석기를 사용하여 분석되며, 기준선을 초과하는 원자 백분율 과잉(APE)으로 표현됩니다. 투여된 양에 대한 L-[1-13C]페닐알라닌 산화로 인한 13CO2 비율(F13CO2)이 계산됩니다.

선형 혼합 효과 회귀 모델을 사용하여, 기준 및 검사 IAAO 반응 기울기가 F13CO2 측정값과 해당 메티오닌 섭취량으로부터 생성되며, F13CO2 반응의 공통 원점은 기본 메티오닌 섭취량에서 설정됩니다. 검사 단백질에서 메티오닌의 대사 가용성(MA)은 다음 방정식을 사용한 기울기 비율 방법으로 결정됩니다:

MA (%) = (검사 단백질 / 기준 단백질) × 100.